聚丙烯酰胺和聚乙烯醇基蛋白質(zhì)層析用離子交換介質(zhì)研究.pdf

1、離子交換層析在發(fā)現(xiàn)、分離和純化蛋白質(zhì)方面，特別是在工業(yè)上應(yīng)用上仍然占據(jù)主要地位。因此，提高適合制備和生產(chǎn)過(guò)程的蛋白質(zhì)色譜技術(shù)，特別在離子交換劑的設(shè)計(jì)和效率的改進(jìn)方面一直受到廣泛的關(guān)注。聚丙烯酰胺(PAM)樹(shù)脂具有優(yōu)良的親水性、生物相容性和化學(xué)反應(yīng)活性，已被用作凝膠層析分離蛋白質(zhì)的介質(zhì)，其優(yōu)點(diǎn)是可以克服微生物的侵蝕。 以反相懸浮聚合方法合成大孔高交聯(lián)度PAM樹(shù)脂，通過(guò)Mannich反應(yīng)和磺甲基化反應(yīng)修飾，制備胺甲基化聚丙烯酰胺(A

2、PAM)弱堿陰離子交換樹(shù)脂和磺甲基化聚丙烯酰胺(SPAM)強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，考察了修飾反應(yīng)中時(shí)間、pH值和溫度對(duì)樹(shù)脂性能的影響。 以懸浮聚合方法合成大孔聚醋酸乙烯酯樹(shù)脂，通過(guò)一系列反應(yīng)修飾成弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(PVAONCB)，表征了樹(shù)脂的性能。 初步研究了牛血清白蛋白(BSA)在APAM，SPAM和PVAONCB上的吸附行為，結(jié)果表明蛋白質(zhì)在離子交換樹(shù)脂上的吸附取決于蛋白質(zhì)分子與樹(shù)脂表面的靜電相互作用，蛋白質(zhì)吸附

3、量和吸附強(qiáng)度與離子交換樹(shù)脂表面荷電功能基的數(shù)量有關(guān)，吸附等溫線線性擬合結(jié)果表明BSA在APAM，SPAM和PVAONCB上的吸附均符合Langmuir等溫吸附模型。 以自制的簡(jiǎn)易色譜分離裝置測(cè)試了APAM，SPAM和PVAONCB對(duì)蛋白質(zhì)的分離效果。研究證實(shí)：(1)APAM較適合用于蛋白質(zhì)分離，采用鹽濃度逐步增加的梯度洗脫方式可以實(shí)現(xiàn)BSA與血紅蛋白混合液的洗脫分離。(2)SPAM與蛋白質(zhì)相互作用較強(qiáng)，采用增加鹽濃度的梯度洗脫方