超氧陰離子自由基和過氧亞硝酸根離子熒光測定法的研究.pdf

1、自由基是人體生命活動中多種生化反應(yīng)的中間代謝產(chǎn)物，其中超氧自由基（O2·-）和過氧亞硝酸根離子（ONOO-）是具有代表性的兩種自由基，它們在各種致病過程中都是重要的介導(dǎo)因素，與癌癥、機體炎癥、組織過氧化、蛋白質(zhì)交聯(lián)變性、DNA損傷和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等都有著直接的關(guān)系。
　　 02·-不僅自身具有毒性，而且可以經(jīng)過一系列反應(yīng)生成其它活性氧自由基，進(jìn)一步對生物體產(chǎn)生損傷作用，且停留時間較長。超氧自由基是生物活性最高的氧中心自由基之一，它

2、在生命過程和化學(xué)反應(yīng)中作為電子受體，形成不同的活性氧自由基鏈中的第一個自由基，經(jīng)過一系列反應(yīng)生成其它的氧自由基。和其它的活性氧相比，超氧自由基不是很活潑，但其壽命很長，因此，超氧自由基危害較大，捕獲超氧自由基進(jìn)行研究具有重要的意義。
　　 ONOO-是NO·與O2·相互反應(yīng)的產(chǎn)物。ONOO-能導(dǎo)致DNA損傷、酶抑制、細(xì)胞死亡和細(xì)菌中毒并且能夠引起一系列疾病。通過對自由基的檢測研究，可以幫助我們更好的解釋疾病產(chǎn)生的原因，采取有效的

3、預(yù)防措施，減少機體的傷害程度。
　　 目前測定O2·-與ONOO-的方法主要有電子自旋共振法（ESR）或電子順磁共振法（EPR）、高效液相色譜法（HPLC）、化學(xué)發(fā)光法（CL）、熒光法以及電化學(xué)方法等。然而，由于生物體內(nèi)活性氧自由基的半衰期非常短，穩(wěn)態(tài)濃度極低，所以真正適用于檢測生物活體內(nèi)O2·-與ONOO-的方法還是比較少的。這就迫切需要科研工作者開發(fā)對O2·-與ONOO-能夠?qū)Ｒ蛔R別、快速響應(yīng)的熒光探針用以動態(tài)觀測研究某些器

4、官中活性氧自由基的產(chǎn)生、代謝、相互轉(zhuǎn)化及其動態(tài)損傷生物機體的過程。
　　 本論文利用熒光分析技術(shù)測定活性氧自由基的方法，此技術(shù)具有靈敏度高、選擇性好、操作簡便等優(yōu)點。本文合成了三種新型熒光探針，利用探針對（O2·-）和（ONOO-）進(jìn)行了檢測，提出了新的檢測方法。具體研究內(nèi)容分為以下三個方面：
　　 （1）設(shè)計合成了一種新型的熒光探針香草醛縮苯胺，建立檢測O2·-和SOD活性的熒光方法，研究測定方法的最佳條件，并用于測定

5、大蒜、洋蔥的SOD活性的測定，并與鄰苯三酚自氧化法測定出的SOD活性進(jìn)行了比較。
　　 （2）設(shè)計合成新型的熒光探針熒光素酰肼，用熒光光譜法檢測ONOO-，研究測定方法的最佳條件，探討了其它物質(zhì)對體系的干擾影響及熒光探針的檢測單一性，研究測定方法的靈敏度，精密度。
　　 （3）設(shè)計合成新型的熒光探針羅丹明6G酰肼，用熒光光譜法檢測ONOO-，研究測定方法的最佳條件，探討了其它物質(zhì)對體系的干擾影響及熒光探針的檢測單一性，研