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1、微流控芯片技術(shù)已成生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和發(fā)展前沿,以聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)為基材的微流控芯片因其透光性強(qiáng)、可廉價(jià)批量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)在生物分析方面應(yīng)用越來(lái)越廣,但是,PMMA微流控芯片表面疏水性很強(qiáng),會(huì)對(duì)生物分子產(chǎn)生吸附而導(dǎo)致分析效果變差。為彌補(bǔ)PMMA微流控芯片存在的缺陷,本研究合成了親水性超支化聚酰胺酯,并利用超支化聚酰胺酯獨(dú)特的三維球狀結(jié)構(gòu)、表面帶有大量活性端羥基、低粘度等特性,將其對(duì)PMMA微流控芯片的表面進(jìn)行改性以提高芯片表
2、面的親水性,抑制對(duì)生物分子的吸附,進(jìn)而提高芯片的分離分析性能。
本研究工作的內(nèi)容主要包括以下幾個(gè)方面:
(1)超支化聚酰胺酯的合成及表征
首先以丁二酸酐和二異丙醇胺為原料通過(guò)邁克爾加成反應(yīng)制備了帶有一個(gè)羧基和兩個(gè)羥基的AB2型單體,然后以三羥甲基丙烷作為核分子,合成的AB2型單體作為增長(zhǎng)單體,通過(guò)縮聚反應(yīng)制得了親水性的端羥基超支化聚胺酯。利用IR、13C-NMR、GPC、TGA、粘度分析、羥值測(cè)
3、定等手段表征了合成產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。結(jié)果表明合成的產(chǎn)物具有較窄的分子量分布和較高的支化度,分子末端具有數(shù)量眾多的活性端羥基,并且具有較低的粘度和良好的熱穩(wěn)定性,是一種極具潛力的改性材料。
(2)PMMA微流控芯片的表面改性
利用親水性超支化聚胺酯通過(guò)化學(xué)鍵合和物理涂覆兩種手段對(duì)PMMA微流控芯片的表面進(jìn)行改性。對(duì)改性后PMMA微流控芯片的表面進(jìn)行了接觸角的測(cè)定,利用SEM和體式顯微鏡觀察了改性后芯片的表面形貌
4、,同時(shí)對(duì)改性后芯片的電滲流以及穩(wěn)定性進(jìn)行了考察。結(jié)果表明,改性后的PMMA微流控芯片表面形成了一層均勻、致密、連續(xù)的親水性涂層,芯片表面的親水性得到明顯提高,其中經(jīng)化學(xué)鍵合改性后的芯片接觸角由未改性時(shí)的89.9°降低到29.5°,而且得到的親水性涂層具有良好的穩(wěn)定性。
(3)利用改性后芯片分離檢測(cè)生物分子
利用化學(xué)鍵合改性芯片和物理涂覆改性芯片對(duì)腺苷和L-賴氨酸兩種生物分子進(jìn)行了分離檢測(cè),首先確立了最佳的檢測(cè)
5、條件:磷酸鹽緩沖液濃度40mmol/L,pH4.8,分離場(chǎng)強(qiáng)500V/cm,檢測(cè)波長(zhǎng)214nm。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,未改性芯片對(duì)兩種分析物產(chǎn)生了嚴(yán)重的吸附,沒(méi)有實(shí)現(xiàn)有效分離。與未改性芯片相比,改性后芯片對(duì)兩種生物分子實(shí)現(xiàn)了完全分離,所得到的檢測(cè)峰峰型尖銳,分離清晰。化學(xué)鍵合改性芯片對(duì)腺苷和L-賴氨酸的分離柱效高達(dá)8.44×104 Plates/m和9.82×104Plates/m,分離度(Rs)達(dá)到5.31;物理涂覆改性芯片對(duì)兩種生物分子的分
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