己酮可可堿預(yù)處理對(duì)癲癇大鼠中腦DA能神經(jīng)元功能的改善及Nrf2-ARE通路的參與.pdf

1、癲癇(Epilepsy, EP)是一常見(jiàn)的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，癲癇發(fā)作時(shí)大腦神經(jīng)元興奮性增高及異常同步化放電，可導(dǎo)致短暫的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)，臨床主要表現(xiàn)為突然出現(xiàn)和反復(fù)發(fā)作的驚厥行為。癲癇持續(xù)發(fā)作超過(guò)30分鐘則將引起腦內(nèi)神經(jīng)元的損傷或喪失，發(fā)展為癲癇持續(xù)狀態(tài)（Status epilepticus, SE）。癲癇患者或動(dòng)物模型常伴有認(rèn)知功能障礙，主要表現(xiàn)為學(xué)習(xí)記憶能力等的下降。研究發(fā)現(xiàn)認(rèn)知行為與黑質(zhì)-紋狀體和中腦邊緣多巴胺能神經(jīng)體系密切

2、相關(guān)。而除了被廣泛熟知的谷氨酸和γ氨基丁酸，多巴胺（ dopamine, DA）也參與了癲癇的發(fā)作和傳播，如SE大鼠海馬（Hippocampus, Hip）和紋狀體DA含量減少，癲癇發(fā)作時(shí)黑質(zhì)（Substantia nigra, SN）和紋狀體多巴胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（dopamine transporter, DAT）蛋白表達(dá)下降等。因此，推測(cè)保護(hù)DA能神經(jīng)體系能夠改善癲癇發(fā)作引起的認(rèn)知功能障礙。
　　癲癇的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，有研究證實(shí)氧化

3、應(yīng)激產(chǎn)生的氧自由基連鎖反應(yīng)是癲癇發(fā)作和神經(jīng)退行性變的核心環(huán)節(jié)。氧化應(yīng)激是由于體內(nèi)氧化和抗氧化作用之間的穩(wěn)態(tài)失衡，導(dǎo)致自由基產(chǎn)生過(guò)多和（或）清除能力下降。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，自由基主要源于興奮性氨基酸和神經(jīng)遞質(zhì)的代謝。癲癇發(fā)作時(shí)神經(jīng)元的異常放電和興奮性毒性作用使腦內(nèi)活性氧自由基（Reactive oxygen species, ROS）產(chǎn)生增多，抗氧化能力減弱，過(guò)度堆積的ROS可極大的損傷神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能。同時(shí)，氧化應(yīng)激也是DA能神經(jīng)元退

4、行性變的機(jī)制之一，通過(guò)激活SN和腹側(cè)被蓋區(qū)（ventral tegmental, VTA）的抗氧化體系可改善衰老相關(guān)的DA能神經(jīng)元的功能下降。因此，針對(duì)氧化應(yīng)激在癲癇發(fā)作中的參與，提高抗氧化能力可能成為治療癲癇發(fā)作引起的DA能神經(jīng)體系功能紊亂的一種手段。
　　NF-E2相關(guān)因子2(NF-E2-related factor2, Nrf2)是細(xì)胞調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵因子，近年研究發(fā)現(xiàn)Nrf2以Nrf2-ARE信號(hào)通路介導(dǎo)并激活多種

5、Ⅱ相解毒酶和抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄，從而減輕氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞損傷，維持氧化-抗氧化系統(tǒng)在機(jī)體內(nèi)的穩(wěn)態(tài)。生理?xiàng)l件下， Nrf2位于細(xì)胞質(zhì)中與Keap1結(jié)合形成無(wú)活性的復(fù)合體。氧化應(yīng)激狀態(tài)可誘導(dǎo)Nrf2與Keap1解離而活化，活化的Nrf2由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，與抗氧化反應(yīng)元件（The antioxidant response element, ARE）結(jié)合，啟動(dòng)ARE下游的血紅素氧合酶1(Heme oxygenase1, HO-1)和依賴(lài)還原

6、型輔酶/Ⅱ醌氧化還原酶1(NADPH:quinone oxidoreductase1, NQO1)等抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)以增強(qiáng)細(xì)胞的抗氧化能力和保護(hù)細(xì)胞免受毒物損傷。研究已證實(shí)激活Nrf2-ARE信號(hào)通路可增加總蛋白和細(xì)胞核Nrf2的表達(dá)，該信號(hào)通路的中斷增加了機(jī)體對(duì)氧化應(yīng)激和有毒物質(zhì)的易感性，而上調(diào)神經(jīng)元HO-1或NQO1的表達(dá)可保護(hù)它們抵抗氧化應(yīng)激和興奮性毒性作用的損傷。近期研究表明萊菔硫烷（Sulforaphan

