我國(guó)東北地區(qū)野生鳥類感染雞貧血病毒的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S13390學(xué)位論文我國(guó)東北地區(qū)野生鳥類感染雞貧血病毒的分子指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：流行病學(xué)研究劉婉思曾祥偉副教授東北林業(yè)大學(xué)王笑梅研究員哈爾濱獸醫(yī)研究所碩士2013年4月東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：論文答辯日期：授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：素夕厶櫛素大學(xué)生理學(xué)2013年6月2013年6月摘要摘要雞貧血病毒(ChickenAnemiaVirus，CAV)是雞傳染性貧血(C

2、IA)的病原，主要感染雛雞，引起以雞群死亡率升高，再生障礙性貧血，骨髓黃化，胸腺等淋巴器官萎縮為特征的免疫抑制性傳染病。以往CAV的流行病學(xué)報(bào)道大多是集中在家禽，而有關(guān)野生鳥類感染的數(shù)據(jù)極少。1998年，有日本學(xué)者發(fā)現(xiàn)CAV可以感染鵪鶉、鴿子和烏鴉，說明雞并不是CAV的唯一宿主。野生鳥類生存環(huán)境范圍比較大，而且每年都會(huì)發(fā)生遷徙，如果野生鳥類也可感染和攜帶CAV，就為該病更快速更大范圍的傳播提供了可能條件，導(dǎo)致CAV的防控更加困難。為研究

3、野生鳥類感染或攜帶CAV情況，本實(shí)驗(yàn)于201卜2012年從我國(guó)東北地區(qū)一些主要的野生動(dòng)物疫源疫病監(jiān)測(cè)站和鳥類環(huán)志站收集到野生鳥類樣品共1199份，其中野生水禽以野鴨為主，共604份；陸生鳥類以雀形目的小型鳥為主，共595份。應(yīng)用特異性PCR方法對(duì)收集樣本進(jìn)行了CAV感染情況的初步檢測(cè)。隨后將陽性樣品接種在MDCC—MSBI細(xì)胞上進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng)，并應(yīng)用特異性間接免疫熒光法(IFA)和特異性PCR方法對(duì)所分離的病毒進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，最后對(duì)鑒

4、定為陽性的CAV分離株進(jìn)行整個(gè)編碼區(qū)的克隆和測(cè)序，并與GenBank上已發(fā)表的國(guó)內(nèi)外CAV參考株進(jìn)行了序列比對(duì)和分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所有野生鳥類樣品的CAVPCR陽性檢出率為534％，其中野鴨陽性率為927％，小型鳥陽性率為134％。野生鳥類感染CAV：不具明顯的季節(jié)性，不同物種野鳥的CAVPCR陽性檢出率不同。其中野鴨中以青頭潛鴨、綠翅鴨陽性檢出率最高；小型鳥中以淡腳柳鶯陽性檢出率最高。經(jīng)MSBI細(xì)胞分離培養(yǎng)及間接免疫熒光鑒定，成功分

5、離到野生鳥類CAV毒株14株，其中7株來自于野鴨，另7株來自于小型鳥，并對(duì)其分別命名。測(cè)序結(jié)果顯示14株分離株編碼區(qū)全長(zhǎng)大小均為1823bp，無堿基的插入或缺失。VPI大小為1350bp，編碼了449個(gè)氨基酸：VP2大小為651bp，編碼了216個(gè)氨基酸：VP3大小為366bp，編碼了121個(gè)氨基酸。序列分析表明，14株分離株之間的核苷酸同源性在982％100％之間，野鴨分離株中有3株序列相同，其中硼DNEll0502株與其它分離株相比

6、變異相對(duì)較大，而7株小型鳥分離株序列完全相同。分離株與德國(guó)標(biāo)準(zhǔn)毒株CuxI等國(guó)內(nèi)外參考株的整個(gè)編碼區(qū)核苷酸同源性為952％999％，氨基酸同源性為881％998％，且均與國(guó)內(nèi)毒株harbin同源性最高。遺傳進(jìn)化關(guān)系顯示，所有CAV毒株分為兩大分支，本實(shí)驗(yàn)所分離的14株野生鳥類毒株均處在同一大分支上，均與國(guó)內(nèi)毒株harbin、C14親緣關(guān)系較近；與另一分支上的澳大利亞毒株CAU2697、3177親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。本研究從野生鳥類中分離出CAV