版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、肺癌居全球腫瘤發(fā)病死亡原因的首位。盡管目前的診斷和治療方案有很大的改善,但是處于不同臨床階段的肺癌病人的5年生存率仍為15%左右,這可能是由于其高轉(zhuǎn)移潛能所致。目前,肺癌具有2種主要類型,即小細(xì)胞肺癌(small cell lung carcinoma,SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancers, NSCLC),當(dāng)前肺癌的大多數(shù)病例是NSCLC,其占所有肺癌病例的85%左右。長期抽煙人群是肺癌發(fā)生的
2、主要原因(80-90%),而非吸煙者大約占10-15%,這可能是由于遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果。在所有的治療方案中,化療對NSCLC僅有微小的效果,但受劑量相關(guān)的毒性限制。興起的分子靶向治療對改善肺癌病人的生存率方面發(fā)揮關(guān)鍵的作用,同時(shí)新的分子靶點(diǎn)也被鑒定,這為肺癌病人的治療帶來新的希望。最為重要的是,肺腺癌容易在不同的器官中形成遠(yuǎn)端的大的轉(zhuǎn)移灶,這為肺腺癌患者的治療帶來新的挑戰(zhàn)。因此開發(fā)新的有效的治療方案和尋找早期肺腺癌的診斷標(biāo)
3、記仍是全球科研工作者共同關(guān)注的焦點(diǎn)。
Pim-3,作為一個(gè)新的癌基因,最初是在大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞系 PC12細(xì)胞中通過膜的去極化或毛喉素誘導(dǎo)而鑒定出來的一個(gè)新基因,被命名為去極化誘導(dǎo)的激酶 KID-1。然而,由于 KID-1與前病毒整合位點(diǎn)莫羅尼鼠白血病病毒(Provirus integrating site Moloney murine leukemia virus,Pim)家族蛋白具有高度的序列相似性,因而重新命名為Pim
4、-3。Pim-3主要定位于人類染色體22q13,其開放閱讀框編碼326個(gè)氨基酸,分子量為35861。人類Pim-3蛋白分別和Pim-1和Pim-2的氨基酸相似度為57.1%和44.0%,和其它物種Pim激酶的相似度分別為大鼠95.0%,小鼠95.0%,鵪鶉Pim73.9%和非洲爪蟾Pim-168.7%。在不同的人類組織中均發(fā)現(xiàn)有Pim-3 mRNA的表達(dá),包括心臟、腦、肺、腎臟、脾臟、胎盤、骨骼肌和外周血白細(xì)胞。然而,在結(jié)腸、胸腺、肝臟
5、和小腸中未見Pim-3 mRNA的表達(dá)。最近越來越多的研究表明,Pim-3與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),其可能成為腫瘤治療的潛在分子靶點(diǎn)。許多人類 Ewing家族的腫瘤細(xì)胞系中均有Pim-3 mRNA的表達(dá)。此外,在鼻咽癌細(xì)胞系中也發(fā)現(xiàn)Pim-3 mRNA的過表達(dá)。此外,研究表明,Pim-3在正常成人內(nèi)胚層來源的器官中幾乎不表達(dá),如肝臟、胰腺、結(jié)腸和胃,然而,當(dāng)這些器官發(fā)生病變或惡性損傷時(shí),Pim-3的表達(dá)增強(qiáng)。Pim-3在這些腫瘤中幾乎均
6、定位于細(xì)胞質(zhì)中。在肝臟中,Pim-3蛋白在再生結(jié)節(jié)和腺瘤樣增生以及癌旁組織中有表達(dá),而且檢測表達(dá)的頻率顯著高于肝癌細(xì)胞。在結(jié)腸和胃癌中也具有相似的研究,如Pim-3蛋白的表達(dá)在腺瘤組織中比腺癌組織具有更高的發(fā)生率。這些研究表明,異常的Pim-3的表達(dá)可能發(fā)生在腫瘤發(fā)生的早期階段,進(jìn)而可能成為腫瘤發(fā)生早期的檢測的分子標(biāo)記。
此外,Pim-3在腫瘤中發(fā)揮生物學(xué)機(jī)制的作用形式多種多樣。來自胰腺癌和結(jié)腸癌的研究表明,增加Pim-3的表
7、達(dá)能增加Ser112位的Bad的磷酸化的總量,而Pim-3 shRNA作用后降低Ser112位的Bad的磷酸化的總量,因而,Pim-3可能抑制這些腫瘤細(xì)胞凋亡并最終導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。研究表明,Pim-3 shRNA能顯著誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡,并降低磷酸化的STAT3(Tyr705)(Signal transducers and activators of transcription3),Bcl-XL和pBad(Ser112)的表達(dá)水平,表明P
