藍莓營養(yǎng)成分及其改善大鼠肝纖維化機制中組蛋白乙?；揎椀难芯?pdf

1、第一部分貴州麻江藍莓營養(yǎng)成分的研究
　　目的：
　　1.探討2016年貴州麻江藍莓營養(yǎng)成分，并比較與10年前同品種藍莓營養(yǎng)成分的比較的情況。
　　方法:
　　以直接滴定法、索氏脂肪提取器測定法、分光光度法及酸堿滴定法分別對藍莓中的糖、脂肪、蛋白質及酸進行檢測；以反向色譜分離法、酸性滴定法、正向色譜分離法、反向色譜分離法分別對藍莓中維生素A、C、D、E的含量進行檢測；改良的Marklund方法（改良的鄰苯三酚自氧化

2、法）檢測SOD含量；以溶劑浸提法提取后高效液相色譜法（HPLC-MS）對藍莓花青素進行鑒定。
　　結果：
　　貴州省麻江縣2016年種植的圓藍品種的藍莓蛋白質、總糖的含量以及糖酸比均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）,而脂肪、總酸的含量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。與2007年比較，2016年貴州省麻江縣種植的圓藍品種的SOD，藍莓花青素、維生素C、維生素E的含量有顯著性增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.0

3、5），而維生素A、維生素D的含量無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；與2007年比較，2016年藍莓中所含的Na+、Ca2+均顯著性增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而K+及Mg2+的含量無差異，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：
　　研究表明，貴州省麻江圓藍品種藍莓具有較高營養(yǎng)價值，種植10年后藍莓的三大營養(yǎng)物質成分含量有所降低，與當年降雨量增多及果樹樹齡增大有關；麻江圓藍藍莓中的花青素、維生素C、

4、維生素E的含量較高，且明顯高于2007年栽種初產(chǎn)果實中相關指標的含量，這與藍莓成熟后花青素富集及成熟藍莓鮮果中鈉、鈣離子水平增加對藍莓花青素穩(wěn)定性增加而發(fā)生的增色效應有關。
　　第二部分藍莓對肝纖維化大鼠肝臟組蛋白乙酰化修飾及細胞外基質的影響
　　目的：
　　探討藍莓對四氯化碳（CCl4）致大鼠肝纖維化后大鼠血清的肝功能、肝纖維化三項，肝組織中細胞外基質及組蛋白乙酰化修飾 acH3K9、acH3K14、acH3K18位

5、點修飾水平的影響。
　　方法:
　　50只雄性SD大鼠，180±20g，隨機分為對照組（Control group）、模型組（Hepatic Fibrosis group）、藍莓治療組（Blueberry Treatment group）、藍莓預防組（Blueberry Prevention group）、自然恢復組（Natural Recovery group），每組10只。除正常組外，其余各組用40%CCl4花生油溶液0

6、.3 mL/100 g皮下注射，間隔三天注射一次以制備大鼠肝纖維化模型，正常組大鼠皮下注射等量花生油溶液，實驗12周末處死正常組與肝纖維化組大鼠，實驗16周末處死剩余組大鼠；取各組大鼠血清檢測其肝功能、肝纖維化三項指標；取各組大鼠肝臟，測定肝臟指數(shù)；取左肝葉組織常規(guī)固定，HE染色、Masson染色觀察組織病理改變情況；蛋白質免疫印跡法（Western blot，WB）檢測并比較各組大鼠右肝葉組織α-SMA、TIMP-1、Ⅰ型膠原表達情況

7、和acH3K9、acH3K14、acH3K18修飾水平變化。
　　結果：
　　1.關于肝指數(shù)，與正常組比較，肝纖維化組大鼠肝臟指數(shù)增加（P<0.05），與肝纖維化組比較，經(jīng)藍莓汁灌胃后，藍莓治療組與藍莓預防組大鼠的肝指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與自然恢復組比，藍莓預防組肝指數(shù)降低，有顯著性差異（P<0.05），而藍莓治療組無明顯變化，無明顯差異（P>0.05）；與藍莓治療組比較，藍莓預防組肝指數(shù)降低，有顯著性

8、差異（P<0.05）。2.根據(jù)肝纖維化分級，病理學檢查提示注射 CCl4花生油溶液的肝纖維化組大鼠肝組織內大量炎性細胞浸潤，肝臟纖維結締組織明顯增多，部分區(qū)域有假小葉形成，明顯高于正常組大鼠，Masson染色觀察提示 CCl4花生油溶液注射后，肝纖維化組大鼠肝臟中膠原等細胞外基質表達明顯增加，說明肝纖維化造模成功；與模型組比較，藍莓治療組及藍莓預防組大鼠肝臟纖維化分級顯著性降低，有顯著性差異（P<0.01）；與自然恢復組比較，藍莓預防組

9、大鼠肝臟纖維化分級顯著性降低，有顯著性差異（P<0.01），而藍莓治療組大鼠肝臟纖維化分級無明顯變化，無明顯統(tǒng)計學差異（P>0.05）。與藍莓治療組比較，藍莓預防組肝臟纖維化分級有明顯變化，有顯著性差異（P<0.05）。3.關于肝功能：（1）與正常組比較，模型組AST顯著增高（P<0.01）；與模型組比較，藍莓治療組及藍莓預防組AST顯著降低（P<0.01）；與自然恢復組比較，藍莓預防組顯著降低（P<0.01），藍莓治療組降低（P<0.

