Apelin抑制抵抗素誘導的H9c2心肌細胞肥大.pdf

1、目的：
　　通過Apelin干預抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大模型，檢測心肌細胞表面積大小、單細胞總蛋白合成量、實時熒光定量PCR技術檢測心肌細胞肥大標志物BNP和β-MHC的表達，研究其對抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大的影響，探索有效防治心肌細胞肥大的新方法，為其應用于臨床心力衰竭的防治提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　H9c2大鼠心肌細胞是源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的亞克隆細胞株，用含10％FBS的DM

2、EM培養(yǎng)，每2-3 d換一次培養(yǎng)液，待細胞長到70%-80%時傳代培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察，H9c2大鼠心肌細胞呈圓形或橢圓形，未見心肌搏動。取長勢良好的細胞用于實驗。將1×105個H9c2大鼠心肌細胞分別接種于6孔板內(nèi)，加入含10%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)，待細胞貼壁后，換含0.1%FBS的DMEM3 ml饑餓16 h。根據(jù)實驗目的分為4組，C組（對照組）：0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)

3、48 h。 R組（抵抗素組）：0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換抵抗素濃度為50 ng/ml的含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)48 h。 A組（抵抗素+Apelin組）：0.1%FBS的DMEM饑餓細胞后換Apelin濃度為10μmol/3 ml的含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)2 h后，換抵抗素濃度為50 ng/ml的含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)46 h。N組（抵抗素+Apelin+LKB1抑制劑組）：0.1%

4、FBS的DMEM饑餓細胞后換LKB1抑制劑（NHE）濃度為20μmol/3 ml的含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)2 h后，換Apelin濃度為10μmol/3 ml的含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)0.5 h后，換為抵抗素濃度為50 ng/ml的含0.1%FBS的DMEM3 ml培養(yǎng)45.5 h。培養(yǎng)48 h后，細胞拍照，Image J軟件分析細胞表面積；收集細胞計數(shù)，BCA法測總蛋白含量，計算單細胞總蛋白含量；實時熒光定

5、量PCR檢測心肌細胞肥大標志物BNP和β-MHC的相對表達量。
　　結(jié)果：
　　與C組相比，R組心肌細胞表面積、單細胞蛋白合成量以及心肌細胞肥大標志物的相對表達量明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），成功構(gòu)建抵抗素誘導的H9c2大鼠心肌細胞肥大模型。
　　與R組相比，A組心肌細胞表面積、單細胞蛋白合成量以及心肌細胞肥大標志物的相對表達量明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；與R組相比，N組心肌細胞表面積、單