四種氨基酸在不同環(huán)境條件下氧化損傷評(píng)價(jià)的研究.pdf

1、正常生理?xiàng)l件下，生物體新陳代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生過(guò)氧化氫、羥基自由基等氧化活性物質(zhì)（Reactive Oxygen Species，ROS）。若體內(nèi)存在大量的活性氧化物質(zhì)或者機(jī)體的抗氧化機(jī)能下降，會(huì)造成氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)的失衡，產(chǎn)生氧化應(yīng)激(Oxidative Stress)。ROS在體內(nèi)會(huì)與組成蛋白質(zhì)的氨基酸發(fā)生直接或間接相互作用，改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與構(gòu)象而引起蛋白質(zhì)損傷，從而影響蛋白質(zhì)的功能表達(dá)，引起一系列的疾病。因此，氧化應(yīng)激致蛋白質(zhì)氧

2、化損傷生物標(biāo)記物的研究和檢測(cè)方法的探索，將有助于人們了解氧化應(yīng)激導(dǎo)致蛋白質(zhì)氧化損傷的機(jī)理，可以應(yīng)用于相應(yīng)疾病的預(yù)防和治療，也有助于相關(guān)藥物的開(kāi)發(fā)。
　　 本論文主要利用電化學(xué)技術(shù)研究了酪氨酸在電極上的氧化行為和利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，研究了血管緊張素和肌紅蛋白在羥基自由基作用下的氧化損傷程度和氧化損傷位點(diǎn)，確定了酪氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸在不同環(huán)境條件下的氧化損傷情況，并建立了其氧化損傷的評(píng)價(jià)方法。論文主要包括以下

3、三個(gè)部分：
　　 第一部分：利用電化學(xué)循環(huán)伏安法研究了酪氨酸在玻碳電極上的電化學(xué)行為。結(jié)果表明，酪氨酸循環(huán)伏安響應(yīng)譜圖的陽(yáng)極支上呈現(xiàn)出單獨(dú)的一個(gè)氧化峰，峰電位位于0.90V附近，而在其陰極支上并無(wú)相應(yīng)的還原峰出現(xiàn)，從而我們認(rèn)為酪氨酸在玻碳電極上的電化學(xué)氧化損傷反應(yīng)是不可逆的。本部分還研究了酪氨酸在玻碳電極上電化學(xué)行為的影響因素。從除氧的結(jié)果中可以得出，除氧后的酪氨酸溶液氧化峰電位較未除氧的負(fù)移，并且電流增大，溶解氧對(duì)實(shí)驗(yàn)存在明顯

4、影響；隨著掃描次數(shù)的增加，其伏安響應(yīng)曲線上酪氨酸氧化峰的峰電流逐漸減小，說(shuō)明此過(guò)程中伴隨著電活性質(zhì)粒的弱吸附現(xiàn)象；酪氨酸氧化峰電流與掃描速度的平方根成線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9982:隨著pH增大，酪氨酸溶液的氧化峰電位呈負(fù)移趨勢(shì)，氧化峰電流整體呈下降趨勢(shì)；隨著溫度增加，氧化峰電位負(fù)移，峰電流增加；酪氨酸濃度對(duì)氧化峰電位的影響不大，但是隨著酪氨酸濃度的增加，氧化峰電流呈增大的趨勢(shì)。
　　 第二部分：利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，

5、研究了血管緊張素Ang I、II、Ill在Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥基自由基作用下的氧化損傷程度及位點(diǎn)。試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著血管緊張素與羥基自由基作用時(shí)間的增長(zhǎng)，其受到的氧化損傷程度增強(qiáng)。作用時(shí)間分別為O、2、4、8、16min時(shí)，Ang I的氧化損傷程度為0、1.73、1.93、4.29、4.88(％);AnglI為0、2.16、2、17、3.03、5.42(％);AnglII為O、1.45、1.82、3.33、5.52(％)；質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)結(jié)

6、果表明，在三種血管緊張素中，酪氨酸和苯丙氨酸均受到羥基自由基的氧化。我們可以利用這種羥基自由基對(duì)血管緊張素的特定氧化產(chǎn)物作為ROS致血管緊張素氧化損傷的生物標(biāo)記物。
　　 第三部分：利用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，對(duì)Y射線照射后的肌紅蛋白的氧化損傷程度及位點(diǎn)做了研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著Y照射劑量的增加，肌紅蛋白氧化損傷的程度有明顯增加的趨勢(shì)。以蛋白酶解產(chǎn)物V17EADIAGHGQEVLIR31為例，在Y射線照射劑量為O，10，20，