S11菌體酶工業(yè)培養(yǎng)條件的研究和優(yōu)化.pdf

1、L-半胱氨酸是一種重要的含硫氨基酸，廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品以及飼料工業(yè)。本課題組在前期工作中已從富含DL-ATC(DL-2-氨基-Δ2-噻唑啉-4-羧酸)的環(huán)境中篩選到一株可轉(zhuǎn)化DL-ATC合成L-半胱氨酸的菌株S11，并且已經(jīng)利用形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征對(duì)11號(hào)菌株進(jìn)行了初步分類鑒定，結(jié)果表明該菌株可能屬于微球菌屬能夠利用DL-ATC轉(zhuǎn)化合成L-半胱氨酸的一個(gè)亞種。 本論文主要從產(chǎn)物的鑒別、菌株生長(zhǎng)及產(chǎn)酶條件的優(yōu)化等方面

2、進(jìn)行了研究，研究結(jié)果如下： 建立L-半胱氨酸產(chǎn)物定性、定量檢測(cè)方法(紙層析法、DTNB顯色法)和菌株酶活力的檢測(cè)方法(酸式茚三酮法、結(jié)晶法)。通過(guò)考察優(yōu)化了菌株的培養(yǎng)條件和產(chǎn)酶條件。 通過(guò)對(duì)菌株的培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，11號(hào)菌株生長(zhǎng)最適碳源為葡萄糖，最適氮源為尿素，并采用minitab軟件的Placket-Burman設(shè)計(jì)法和二次響應(yīng)面分析法對(duì)種子培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，得到了主要影響因素及其最佳水平值：葡萄糖19.216g/L，尿素4.0

3、09g/L，轉(zhuǎn)速133.910 r/min，在優(yōu)化條件下經(jīng)搖瓶培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明細(xì)胞生長(zhǎng)量比優(yōu)化前提高了16.9％。 通過(guò)對(duì)搖瓶培養(yǎng)產(chǎn)酶條件的研究發(fā)現(xiàn)，DL-ATC對(duì)酶的產(chǎn)生具有誘導(dǎo)作用，11號(hào)菌株以葡萄糖為碳源，尿素為氮源時(shí)生長(zhǎng)量和酶活力最高，產(chǎn)酶最適溫度為30℃，最佳初始pH為7.5。采用Placket-Burman設(shè)計(jì)法和二次響應(yīng)面分析法對(duì)產(chǎn)酶培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，得到了主要影響因素及其最佳水平值：葡萄糖27.6g/L，DL-ATC7