α-GalCer調(diào)控抗原Ag85B優(yōu)勢誘導(dǎo)骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)的研究.pdf

1、研究目的：比較不同結(jié)核桿菌抗原在誘導(dǎo)活動(dòng)性骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用，選出優(yōu)勢誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞免疫的抗原，并進(jìn)一步觀察iNKT細(xì)胞激活劑α半乳糖神經(jīng)酰胺（α-GalCer）刺激優(yōu)勢抗原誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞免疫反應(yīng)應(yīng)答。
　　研究方法：1.采集活動(dòng)性骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者，潛伏性結(jié)核感染者及健康對(duì)照者外周血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組血清中的IFN-γ、IL-2、IL-4及 IL-10濃度，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）中

2、的CD4+IFN-γ+細(xì)胞進(jìn)行檢測。2.分別將抗原Ag85B、ESAT-6、CFP-10及PPD加入活動(dòng)性骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者PBMC中刺激培養(yǎng)，檢測各組IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10水平和CD4+IFN-γ+細(xì)胞比例，定量PCR及免疫印跡檢測轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3的表達(dá)。3.將Ag85B抗原和α-GalCer加入活動(dòng)性骨關(guān)節(jié)結(jié)核患者外周血單個(gè)核淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)，檢測各組IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-

3、10的濃度以及CD4+IFN-γ+細(xì)胞比例，并采用Real time-PCR及Western blot對(duì)JAK/STAT通路各蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測。
　　研究結(jié)果：1.與潛伏性結(jié)核感染組和健康對(duì)照組相比，活動(dòng)性骨關(guān)節(jié)結(jié)核組血清IFN-γ、IL-2水平和CD4+IFN-γ+細(xì)胞比例顯著降低（P＜0.05），而 Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10水平卻顯著升高（P＜0.01）。2.Ag85B抗原組和ESAT-6抗原組IFN-γ濃度明

4、顯高于PPD組（P＜0.01），而CFP-10抗原組IFN-γ濃度與PPD刺激組沒有顯著差異（P>0.05）；IL-2水平方面，Ag85B組濃度高于PPD組（P＜0.01），而 ESAT-6組和CFP-10組與PPD組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；三種實(shí)驗(yàn)抗原（Ag85B、ESAT-6及CFP-10）與PPD組相比IL-4、IL-10水平差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；Ag85B組CD4+IFN-γ+細(xì)胞比例和T-bet水平較

5、其他組高（P＜0.05），而 GATA-3水平差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。3.α-GalCer/Ag85B刺激組Th1類細(xì)胞因子（IFN-γ、IL-2）分泌明顯升高（P＜0.05），而Th2類細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）降低（P＜0.05）；α-GalCer/Ag85B刺激組分泌IL-12增多（P＜0.05）；α-GalCer/Ag85B刺激組可以明顯上調(diào)PBMC細(xì)胞內(nèi)Jak2、Tyk2、STAT1和STAT4的表達(dá)水平，對(duì)J