持久性有機(jī)污染物的熒光免疫分析.pdf

1、持久性有機(jī)污染物(PersistentOrganicPollutants，簡稱POPs)是持續(xù)存在于環(huán)境中，可以通過生物食物鏈進(jìn)行積累，對人類的健康和生存造成嚴(yán)重危害的化學(xué)物質(zhì)。隨著科學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代工業(yè)技術(shù)的快速發(fā)展，釋放到環(huán)境中的POPs越來越多，使其成為一個(gè)備受人們廣泛關(guān)注的全球性的環(huán)境問題。怎樣快速、靈敏、準(zhǔn)確的檢測出化妝品、日用品、食品以及環(huán)境中存在的少量POPs，已成為了分析化學(xué)以及環(huán)境監(jiān)測中對POPs分析的一個(gè)新的挑戰(zhàn)。POP

2、s的監(jiān)測工作目前主要基于色譜、色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等大型儀器分析檢測方法，但繁重復(fù)雜的樣品前處理（包括純化、濃縮或衍生化等），昂貴的儀器以及實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求苛刻等缺點(diǎn)使這些方法不利于大批量樣品的實(shí)時(shí)分析測定。所以，發(fā)展針對POPs的快速檢測技術(shù)有著非常重要的意義。
　　本文在間接競爭酶聯(lián)免疫吸附檢測的基礎(chǔ)上用熒光分析法，建立了對八氯苯乙烯(OCS)和三（2，3-二溴丙基）異三聚氰酸酯(TBC)等POPs的快速分析方法，為POPs的檢測分

3、析提供了新的思路。具體的研究工作內(nèi)容如下:
　　(1)酶標(biāo)型熒光免疫測定TBC:利用本實(shí)驗(yàn)室首次以兔子免疫制備的TBC抗體，基于競爭型的免疫分析模式，以Ce3+為探針，辣根過氧化氫酶(HRP)為標(biāo)記構(gòu)造了測定TBC的熒光免疫分析體系。Ce4+沒有熒光而Ce3+具有比較強(qiáng)的熒光，HRP氧化過氧化氫(H2O2)可產(chǎn)生羥基自由基，羥基自由基進(jìn)而可將Ce3+氧化成為Ce4+，使得體系的熒光強(qiáng)度發(fā)生明顯猝滅。通過TBC參與的競爭反應(yīng)控制連接

4、到酶標(biāo)板上的HRP的量與羥基自由基的量，建立起Ce3+溶液的熒光強(qiáng)度與TBC的濃度的關(guān)系，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物TBC的定量檢測。該方法檢測限為6.2nM，選擇性好，有較高的靈敏度和準(zhǔn)確度，重復(fù)性好，對實(shí)際樣品回收率的測定結(jié)果令人滿意。
　　(2)利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移構(gòu)建羅丹明B標(biāo)記的熒光免疫傳感器用于OCS檢測:利用本實(shí)驗(yàn)室制備的OCS抗體，基于競爭性免疫反應(yīng)，設(shè)計(jì)了OCS的選擇性的熒光免疫分析方法。CdTe量子點(diǎn)的發(fā)射峰在530nm，羅丹

5、明B的吸收峰是530nm;在PBS中，巰基乙酸包裹的CdTe量子點(diǎn)表面帶負(fù)電荷，羅丹明B標(biāo)記OCS后表面帶正電荷，通過靜電引力吸附至兩者距離小于10nm后，兩者可構(gòu)成熒光共振能量轉(zhuǎn)移的供/受體對。OCS抗體吸附至酶標(biāo)板后，當(dāng)測試液中存在OCS時(shí)，由于競爭結(jié)合抗體，使得溶液中剩下更多的羅丹明B標(biāo)記的OCS。向溶液中加入CdTe量子點(diǎn)充分混合后，羅丹明B的峰強(qiáng)強(qiáng)度與量子點(diǎn)峰強(qiáng)強(qiáng)度的比值增大，基于此測定OCS的濃度。此分析方法檢測限達(dá)到3.8