地衣芽孢桿菌脂肪酶發(fā)酵條件優(yōu)化及固定化研究.pdf

1、浙江理工大學學位論文獨創(chuàng)’I生聲明本人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江理工大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名：菱磊，為簽字日期：7o∥年雩月，歲日、逝江理工太堂硇堂位論文地盔葒孢枉菌眙臟醛筮醛釜i

2、生優(yōu)化及固定生匕班宜摘要脂肪酶(EC3113)是可以水解長鏈甘油三酯的水解酶家族成員，它是生物催化劑的工業(yè)應用領域中非常重要的一員。隨著脂肪酶的作用機制和應用范圍被不斷發(fā)現(xiàn)和擴展，微生物脂肪酶已經被廣泛應用到洗滌劑、香料、能源、食品工業(yè)、化學合成、化妝品、生物傳感器、生物降解、酯類及氨基酸衍生產品等諸多領域。絕大多數工業(yè)應用的酶都是通過微生物大規(guī)模發(fā)酵來獲取的，隨著工業(yè)應用對脂肪酶需求量的不斷增大，除了通過尋找新型脂肪酶生產菌株及基因工

3、程改造已有菌株外，利用科學合理的試驗設計方法對發(fā)酵產酶條件進行優(yōu)化提高脂肪酶產量或者利用固定化酶來提高酶的利用率也是十分重要的途徑，本研究正是在這樣的背景下提出的。在本實驗室已構建地衣芽孢桿菌(Bacilluslichenifarmis)胞外脂肪酶Bii02：2：重組枯草芽孢桿菌(Bacillussub／ills)蛋白酶缺失型菌株WB700的基礎上，本研究以該地衣芽孢桿菌胞外脂肪酶表達菌株為研究對象，利用響應面設計方法(Response

4、SurfaceMethodology，RsM)對其產酶條件進行優(yōu)化，利用氨基型載體ZH—HA，對脂肪酶進行固定化并研究了固定化前后脂肪酶的基本性質。通過RSM進行優(yōu)化后得到了最佳培養(yǎng)基成分的配比，并利用該最佳培養(yǎng)基進行了10L發(fā)酵中試放大試驗，在發(fā)酵進行到30h時發(fā)酵上清液總酶活力達到46U／mL，相比優(yōu)化前搖瓶培養(yǎng)時的173U／mL提高了26倍。利用氨基型載體ZHHA進行固定化后，固定化酶顆粒最適反應表觀pH在100左右，最適反應溫度