ws_t 799—2022污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)

1、 ICS 13.060 CCS C 51 WS 中 華 人 民 共 和 國(guó) 衛(wèi) 生 行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn) WS/T 799—2022 污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn) Method for enrichment and nucleic acid detection of SARS-CoV-2 in sewage 2022 - 03 - 24 發(fā)布 2022 - 03 - 24 實(shí)施 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì) 發(fā) 布

2、 WS/T 799—2022 1 污水中新型冠狀病毒富集濃縮 和核酸檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn) 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測(cè)方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于生活污水、醫(yī)療機(jī)構(gòu)污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測(cè)。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本標(biāo)準(zhǔn)必不可少的條款。 其中， 注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本 標(biāo)準(zhǔn)。 GB/T

3、 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 WS/T 697 新冠肺炎疫情期間特定人群個(gè)人防護(hù)指南 3 術(shù)語(yǔ)和定義 下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 新型冠狀病毒 severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2 屬于β屬冠狀病毒，基因組為線(xiàn)性單股正鏈的RNA病毒，全長(zhǎng)約30 kb，有包膜，呈圓形或橢圓形顆粒狀，直徑為60 nm～140 nm。 Ct 值 cycl

4、e threshold 在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，每個(gè)反應(yīng)體系中的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。 實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) real-time fluorescent reverse transcription polymerase chain reaction 在反轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的擴(kuò)增反應(yīng)中加入熒光化學(xué)物質(zhì)，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析方法。 4 檢出限

5、富集濃縮采用聚乙二醇沉淀法或鋁鹽混凝沉淀法時(shí)，方法檢出限為10 copies/mL；富集濃縮采用離心超濾法時(shí)，方法檢出限為100 copies/mL。 5 水樣的采集、運(yùn)輸及保存 根據(jù)采樣場(chǎng)所排水系統(tǒng)分布情況， 重點(diǎn)選取污水排水口、 內(nèi)部管網(wǎng)匯集處等關(guān)鍵位置對(duì)未經(jīng)消殺處理的污水進(jìn)行采樣。用無(wú)菌聚乙烯瓶采集污水樣本，采樣體積為300 mL?？筛鶕?jù)現(xiàn)場(chǎng)條件和檢測(cè)需求確 定水樣采集方式，如瞬時(shí)水樣（采樣點(diǎn)位某一時(shí)間隨機(jī)采集的樣本）或混合水樣（

6、同一采樣點(diǎn)位不同時(shí) 間所采集的瞬時(shí)水樣混合后的樣本）。樣本采集后應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)使用75 %酒精對(duì)采樣瓶外表面進(jìn)行消毒，然 后將采樣瓶裝入密封采樣袋中，對(duì)密封采樣袋外表面再次進(jìn)行消毒， 并盡快將樣本送至實(shí)驗(yàn)室，運(yùn)輸過(guò)程中確保0 ℃～4 ℃條件下冷藏運(yùn)輸。到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后樣本同樣應(yīng)保存于0 ℃～4 ℃環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在 接到樣本后24 h內(nèi)進(jìn)行富集濃縮處理，并在富集濃縮后24 h內(nèi)完成核酸提取及實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈 式反應(yīng)（實(shí)時(shí)熒光RT-PCR）檢