下調(diào)Annexin A3表達(dá)對肺腺癌生物學(xué)行為的影響及分子機(jī)制探討.pdf

1、肺癌是我國第一大癌癥，其發(fā)病率和死亡率均居惡性腫瘤之首，嚴(yán)重危害人類健康。肺癌按組織學(xué)類型可分為鱗癌、腺癌、小細(xì)胞癌和大細(xì)胞癌。近年來，肺腺癌(lung adenocarcinoma，AdC)的發(fā)病率呈逐步上升趨勢，且患者死亡率高、預(yù)后極差。癌細(xì)胞易轉(zhuǎn)移是肺腺癌患者預(yù)后差的主要原因，因此，探尋肺腺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制及其新的治療靶標(biāo)，對于提高肺腺癌患者預(yù)后意義重大。我們前期研究中，采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定出Annexin A3(Anxa3

2、)為一個新的肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)分子，并在大量的肺腺癌臨床樣本中分析發(fā)現(xiàn)Anxa3表達(dá)與肺腺癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，Anxa3高表達(dá)是肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)因子及獨(dú)立的預(yù)后因子。然而，Anxa3在肺腺癌中發(fā)揮怎樣的生物學(xué)功能及其分子機(jī)制均未闡明。
　　本研究以肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549及LTEP-a2為研究對象，采用RNAi技術(shù)下調(diào)肺腺癌細(xì)胞中Anxa3的表達(dá)，建立穩(wěn)定敲除Anxa3表達(dá)的肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549/shAnxa3和LETP-a2/s

3、hAnxa3及相應(yīng)對照細(xì)胞系A(chǔ)549/control和LETP-a2/control。MTT實(shí)驗(yàn)及平板克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，下調(diào)Anxa3的表達(dá)可明顯抑制肺腺癌細(xì)胞A549和LETP-a2的體外生長能力。劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，下調(diào)Anxa3的表達(dá)可明顯抑制肺腺癌細(xì)胞A549和LETP-a2的遷移和侵襲能力。為進(jìn)一步分析Anxa3表達(dá)對肺腺癌生長及轉(zhuǎn)移的作用，將A549/shAnxa3和A549/control兩組細(xì)胞注射

4、至裸鼠體內(nèi)，建立裸鼠體內(nèi)成瘤模型及轉(zhuǎn)移模型。裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):與A549/control細(xì)胞相比，A549/shAnxa3細(xì)胞在體內(nèi)的成瘤能力明顯下降，形成的瘤體積明顯減小，這提示下調(diào)Anxa3表達(dá)可明顯抑制肺腺癌細(xì)胞的體內(nèi)生長能力。體內(nèi)轉(zhuǎn)移模型發(fā)現(xiàn):與A549/control細(xì)胞相比，A549/shAnxa3細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)各臟器如肺、肝、腦中形成轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)目明顯減少，這提示下調(diào)Anxa3表達(dá)能明顯抑制肺腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。為深入探

5、討Anxa3在肺腺癌中潛在的作用機(jī)制，采用Western Blot技術(shù)檢測下調(diào)Anxa3表達(dá)對肺腺癌細(xì)胞中信號通路激活及一些效應(yīng)分子表達(dá)的影響。分析發(fā)現(xiàn)，Anxa3表達(dá)下調(diào)后，A549細(xì)胞中MEK、ERK、IκBα、Akt及LTEP-a2細(xì)胞中MEK、ERK的磷酸化水平均明顯下降，而P38的磷酸化水平卻不受影響。同時，下調(diào)Anxa3表達(dá)后，A549和LTEP-a2細(xì)胞中MMP-2、N-cadherin效應(yīng)分子表達(dá)明顯下降，而E-cadh

6、erin表達(dá)增強(qiáng)。此外，通過對裸鼠體內(nèi)瘤組織中上述分子的表達(dá)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)MMP-2、N-cadherin、E-cadherin分子的表達(dá)變化與細(xì)胞系中表達(dá)變化一致。
　　綜上所述，下調(diào)肺腺癌中Anxa3表達(dá)可明顯抑制肺腺癌的生長及轉(zhuǎn)移，且可調(diào)控肺腺癌中信號通路MEK/ERK的激活，調(diào)節(jié)MMP-2、N-cadherin和E-cadherin分子的表達(dá)?？傊?，本研究不僅明確了Anxa3在肺腺癌中的生物學(xué)功能，且對其分子機(jī)制進(jìn)行了初步