8、im-3表達(dá)下調(diào)通過降低 STAT3的磷酸化水平抑制肝癌細(xì)胞的增殖。此外,Pim-3與腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)具有十分重要的關(guān)系,TNF-α能增強(qiáng)Pim-3 mRNA的穩(wěn)定性,而下調(diào)Pim-3的表達(dá)阻止TNF-α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞的形成,這些結(jié)果表明Pim-3在TNF-α誘導(dǎo)的血管生成中發(fā)揮重要的作用。這些機(jī)制的研究充分顯示Pim-3在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的重要性,因而可能成為腫瘤治療的新的分子靶
9、點(diǎn)。
然而,迄今為止,關(guān)于Pim-3在肺腺癌發(fā)生、發(fā)展及進(jìn)展中的分子機(jī)制尚不清楚,因此,在本研究中,我們利用免疫組織化學(xué)方法檢測肺腺癌組織和正常組織中 Pim-3蛋白的表達(dá),分析其表達(dá)與肺腺癌病人臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系,并采用Western blotting進(jìn)一步驗(yàn)證肺腺癌組織和正常組織中Pim-3蛋白的表達(dá),初步闡明其在肺腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。進(jìn)一步我們通過 siRNA介導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞中Pim-3表達(dá)下調(diào),分析其對其
10、表達(dá)下調(diào)對肺腺癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和凋亡的影響,并檢測STAT3信號途徑的活化狀態(tài),分析該信號途徑中下游靶基因表達(dá)的變化,初步揭示Pim-3在肺癌發(fā)生發(fā)展中的可能的分子機(jī)制,該研究為進(jìn)一步以 Pim-3為靶點(diǎn)的肺腺癌病人的分子靶向治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)證據(jù)。
方法
?。?)采用免疫組織化學(xué)方法檢測97例正常肺組織以及97例肺腺癌組織中Pim-3蛋白的表達(dá),并分析Pim-3蛋白的表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系。
11、?。?)采用Western blotting檢測隨機(jī)選取的4例肺腺癌組織和相對應(yīng)的正常組織中Pim-3蛋白的表達(dá)。
?。?)采用脂質(zhì)體2000將對照siRNA(100 nM)和Pim-3 siRNA(100 nM)分別轉(zhuǎn)染肺腺癌A549細(xì)胞,將細(xì)胞分為3組,即未處理的A549細(xì)胞組、對照siRNA組和Pim-3 siRNA組,采用Western blotting檢測不同組別的肺腺癌A549細(xì)胞中Pim-3蛋白的表達(dá)。
12、(4)采用新型的 CCK-8試劑盒分析 siRNA轉(zhuǎn)染前后不同組別的肺腺癌A549細(xì)胞增殖的改變。
?。?)采用流式細(xì)胞術(shù)分析不同組別的肺腺癌 A549細(xì)胞的細(xì)胞周期以及細(xì)胞凋亡的變化。
?。?)采用Western blotting技術(shù)檢測3組不同的A549細(xì)胞中STAT3信號途徑的活化狀態(tài)及其下游靶基因p21、cyclin D1、Bcl-2和Bax的表達(dá)。
?。?)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有的數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)
13、軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x?s)表示,免疫組織化學(xué)結(jié)果采用卡方分析,多個(gè)樣本均數(shù)比較應(yīng)用單因素方差分析(One-way ANOVA),P<0.05具有顯著性。
結(jié)果
?。?)在97例肺腺癌組織中Pim-3蛋白的陽性表達(dá)例數(shù)為85例,其陽性表達(dá)率為87.63%,而97例正常組織中Pim-3蛋白的的陽性表達(dá)例數(shù)為8例,其陽性表達(dá)率為8.25%,二者之間 Pim-3蛋白的陽性表達(dá)率具有顯著性差異(X2=
14、122.456,P=0.000),這與Western blotting檢測的隨機(jī)4例肺腺癌組織和相對應(yīng)的正常組織中的結(jié)果一致。
?。?)Pim-3蛋白表達(dá)與肺腺癌病人的年齡和性別無關(guān)(P>0.05),但與肺腺癌病人的組織學(xué)分化、TNM分期、組織學(xué)分型以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切(P<0.05)。
?。?)與未處理的A549細(xì)胞和對照siRNA組相比,Pim-3 siRNA組中Pim-3蛋白的表達(dá)顯著降低(P<0.05),而未處
15、理的A549細(xì)胞和對照siRNA組相比, Pim-3蛋白的表達(dá)無差異(P>0.05)。
?。?)與未處理的A549細(xì)胞和對照siRNA組相比,Pim-3 siRNA組中肺腺癌A549細(xì)胞的增殖顯著受到抑制(P<0.05),而未處理的肺腺癌A549細(xì)胞和對照siRNA組相比,A549細(xì)胞的增殖無差異(P>0.05)。
