重金屬脅迫與生物樣品中巰基化合物的應(yīng)答作用.pdf

1、GSH等巰基化合物的測定方法目前文獻較多。測定方法是利用衍生化試劑的光度法和分離為基礎(chǔ)的分析方法，但目前不同的方法之間還有樣品前處理過程的不同，其含量測定結(jié)果有較大的差異。本文利用O PA和DTN B衍生化試劑，用活性面包酵母作為活細(xì)胞樣本，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的前處理方法，分別利用光譜法、色譜法測定了酵母中的GS H和總巰基(-SH)含量，并對不同前處理方法和分析方法的測定結(jié)果進行了比對，確立了準(zhǔn)確測定生物細(xì)胞內(nèi)的GSH等巰基化

2、合物的分析方法。谷胱甘肽(GSH)具有重金屬解毒作用，而目前大多認(rèn)為是 GSH中的官能團，像巰基、羧基、氨基等對重金屬的配位作用所致，但細(xì)胞內(nèi)的GSH對外源性的有毒重金屬脅迫的響應(yīng)及解毒機制尚不十分清楚。本研究用活性酵母為活細(xì)胞樣本，利用已確立的分析方法測定了不同重金屬脅迫時細(xì)胞內(nèi) GS H和總巰基的應(yīng)答作用，借此進一步探討了外源性重金屬與胞內(nèi)的GSH和巰基化合物的相互作用機制，為GSH等巰基化合物在重金屬解毒中的化學(xué)機制的研究提供了基

3、礎(chǔ)數(shù)據(jù)。
　　本研究分為五個部分：第一章緒論。概述了生物細(xì)胞內(nèi)GS H等巰基化合物測定方法及重金屬解毒機理研究中目前面臨的若干問題，并提出了本文的選題思想和主要研究內(nèi)容。第二章通過實驗證實衍生化試劑DTN B對GS H、Cys以及含半胱氨酸殘基的蛋白質(zhì)中的巰基并無選擇性，可以通過定量釋放的衍生化產(chǎn)物測定樣品中總巰基的含量，衍生化試劑OPA與巰基化合物中的GSH具有選擇性作用并生成熒光衍生化產(chǎn)物。采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的同步衍生

4、化的樣品前處理方法，利用O PA和DTN B為衍生化試劑通過熒光分光光度法和UV-Vis分光光度法分別測定了活性面包酵母中 GSH和總巰基的含量。酵母中GSH和總巰基的含量分別為12.0213μmol/L-12.0823μmol/g和28.9859-29.2515μmol/L，回收率達99.47％和100.65%，其檢測限分別為0.2655μmol/L和0.0745μmol/L。第三章以DTNB為衍生化試劑，采用細(xì)胞破壁、衍生化為一體的

5、同步衍生化的樣品前處理方法，利用高效液相色譜法柱前衍生化法測定了酵母中GSH和總巰基含量。酵母中GSH和總巰基的含量分別為12.0569μmol/g和29.2823μmol/g,回收率達99.43%和100.87%，其檢測限分別為0.2296μmol/L和0.7649μmol/L。第四章采用含GSH和巰基蛋白的活性酵母作為生物細(xì)胞樣本，利用光譜法和色譜法研究不同重金屬脅迫時巰基化合物的應(yīng)答作用。主要探討了GSH等巰基化合物與Cd、Cu、

6、Cr、Fe、Pb等重金屬與巰基化合物的相互作用，為生物細(xì)胞對重金屬解毒和積累作用的機制的探討提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。第五章利用鄰苯二甲醛(OPA)和4,4μ-二硫代聯(lián)吡啶（4-DPS）為衍生化試劑，采用細(xì)胞破壁和衍生化為一體的樣品前處理方法，分別用熒光分光光度法和UV-Vis分光光度法測定了玉米須中GSH、總巰基(-SH)的含量。玉米須中GSH和總巰基的含量分別為0.0773-0.0788μmol/g和1.0751-1.0874μmol/g，