疏水電荷誘導介質的制備及在抗體分離的應用.pdf

1、抗體類藥物是目前生物技術類藥物中最重要的一類，因其專一性強、親和力高，在醫(yī)藥和研究領域具有廣泛的應用前景。這類藥物在生物醫(yī)藥市場的規(guī)模已經(jīng)超過20%，且呈逐年增加的趨勢。隨著市場需求和生產(chǎn)規(guī)模的不斷擴大，如何從復雜的料液中快速、高效的分離純化抗體，以提高抗體類產(chǎn)品生產(chǎn)過程的經(jīng)濟性是目前生物工程領域的一個重要研究方向。本論文針對抗體的色譜分離過程，提出了一種基于三唑基團的新型疏水電荷誘導吸附劑的制備方法。該方法利用三唑及衍生物對抗體分子的

2、選擇性吸附作用，實現(xiàn)抗體在生理條件下與配基結合；并在弱酸條件下利用靜電排斥作用實現(xiàn)抗體的洗脫，從而克服了上樣條件復雜，洗脫條件苛刻等問題。本論文的研究內(nèi)容包括以下幾個方面：
　?。?）研究了以瓊脂糖凝膠為基質，利用點擊化學固載三唑衍生物基團，考查其對三種模式蛋白的吸附行為。研究發(fā)現(xiàn)三唑衍生物在蛋白吸附過程中具有pH依賴性，且吸附容量受鹽濃度的影響較小，這些特征符合疏水電荷誘導層析的典型特征。人抗體IgG在中性pH條件下吸附容量最高

3、，達到15 mg/mL gel，此條件下對其他蛋白的吸附量較低。上述結果表明，三唑及其衍生物有作為疏水電荷誘導層析吸附劑的潛力，需進一步的考查高配基密度下的抗體載量及選擇性。
　?。?）為提高抗體載量，以親水性聚苯乙烯微球為載體，結合原子轉移自由基聚合（Atom transfer radical polymerization, ATRP）技術和銅催化的點擊反應(Cu-catalyzed click reaction)，成功地制備了

4、高密度三唑基疏水電荷誘導層析吸附劑?？疾榱巳芤簵l件和材料性質對抗體吸附的影響，靜態(tài)飽和吸附容量（Qm）達到240 mg/g，動態(tài)吸附容量高達88 mg/g；以檸檬酸緩沖液（0.01 mol/L, pH3.0）為洗脫劑，洗脫效率超過80%，重復使用后吸附容量未發(fā)生明顯下降。通過SDS-PAGE分析，三唑基疏水電荷誘導層析吸附劑在分離復雜溶液中的抗體時具有較高的選擇性，pH4.0的檸檬酸洗脫液液洗脫，IgG的純度達到95%以上。
　　

5、（3）針對原子轉移自由基聚合反應過程復雜，銅離子較難去除等實際問題，本文又篩選了新的三唑衍生物：5-羧基苯并三唑，實現(xiàn)了疏水電荷誘導層析凝膠介質的簡易制備。在生理條件下，苯并三唑吸附劑對IgG的動態(tài)結合容量高達57.7 mg/mL gel，較傳統(tǒng)的疏水作用色譜提高60%以上；以人血漿中抗體為分離目標，利用pH4.0的檸檬酸緩沖液一步洗脫，純度超過95%，收率超過70%，且降低洗脫緩沖液pH，有利于提高抗體回收率。此外，苯并三唑吸附劑對牛