7、e, SF）可通過(guò)激活Nrf2-ARE信號(hào)通路改善慢性杏仁核點(diǎn)燃動(dòng)物模型癲癇發(fā)作引起的氧化應(yīng)激狀態(tài)和認(rèn)知障礙。
　　己酮可可堿（Pentoxifylline, PTX）是一種非特異性磷酸酶二酯酶抑制劑（Phosphodiesterase inhibitors, PDEI）和弱腺苷受體拮抗劑，可以快速有效的穿過(guò)血-腦屏障（Blood-brain barrier, BBB）發(fā)揮抗氧化作用和調(diào)控腦內(nèi)的各種神經(jīng)遞質(zhì)釋放。由于PTX的血液流

8、變學(xué)作用，最初常用于治療呼吸系統(tǒng)和外周血管系統(tǒng)疾病。近年有研究發(fā)現(xiàn)PTX具有神經(jīng)保護(hù)作用，可以改善中風(fēng)、腦缺血等引起的神經(jīng)行為學(xué)障礙，提高谷氨酸致海馬損傷大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，預(yù)先腹腔給予PTX可減輕SE大鼠的發(fā)作程度和海馬的神經(jīng)損傷，但其機(jī)制尚不清楚。
　　癲癇發(fā)作起病突然，需要快速終止癇性發(fā)作尤其是SE以防止腦內(nèi)相關(guān)神經(jīng)元的損傷?？诜?、肌肉注射、靜脈點(diǎn)滴等常規(guī)給藥方式導(dǎo)致藥物不能被快速吸收或操作無(wú)法立即實(shí)施，可能延遲或失去治療的

9、最佳時(shí)機(jī)，危及到病人的生命。之前的研究顯示通過(guò)鼻腔給予中重度青少年和成年癲癇患者咪達(dá)唑侖、地西泮和勞拉西泮可以有效終止癲癇發(fā)作并避免發(fā)作后的行為學(xué)改變，是一種安全易行的治療手段。目前，鼻腔給予PTX對(duì)癲癇發(fā)作是否有效尚無(wú)研究。
　　氯化鋰-匹羅卡品（lithium-pilocarpine, Li-Pc）誘發(fā)的大鼠癲癇模型具有與人類(lèi)顳葉癲癇相似的病理和臨床特征，是理想的顳葉癲癇動(dòng)物模型，適用于篩選抗癲癇藥物及探討癲癇形成機(jī)理。因此，

10、本課題以Li-Pc誘發(fā)的癲癇發(fā)作大鼠為動(dòng)物模型，觀察鼻腔給予PTX對(duì)大鼠癲癇發(fā)作和認(rèn)知行為的影響；檢測(cè)并分析與認(rèn)知行為密切相關(guān)的中腦腹側(cè)DA能神經(jīng)元的功能；分析并探討氧化應(yīng)激各指標(biāo)及Nrf2、HO-1和NQO1在觀察腦區(qū)的表達(dá)改變；檢測(cè)相關(guān)腦區(qū)cAMP的含量變化。期望所獲結(jié)果為癲癇的發(fā)病機(jī)制和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)為PTX治療癲癇提供新的給藥途徑。
　　第一部分 PTX降低Li-Pc誘發(fā)大鼠癲癇發(fā)作并改善其認(rèn)知功能障礙
　　

11、目的：探討PTX預(yù)處理對(duì)Li-Pc誘發(fā)的大鼠癲癇發(fā)作和認(rèn)知行為障礙的影響。
　　方法：以Li-Pc誘發(fā)的癲癇發(fā)作大鼠動(dòng)物模型，鼻腔或腹腔預(yù)先給予大鼠PTX；計(jì)數(shù)癲癇發(fā)作率、癲癇發(fā)作潛伏期等指標(biāo)；Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠的認(rèn)知行為；Timm染色顯示大鼠海馬CA3區(qū)苔蘚纖維出芽（Mossy fiber sprouting, MFS）；液質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS）檢測(cè)大鼠海馬DA及其代謝產(chǎn)物含量。
　　結(jié)果：
　　1一般

