慢病毒介導(dǎo)的CYP17A1基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響.pdf

1、目的：檢測(cè)不同病理級(jí)別膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1的表達(dá)，及CYP17A1和AR共表達(dá)的意義。建立CYP17A1基因沉默膠質(zhì)瘤細(xì)胞株，并研究CYP17A1基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響，為進(jìn)一步研究雄激素信號(hào)通路在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的作用奠定了基礎(chǔ)。
　　方法：①采用免疫組化、Real time-PCR、Western blot實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)55例膠質(zhì)瘤組織及10例正常腦組織中 CYP17A1的表達(dá)情況。②采用免疫組化的方法檢測(cè)

2、CYP17A1及AR在膠質(zhì)瘤組織中的共表達(dá)。③通過(guò)慢病毒包裝的CYP17A1特異性shRNA表達(dá)載體，建立CYP17A1表達(dá)沉默的細(xì)胞株，并通過(guò)Real time-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)該細(xì)胞株中CYP17A1的mRNA的表達(dá)情況。④通過(guò)Western blot、CCK-8、Transwell細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)等方法檢測(cè) CYP17A1基因沉默對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。
　　結(jié)果：①與正常腦組織相比，在膠質(zhì)瘤組

3、織中 CYP17A1基因在蛋白質(zhì)水平和mRNA水平的表達(dá)量明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。② CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質(zhì)瘤組織明顯高表達(dá)，在正常組織中不表達(dá)或低表達(dá)，并隨著病理級(jí)別升高而表達(dá)增強(qiáng)（P<0.05）。③成功建立CYP17A1基因沉默細(xì)胞株，并用Real time-PCR檢測(cè)T98G-CYP17A1組與空白對(duì)照組及空質(zhì)粒組CYP17A1mRNA的表達(dá)，T98G-CYP17A1組的 CYP17A1的 mRNA

4、表達(dá)水平明顯降低（F=15.44，P<0.05）。④與空白對(duì)照組和空質(zhì)粒組相比，T98G-CYP17A1組膠質(zhì)瘤細(xì)胞在增殖水平、侵襲和遷移能力均明顯下降，細(xì)胞凋亡明顯增加；T98G-CYP17A1異位移植瘤的裸鼠皮下成瘤能力明顯弱于空白對(duì)照組及空質(zhì)粒組（P<0.05）。
　　結(jié)論：①在膠質(zhì)瘤組織中CYP17A1在蛋白質(zhì)和mRNA水平的表達(dá)量明顯高于正常腦組織。② CYP17A1蛋白和AR蛋白在膠質(zhì)瘤組織中高表達(dá)提示雄激素通路參與了