?。?)Pim-3 siRNA組中G0/G1期的細(xì)胞數(shù)的比率(61.29±0.87%)顯著高于未處理的A5
16、49細(xì)胞(46.76±1.58%)和對照siRNA組(48.37±0.87%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=142.482,P=0.000)。此外,Pim-3 siRNA組中S期的細(xì)胞數(shù)的比率(25.05±1.22%)顯著低于未處理的A549細(xì)胞(31.55±1.11%)和對照siRNA組(31.83±0.89%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=37.756,P=0.000)。
(6)Pim-3 siRNA組中早期凋亡的細(xì)胞數(shù)比率(24
17、.39±1.20%)顯著高于未處理的A549細(xì)胞(7.02±0.60%)和對照siRNA組(7.39±0.34%),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=462.594,P=0.000),而未處理的A549細(xì)胞和對照siRNA組之間早期凋亡的細(xì)胞數(shù)比率無差異(P>0.05)。
?。?)Pim-3表達(dá)下調(diào)顯著降低肺腺癌A549細(xì)胞中STAT3的磷酸化水平,但不改變總的STAT3的表達(dá)。此外,Pim-3表達(dá)下調(diào)顯著降低肺腺癌A549細(xì)胞中cycl
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- miR-339表達(dá)對肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf
- RNAi沉默TCAB1表達(dá)對肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf
- Lyn在肺腺癌中的表達(dá)及Lyn高表達(dá)對A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf
- GRHL1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其對肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf
- 下調(diào)Annexin A3表達(dá)對肺腺癌生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制探討.pdf
- α-干擾素對人肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為和B7-H4分子表達(dá)的影響.pdf
- Pim-3在肺腺癌A549細(xì)胞及中醫(yī)不同證型肺癌組織中的表達(dá).pdf
- 間充質(zhì)干細(xì)胞缺氧條件下對A549肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響及機(jī)制初步探討.pdf
- X射線對肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)特性的作用.pdf
- 槐耳對人肺腺癌細(xì)胞A549的生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 姜黃素對肺腺癌A549細(xì)胞中SCF泛素連接酶及其生物學(xué)行為的影響.pdf
- THBS1在肺腺癌中的表達(dá)及其調(diào)節(jié)對肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf
- CD147分子在肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為中的功能和作用的研究.pdf
- nkx3.1表達(dá)下調(diào)對前列腺癌lncap細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
- 槐耳清膏對人肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制研究.pdf
- INK4a-ARF基因共轉(zhuǎn)染對肺腺癌A549細(xì)胞生物學(xué)行為及藥物敏感性的影響.pdf
- GPC5對人肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf
- shRNA沉默Annexin A2基因?qū)θ朔蜗侔┘?xì)胞A549生物學(xué)行為的影響.pdf
- 骨橋蛋白下調(diào)對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為及MMP-2表達(dá)的影響.pdf
- RUNX3基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制.pdf
評論
0/150
提交評論