遺傳性眶距過(guò)寬面部畸形患者的臨床檢查及遺傳學(xué)分析.pdf

1、顱面畸形（Craniofacial Deformity，CD）是一種影響人類頭、面、頸發(fā)育的先天性疾病，占先天性出生缺陷病的四分之三?？艟噙^(guò)寬是某些顱面畸形疾病的臨床表現(xiàn)，常伴隨其他特殊癥狀出現(xiàn)，如突眼、并趾、智力異常等。目前已知多種顱面畸形如顱面裂隙畸形、顱縫早閉癥等均可表現(xiàn)出眶距過(guò)寬，雖然染色體的變異或基因突變可引起眶距過(guò)寬相關(guān)疾病的發(fā)生，但目前其致病機(jī)制尚不清楚。
　　在詳細(xì)收集家系臨床信息的基礎(chǔ)上，本課題從染色體到基因水平

2、對(duì)兩個(gè)表現(xiàn)出遺傳性眶距過(guò)寬家系進(jìn)行了系統(tǒng)研究。通過(guò)探尋兩個(gè)家系相應(yīng)疾病的致病原因，為同類型疾病的診斷以及臨床干預(yù)治療提供理論依據(jù)，基因診斷明確后可為患者及其家庭成員進(jìn)行發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估甚至指導(dǎo)產(chǎn)前診斷。
　　第一部家系一的臨床檢查及遺傳學(xué)研究
　　1、材料和方法
　　1.1臨床檢查
　　分別采集家系一患者及正常成員的詳細(xì)病史、遺傳學(xué)信息，患者進(jìn)行必要的體格檢查及相關(guān)?？茩z查；
　　1.2全血基因組DNA提取

3、r>　　抽取家系患者及正常成員的外周血液樣本，提取全血基因組DNA；
　　1.3核型分析
　　對(duì)家系一患者進(jìn)行染色體G顯帶核型分析實(shí)驗(yàn)，觀察染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的情況；
　　1.4 aCGH檢查
　　采用微陣列比較基因組雜交技術(shù)檢測(cè)患者是否存在染色體拷貝數(shù)變異（Copy Number Variant, CNV）；
　　1.5 CNV驗(yàn)證
　　對(duì)aCGH發(fā)現(xiàn)的CNV設(shè)計(jì)相應(yīng)的引物，利用熒光定量PCR進(jìn)行了家

4、系共分離驗(yàn)證；針對(duì)缺失片段的STS區(qū)域進(jìn)行雜合性缺失分析（Loss of Heterozygosity, LOH），確定CNV的遺傳方式。
　　2、結(jié)果
　　家系一先證者主要表現(xiàn)為輕度到中度智力障礙和眶距過(guò)寬、高額頭和寬鼻根等特殊面容；患者III-3臨床表現(xiàn)與之相似但無(wú)明顯智力發(fā)育障礙。先證者有兩個(gè)哥哥，已故，均表現(xiàn)出嚴(yán)重的智力障礙和發(fā)育障礙。家系的其他成員身體均健康，智力正常。患者核型分析結(jié)果正常，aCGH檢查發(fā)現(xiàn)患者II

5、-3和III-3各自攜帶3個(gè)CNV，結(jié)合家系正常成員 aCGH結(jié)果分析和 DGV、ISCA數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，鎖定chr14q32.32q32.33的微重復(fù)和 chr17p13.3的微缺失為家系的致病 CNV。熒光定量PCR和LOH分析間接證明了這兩個(gè)CNV的致病性和遺傳途徑。
　　3、結(jié)論
　　本研究中患者同時(shí)攜帶chr14q32.32-q32.3微重復(fù)和chr17p13.3微缺失兩種拷貝數(shù)變異并表現(xiàn)出兩種綜合征的臨床特征。上述兩

6、個(gè)拷貝數(shù)變異為該家系遺傳性眶距過(guò)寬的致病原因，本研究首次發(fā)現(xiàn)患者同時(shí)攜帶這兩種 CNV并且出現(xiàn)在同一綜合征里。
　　第二部家系二的臨床檢查及遺傳學(xué)研究
　　1、材料和方法
　　1.1臨床檢查
　　分別采集家系二患者及正常成員的詳細(xì)病史、遺傳學(xué)信息，患者進(jìn)行必要的體格檢查及相關(guān)專科檢查；
　　1.2全血基因組DNA提取
　　抽取家系患者及家系其他成員的外周血液樣本，提取全血基因組DNA；
　　1.

7、3已知基因篩查
　　利用Sanger測(cè)序?qū)蜻x疾病致病基因的外顯子及其旁翼區(qū)的堿基序列進(jìn)行基因突變檢測(cè)；
　　1.4核型分析
　　對(duì)家系所有患者進(jìn)行染色體G顯帶核型分析實(shí)驗(yàn)，觀察染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的情況；
　　1.5 aCGH檢查
　　采用微陣列比較基因組雜交技術(shù)檢測(cè)患者染色體拷貝數(shù)變異情況；
　　1.6二代測(cè)序探尋致病基因
　　選取合適的樣本進(jìn)行全外顯子組測(cè)序以及分析測(cè)序數(shù)據(jù)，根據(jù)家系遺傳特征制

8、定個(gè)性化篩選策略并篩選出可能的候選基因，基于 GO的候選基因功能進(jìn)行富集分析。
　　2、結(jié)果
　　家系二連續(xù)3代均有患者表現(xiàn)出嚴(yán)重的眶距過(guò)寬的面部異常，遺傳方式呈顯性遺傳。部分患者除了明顯的眶距過(guò)寬的表現(xiàn)之外，還有其他特殊癥狀，家系其他成員身體健康。經(jīng)過(guò)已知致病基因篩查、染色體核型分析、aCGH檢查未找到相關(guān)染色體變異和致病基因突變位點(diǎn)。全外顯子組測(cè)序以及相關(guān)數(shù)據(jù)分析獲得96個(gè)候選基因， GO分析發(fā)現(xiàn)在“肽酶活性”功能和“細(xì)