12、觀察：空白對(duì)照組和各藥物對(duì)照組大鼠無(wú)異常反應(yīng)。SE-in組和SE-ip組大鼠在匹羅卡品注射6min或5min后逐漸表現(xiàn)為縮瞳、輕微顫抖、豎毛、流涎、血淚、腹瀉和刻板運(yùn)動(dòng)等外周膽堿能癥狀。癲癇發(fā)作率為100％；癲癇發(fā)作潛伏期分別為11.92±3.38 min和10.77±3.52 min；85.71%（SE-in組）和80.95%（SE-ip組）的大鼠發(fā)展為癲癇持續(xù)狀態(tài)，癲癇持續(xù)狀態(tài)潛伏期分為24.07±2.17 min和25.19±4.

13、41 min。匹羅卡品注射后24h內(nèi)死亡率為9.52%。
　　己酮可可堿預(yù)處理減少癲癇發(fā)作率、減輕癲癇發(fā)作的外周膽堿能癥狀，縮短癲癇發(fā)作時(shí)間。與相應(yīng)的癲癇發(fā)作組（ SE-in、SE-ip）相比， PTX+SE-in組（23.81%）和PTX+SE-ip組（38.10%）癲癇發(fā)作率明顯降低(P<0.01)；PTX+SE-in組（33.59±6.15）和PTX+SE-ip組（28.33±5.50）平均潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01)。P

14、TX+SE-in組和PTX+SE-ip組均未出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(P<0.01)，大鼠在匹羅卡品注射后24h內(nèi)存活率100%。
　　2 Morris水迷宮
　　鼻腔給藥組：
　　Morris水迷宮的1-5天各組大鼠尋找平臺(tái)的逃避潛伏期存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01），各組實(shí)驗(yàn)大鼠找到平臺(tái)的逃避潛伏期逐日遞減；與Con-in組相比，SE-in組大鼠找到平臺(tái)的逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)（P<0.01）；與SE-in組相比， PTX+

15、SE-in組大鼠找到平臺(tái)的逃避潛伏期明顯縮短（P<0.05），接近正常水平；Con-in組、LiCl-in組和PTX-in組大鼠逃避潛伏期無(wú)明顯差異。SE-in組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)以及在目標(biāo)象限停留的時(shí)間均顯著低于Con-in組（P<0.01）；與SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠穿越平臺(tái)象限的次數(shù)以及在目標(biāo)象限停留的時(shí)間均顯著增加（P<0.01）；Con-in組、LiCl-in組和PTX-in組大鼠在空間探索實(shí)驗(yàn)中無(wú)明顯差異。

16、
　　腹腔給藥組：與SE-ip組相比，腹腔注射PTX顯著縮短了大鼠的逃避潛伏期顯著延長(zhǎng)（P<0.01）；增加了其穿越平臺(tái)的次數(shù)以和在目標(biāo)象限游泳的時(shí)間（P<0.01）。
　　3 Timm染色
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE-in組五組間CA3區(qū)的Timm染色評(píng)分（Kruskal–Wallistest,χ2=15.579, P<0.01）存在顯著差異。各組間比

17、較表明 SE-in組大鼠 Timm染色評(píng)分較 Con-in組顯著升高（P<0.01）。PTX+SE-in組大鼠Timm染色評(píng)分較SE-in組明顯降低（P<0.01）。各對(duì)照組間Timm染色評(píng)分無(wú)明顯區(qū)別。
　　腹腔給藥組：與SE-ip組相比，腹腔注射PTX也顯著改善Li-Pc誘發(fā)大鼠在海馬CA3區(qū)的的Timm染色評(píng)分（P<0.01）。
　　4 DA及其代謝產(chǎn)物
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-

18、in組、SE-in組和PTX+SE-in組五組間 Hip的 DA(F(4,22)=61.733, P<0.01)、DAPAC(DOPAC:F(4,22)=92.890, P<0.01)和HVA(HVA:F(4,22)=40.507, P<0.01)含量明顯不同。各組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，與Con-in組比較，SE-in組DA及其代謝產(chǎn)物的含量明顯下降(P<0.01)；與SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠DA、DOPAC和 HVA在Hi