10、05）；與藍莓治療組比較，藍莓預防組有降低（P<0.05）；（2）與正常組比較，模型組 ALT顯著增高（P<0.01）；與模型組比較，藍莓治療組及藍莓預防組ALT顯著下降（P<0.01）；與自然恢復組比較，藍莓預防組ALT顯著降低（P<0.01），藍莓治療組無顯著性差異（P>0.05）；與藍莓治療組比較，藍莓預防組ALT降低（P<0.05）。3.關于肝纖維化指標，（1）與正常組比較，模型組HA顯著增高（P<0.01）；與模型組比較，藍莓

11、治療組及藍莓預防組HA顯著降低（P<0.01）；與自然恢復組比較，藍莓預防組顯著降低（P<0.01），藍莓治療組降低（P<0.05）；與藍莓治療組比較，藍莓預防組降低（P<0.05）；（2）與正常組比較，余各組大鼠LN顯著性增加（P<0.05）。（3）與正常組比較，模型組Ⅳ-C顯著增高（P<0.01）；與模型組比較，藍莓治療組及藍莓預防組Ⅳ-C顯著降低（P<0.01）；與自然恢復組比較，藍莓治療組及藍莓預防組顯著降低（P<0.05）；與

12、藍莓治療組比較，藍莓預防組降低（P<0.05）；4.與正常組比較，模型組肝組織中的α-SMA、?型膠原和TIMP-1蛋白表達均增加，有顯著性差異（P<0.01)；與模型組比較：藍莓治療組、藍莓預防組及自然恢復組肝組織中的α-SMA、?型膠原和TIMP-1表達降低，有顯著性差異（P<0.01)；與自然恢復組比較，藍莓治療組及藍莓預防組肝組織中的α-SMA、?型膠原和 TIMP-1表達降低，有顯著性差異（P<0.05)，以藍莓預防組降低較為

13、明顯。與藍莓治療組比較，藍莓預防組肝組織中的的α-SMA、?型膠原和TIMP-1表達降低。5.與正常組比較，模型組肝組織中的acH3K9、acH3K14、acH3K18修飾水平均降低，有顯著性差異（P<0.01)；與模型組比較，藍莓治療組、藍莓預防組及自然恢復組肝組織中的acH3K9、acH3K14、acH3K18修飾水平均升高，有顯著性差異（P<0.01)；與自然恢復組比較，藍莓治療組及藍莓預防組的acH3K9、acH3K14、acH

14、3K18修飾水平均升高，有顯著性差異（P<0.05)，以藍莓預防組升高較為明顯。與藍莓治療組比較，藍莓預防組肝組織中的acH3K9、acH3K14、acH3K18修飾水平升高。
　　結論：
　　證實了口服藍莓可以顯著改善肝纖維化病理改變，降低血清肝功能指標ALT、AST及血清肝纖維化相關指標，改善肝臟內細胞外基質沉積和代謝，預防性使用藍莓對肝纖維化的改善作用更好。acH3K9、acH3K14、acH3K18組蛋白乙?；揎椄?/p>

15、變可能參與了肝纖維化的發(fā)生及發(fā)展，并與藍莓改善肝纖維化發(fā)生機制有關。
　　第三部分藍莓提取的花青素在體外對激活型大鼠肝星狀細胞株組蛋白乙?；揎椀挠绊懞驮鲋车蛲龅淖饔?br>　　目的：
　　探討藍莓花青素對大鼠肝星狀細胞株（HSCs-T6）增殖與凋亡的影響，并對藍莓花青素處理后的HSCs-T6細胞外基質蛋白及組蛋白乙?；揎梐cH3K9、acH3K14、acH3K18位點修飾水平的影響。
　　方法:
　　采用藥理

16、學的方法提純藍莓中的花青素。HSCs-T6常規(guī)復蘇培養(yǎng)后，分別加入藍莓花青素50ug/mL、100ug/mL、150ug/mL、200ug/mL。使用實時無標記細胞分析儀(RTCA xCELLigence)動態(tài)觀察不同濃度藍莓花青素（50ug/mL、100ug/mL、150ug/mL、200ug/mL）處理HSCs-T672 h后細胞增殖的影響，確定合適的花青素濃度及作用時間；根據(jù)（RTCA）實驗結果選擇合適的時間后加入Annexin

17、V-FITC/PI雙染后，熒光顯微鏡下觀察不同濃度藍莓花青素處理后的HSCs-T6細胞形態(tài)變化；流式細胞儀檢測不同濃度花青素處理HSCs-T6細胞凋亡的情況；western blotting檢測藍莓花青素最適濃度處理HSCs-T6細胞36 h，細胞的α-SMA、Ⅰ型膠原及TIMP-1表達,western blotting檢測HSCs-T6細胞acH3K9、acH3K14、acH3K18修飾水平變化。
　　結果：
　　與對照組

18、相比，不同濃度藍莓花青素處理HSCs-T6細胞36h，均能明顯抑制HSCs-T6細胞的增殖，呈劑量依賴性；濃度為50μmol/L時，HSCs-T6細胞的存活率低于50%（P<0.05）；免疫熒光實驗顯示，隨著藍莓花青素濃度增加并處理HSCs-T636 h，HSCs-T6凋亡數(shù)量逐漸增加，更多的HSCs-T6細胞核被PI染成紅色，且呈濃度依賴性。流式細胞儀檢測的凋亡實驗中，與對照組相比，不同濃度的藍莓花青素處理HSCs-T6細胞36 h,

19、隨著藍莓花青素濃度增加凋亡率增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與對照組相比，50 ug/mL濃度的藍莓花青素處理HSCs-T6細胞36h,細胞的α-SMA、Ⅰ型膠原、TIMP-1表達明顯降低（P<0.05）；與對照組相比，50 ug/mL濃度的藍莓花青素處理HSCs-T6細胞36 h,細胞的acH3K9、acH3K14、acH3K18修飾水平增加（P<0.01）；
　　結論：
　　藍莓花青素可以抑制大鼠激活型HSC細胞