MEPE-OF45,SERPINB2及RB相關(guān)性研究.pdf

1、細(xì)胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白/成骨細(xì)胞/骨細(xì)胞因子45(Matrix ExtracellularPhosphoglycoprotEin/Osteoblast/Osteocyte Factor45，MEPE/OF45)自2000年被首次克隆以來(lái)，作為小型的N—端連接整合素的糖蛋白(Small Integrin—BindingLigand，N—linked Glycoprotein，SIBLING)家族的一員，它的功能研究就一直局限在調(diào)節(jié)骨代謝和磷

2、(體內(nèi))平衡方面。
　　 近年來(lái)，本實(shí)驗(yàn)室及其國(guó)外合作實(shí)驗(yàn)室的前期研究揭示了MEPE/OF45蛋白的新功能，即MEPE/OF45參與細(xì)胞DNA損傷應(yīng)答；MEPE/OF45能夠增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)DNA損傷誘導(dǎo)劑(DNA Damage Inducers)的耐受性。本實(shí)驗(yàn)室在用基因表達(dá)譜芯片研究MEPE/OF45功能過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)MEPE/OF45能夠抑制細(xì)胞凋亡，并且MEPE/OF45的高表達(dá)伴隨著SERPlNB2[Serine(or cys

3、teine)proteinase inhibitor，clade type—2]及SERPINB2相關(guān)蛋白R(shí)B(retinoblastoma)的高表達(dá)。因此，研究三者之間可能的調(diào)控關(guān)系對(duì)揭示MEPE/OF45的抗輻射及抗凋亡功能具有重要意義。
　　 在本研究中我們獲得了以下的結(jié)果：(1)原核表達(dá)了SerpinB2基因、純化了SERPINB2和MEPE/OF45的融合蛋白，并用純化的蛋白免疫小鼠制備了抗SERPINB2和抗MEPE

4、/OF45的多克隆抗體，用ELISA測(cè)定抗體的效價(jià)可達(dá)1：20000，Western印跡表明抗體的特異性較好；(2)構(gòu)建了SerpinB2—siRNA載體，篩選得到2條SerpinB2—siRNA，可對(duì)293T細(xì)胞內(nèi)源性SERPINB2的表達(dá)有抑制作用：(3)用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)MEPE/OF45、microRNA抑制MEPE/OF45的表達(dá)及siRNA敲低SERPINB2的表達(dá)，研究了MEPE/OF45與SERPINB2和RB在蛋白水平的