19、p處分別升高了93%、216%和51%(P<0.01)。各對(duì)照組之間DA、DAPAC和HVA含量無(wú)明顯區(qū)別。
　　腹腔給藥組：與SE-ip組相比，PTX+SE-ip組大鼠DA、DOPAC和HVA在Hip腦區(qū)分別升高了86%、160%和53%(P<0.01)。
　　小結(jié)：
　　1 Li-Pc誘發(fā)的癲癇發(fā)作大鼠伴有認(rèn)知功能障礙。
　　2 PTX預(yù)處理降低Li-Pc誘發(fā)大鼠的癲癇發(fā)作并改善其認(rèn)知功能障礙。
　　3

20、 PTX預(yù)處理減少Li-Pc誘發(fā)癲癇大鼠海馬苔蘚纖維的發(fā)芽、降低DA能神經(jīng)支配的損傷。
　　4鼻腔給藥可作為治療癲癇的一種給藥途徑。
　　第二部分 PTX改善Li-Pc誘發(fā)癲癇大鼠中腦DA能神經(jīng)元的功能活動(dòng)
　　目的：探討PTX預(yù)處理對(duì)Li-Pc誘發(fā)癲癇大鼠中腦腹側(cè)（ Ventral midbrain, VM）、尾殼核(Caudate-putamen, CPu)和海馬(Hippcampus, Hip)多巴胺能神經(jīng)活動(dòng)的

21、影響。
　　方法：利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，RT-PCR）檢測(cè)大鼠VM的TH mRNA和DAT mRNA含量、免疫印跡技術(shù)分析大鼠VM、CPu和Hip TH和DAT的蛋白變化、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)測(cè)定大鼠CPu DA及其代謝產(chǎn)物的含量。
　　結(jié)果：
　　1 RT-PCR
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE-in組

22、五組間TH mRNA（one-way ANOVA, F(4,22)=72.686, P<0.01）和DAT mRNA（Kruskal–Wallistest,χ2=17.715, P<0.01）表達(dá)存在顯著差異。各組間比較表明SE-in組大鼠TH mRNA和DAT mRNA的RQ值較Con-in組分別降低了36.17%和36.89%（P<0.01）。PTX+SE-in組大鼠TH mRNA和DAT mRNA的RQ值較SE-in組分別升高了4

23、7.76%和49.51%（P<0.01），恢復(fù)到Con-in組水平。各對(duì)照組之間TH mRNA和DAT mRNA的RQ值無(wú)明顯區(qū)別。
　　腹腔給藥組：PTX+SE-ip組大鼠TH mRNA和DAT mRNA的RQ值較SE-ip組分別升高了42.40%和46.73%（P<0.01），恢復(fù)到Con-ip組水平。
　　2免疫印跡結(jié)果
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE

24、-in組五組間VM(TH:F(4,22)=144.914, P<0.01;DAT:χ2=14.314, P<0.01)、CPu(TH: F(4,22)=50.721, P<0.01; DAT:χ2=16.280, P<0.01)和 Hip(TH:F(4,22)=18.219, P<0.01;3K, DAT:χ2=17.015, P<0.01) TH及DAT與內(nèi)參的相對(duì)吸光度比值顯著不同。各組間比較表明，與Con-in組相比，SE-in組

25、大鼠TH和DAT與內(nèi)參免疫印跡條帶的相對(duì)吸光度比值在VM、CPu和Hip明顯降低(P<0.01)；與SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠TH和DAT與內(nèi)參免疫印跡條帶的相對(duì)吸光度比值在VM分別升高了282%和173%(P<0.01)，在CPu分別升高了190%和100%(P<0.01)，在Hip分別升高了63%和290%(P<0.01)，恢復(fù)至正常水平。
　　腹腔給藥組：與SE-ip組相比，PTX+SE-ip組大鼠TH和DA

26、T與內(nèi)參免疫印跡條帶的相對(duì)吸光度比值在 VM分別升高了270%和182%(P<0.01)，在CPu腦區(qū)分別升高了144%和72%(P<0.01)，在Hip分別升高了40%和205%(P<0.01)，DAT在Hip處的表達(dá)仍低于Con-ip組水平（P<0.05）。
　　3 HPLC-MS
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE-in組五組間在 CPu的 DA(F(4,22)

27、=49.223, P<0.01)、DAPAC(DOPAC:F(4,22)=29.512, P<0.01)和HVA(HVA:F(4,22)=33.023, P<0.01)含量明顯不同。各組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，與Con-in組比較，SE-in組DA及其代謝產(chǎn)物的含量明顯下降(P<0.01)；與 SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠 DA、DOPAC和 HVA在CPu處分別升高了74%、33%和68%(P<0.01)。
　　腹腔給藥組

