大鼠腦、肝組織RNA相對表達(dá)量與死亡時(shí)間的關(guān)系.pdf

1、目的:研究大鼠腦、肝臟組織3種 RNA相對表達(dá)量與死亡時(shí)間（postmortem interval, PMI）的關(guān)系，比較兩組織用于死亡時(shí)間推斷的可能性，為RNA在死亡時(shí)間推斷方面的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:將48只Wistar大鼠隨機(jī)分為6組，斷頸處死后置于海拔2260 m、室溫12±1℃、濕度40±2％的環(huán)境中，分別于死后0 h、24 h、48 h、72 h、120 h、168 h取大鼠腦皮質(zhì)及肝右外葉。將一部分腦和肝組織

2、用4%多聚甲醛固定后進(jìn)行HE染色制片觀察。另一部分腦、肝組織提取總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time fluorescence quantitative PCR, RT-qPCR）技術(shù)檢測兩組織中miRNA（腦特異性 miR-124、肝特異性 miR-122）及甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）、β-肌動(dòng)蛋白（β-actin） mRNA

3、的循環(huán)閾值（cyclic threshold, Ct）。用BestKeeper程序篩選內(nèi)參，對目的RNA的Ct值進(jìn)行2-ΔΔCt轉(zhuǎn)換，用SPSS及GraphPad軟件對其進(jìn)行單因素方差分析；并對ΔCt值進(jìn)行曲線回歸分析，構(gòu)建回歸模型。
　　結(jié)果:1、腦組織中 miR-124的標(biāo)準(zhǔn)差（standard deviation, SD）和變異系數(shù)（coefficient of variation, CV）最小，肝組織中miR-122的SD

4、和CV最小。2、腦組織GAPDH、β-actin mRNA的相對表達(dá)量2-ΔΔCt在死后72 h內(nèi)逐漸增加，并于死后72 h達(dá)到峰值，之后逐漸下降（P＜0.05）；而肝GAPDH、β-actin mRNA的相對表達(dá)量2-ΔΔCt在死后24 h內(nèi)不變，從死后48 h開始逐漸下降（P＜0.05）。3、所有目的RNA分子的ΔCt值與PMI的最適回歸模型均為三次模型，且肝組織的相關(guān)系數(shù)r大于腦組織。最適模型的回歸方程分別為：y腦GAPDH mR

5、NA=3.280-0.028x+2.343×10-4x2-5.440×10-7x3，y腦β-actin mRNA=4.231-0.039 x+3.985×10-4x2-1.103×10-6x3，y肝 GAPDH mRNA=4.965-4.460×10-3x+4.328×10-4x2-1.666×10-6x3，y肝β-actin mRNA=5.660-0.019x+6.064×10-4x2-1.947×10-6x3。
　　結(jié)論:1、

6、通過內(nèi)參篩選，認(rèn)為miR-124和miR-122可以分別作為腦、肝組織的內(nèi)參。
　　2、在海拔2260 m、溫度12±1℃、濕度40±2%的條件下，大鼠腦組織中GAPDH、β-actin mRNA的相對表達(dá)量2-ΔΔCt在死后72 h內(nèi)逐漸增加，并在72 h達(dá)到高峰，之后逐漸下降；大鼠肝組織中GAPDH、β-actin mRNA的相對表達(dá)量2-ΔΔCt在死后24 h內(nèi)不變，從死后48 h開始逐漸下降，肝組織比腦組織更適用于死亡時(shí)間