28、：與SE-ip組相比，PTX+SE-ip組大鼠DA、DOPAC和HVA在CPu處分別升高了67%、43%和86%(P<0.01)。
　　小結(jié)：
　　1 Li-Pc誘發(fā)癲癇發(fā)作大鼠的中腦DA能神經(jīng)活動(dòng)減弱。
　　2 PTX預(yù)處理改善Li-Pc誘發(fā)癲癇發(fā)作大鼠中腦的DA能神經(jīng)活動(dòng)。
　　3鼻腔給予PTX對(duì)Li-Pc誘發(fā)癲癇發(fā)作大鼠中腦的DA能神經(jīng)活動(dòng)活動(dòng)的改善作用優(yōu)于腹腔給藥途徑。
　　第三部分 PTX對(duì)Li-

29、Pc誘發(fā)癲癇大鼠腦內(nèi)Nrf2-ARE通路的腦區(qū)特異性激活
　　目的：觀察PTX預(yù)處理對(duì)Li-Pc誘發(fā)癲癇大鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激參數(shù)、Nrf2-ARE通路和cAMP含量的影響，探討PTX對(duì)Li-Pc誘發(fā)癲癇大鼠中腦DA能神經(jīng)元保護(hù)的可能機(jī)制。
　　方法：分光光度法檢測(cè)VM和Hip氧化應(yīng)激參數(shù)（MDA、LPO、GSH和SOD）；RT-PCR測(cè)定VM和Hip的Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA和NQO1 mRNA的含量；免疫印跡分析

30、VM和Hip的Nrf2、HO-1和NQO1蛋白改變；放免法檢測(cè)VM和Hip腦組織中cAMP的水平。
　　結(jié)果：
　　1氧化應(yīng)激參數(shù)
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE-in組五組間MDA(VM:χ2=17.033, P<0.01; Hip: F(4,22)=35.598, P<0.01)、LPO(VM:χ2=16.419, P<0.01; Hip:χ2=16.6

31、93, P<0.01)、 GSH(VM:F(4,22)=66.059, P<0.01; Hip: F(4,22)=68.995, P<0.01)和 SOD(VM:F(4,22)=37.864, P<0.01; Hip: F(4,22)=12.912, P<0.01)在VM和Hip含量存在顯著不同。各組間比較表明，SE-in組大鼠MDA和LPO在VM和Hip含量比Con-in組顯著升高(P<0.01)，GSH和SOD在VM和Hip腦區(qū)含量

32、比Con-in組顯著降低(P<0.01)；與SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠MDA在VM和Hip腦區(qū)分別降低了14%和23%(P<0.01)，LPO在VM和Hip腦區(qū)分別降低了31%和30%(P<0.01)， GSH在VM和Hip腦區(qū)分別升高了78%和76%(P<0.01)，SOD在VM和Hip分別升高了25%和19%(P<0.01)。Con-in組、LiCl-in組和PTX-in組各氧化應(yīng)激指標(biāo)在觀察腦區(qū)無(wú)明顯區(qū)別。

33、　　腹腔給藥組：與SE-ip組相比，PTX+SE-ip組大鼠腦內(nèi)MDA在VM和Hip腦區(qū)分別降低了19%和23%(P<0.01)，LPO在VM和Hip腦區(qū)分別降低了24%(P<0.01)和28%(P<0.01)，GSH在VM和Hip腦區(qū)分別升高了101%和86%(P<0.01)，SOD在VM和Hip腦區(qū)分別升高了21%和22%(P<0.01)。Con-ip組、LiCl-ip組和PTX-ip組各氧化應(yīng)激指標(biāo)在觀察腦區(qū)無(wú)明顯區(qū)別。
　

34、　2 RT-PCR
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE-in組五組間Nrf-2 mRNA（VM:F(4,22)=21.305, P<0.01;Hip:F(4,22)=65.829, P<0.01）、HO-1 mRNA（VM:F(4,22)=21.598, P<0.01;Hip:F(4,22)=37.175, P<0.01）和NQO1 mRNA（VM:χ2=15.963, P

35、<0.01; Hip: F(4,22)=66.175, P<0.01）表達(dá)存在顯著差異。各組間比較表明，SE-in組大鼠Nrf2 mRNA, HO-1 mRNA and NQO1 mRNA在VM和Hip含量比Con-in組明顯降低(P<0.01)；與SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠Nrf2 mRNA, HO-1 mRNA and NQO1 mRNA在VM分別升高了60%、38%和90%(P<0.01)，在Hip較SE-in組無(wú)

36、明顯變化，仍然低于Con-in組（P<0.01）。
　　腹腔給藥組：與SE-ip組相比，PTX+SE-ip組大鼠Nrf2 mRNA, HO-1 mRNA and NQO1 mRNA在VM分別升高了50%、41%和82%(P<0.01)，在Hip較SE-ip組無(wú)明顯變化，仍然低于Con-ip組（P<0.01）。
　　3免疫印跡：
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PTX-in組、SE-in組和PTX+SE

37、-in組五組間 Nrf-2（ VM: F(4,22)=84.169, P<0.01; Hip: F(4,22)=65.157, P<0.01）、HO-1（VM: F(4,22)=71.535, P<0.01; Hip: F(4,22)=82.190, P<0.01）和NQO1（VM:χ2=17.290, P<0.01;Hip:F(4,22)=67.932, P<0.01）表達(dá)存在顯著差異。各組間比較表明，與 Con-in組相比，SE-i

38、n組大鼠Nrf2, HO-1 and NQO1在VM和Hip腦區(qū)表達(dá)明顯降低(P<0.01)；與SE-in組相比，PTX+SE-in組大鼠Nrf2, HO-1 and NQO1在VM腦區(qū)分別升高了262%(P<0.01),121%(P<0.01)和65%(P<0.01)， PTX+SE-in組大鼠Nrf2, HO-1和 NQO1在Hip腦區(qū)較SE-in組無(wú)明顯變化，仍然低于Con-in組（P<0.01）。
　　腹腔給藥組：統(tǒng)計(jì)分析

39、發(fā)現(xiàn)，與SE-ip組相比，PTX+SE-ip組大鼠Nrf2 mRNA, HO-1 mRNA and NQO1 mRNA在VM腦區(qū)分別升高了252%(P<0.01),129%(P<0.01)和36%(P<0.01)，PTX+SE-ip組大鼠Nrf2, HO-1 and NQO1在Hip腦區(qū)較SE-ip組無(wú)明顯變化，仍然低于Con-ip組（P<0.01）。
　　4 cAMP
　　鼻腔給藥組：Con-in組、LiCl-in組、PT

40、X-in組、SE-in組和PTX+SE-in組五組間cAMP含量在VM（one-way ANOVA, F(4,22)=9.829, P<0.01）和Hip（Kruskal–Wallistest,χ2=15.319, P<0.01）存在顯著差異。各組間比較表明SE-in組大鼠cAMP含量在VM和Hip處較Con-in組分別降低了29.18%和23.90%（P<0.01）；PTX+SE-in組大鼠cAMP含量在VM和Hip處較SE-in組分

41、別升高了32.47%和26.11%（P<0.01），恢復(fù)到Con-in組水平。
　　腹腔給藥組：與Con-ip組相比， SE-ip組大鼠cAMP含量在VM和Hip處分別降低了30.23%和25.84%（P<0.01）；PTX+SE-ip組大鼠cAMP含量在VM和Hip處較SE-ip組分別升高了31.90%和25.93%（P<0.01），恢復(fù)到Con-ip組水平。
　　小結(jié)：
　　1 Li-Pc誘發(fā)癲癇發(fā)作大鼠的腦內(nèi)氧化

42、損傷增加、抗氧化能力減弱。
　　2 PTX預(yù)處理特異性激活Li-Pc誘發(fā)癲癇發(fā)作大鼠中腦腹側(cè)Nrf2-ARE通路、改善癲癇大鼠腦內(nèi)的氧化應(yīng)激狀態(tài)。
　　3 PTX預(yù)處理提高Li-Pc誘發(fā)癲癇發(fā)作大鼠VM和Hip的cAMP水平。
　　4鼻腔給予PTX對(duì)氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善優(yōu)于腹腔給藥。
　　結(jié)論：
　　1 PTX預(yù)處理降低Li-Pc誘發(fā)大鼠的癲癇發(fā)作，改善其認(rèn)知功能障礙及中腦DA能神經(jīng)元的功能活動(dòng)。