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1、RT-PCR 引物設(shè)計(jì)原則引物長度: 17-25bpGC 含量: 45-55%Tm: 上下游引物 Tm 值相差不能太大Oligo:63-68℃ Primer3:60-65℃序列: 堿基要隨機(jī)分布,盡量均勻避免出現(xiàn) GC 或 AT 富含區(qū)(尤其 3' 端)避免出現(xiàn)多聚嘧啶、多聚嘌呤3' 端: 避免出現(xiàn) GC 或 AT 富含區(qū)3' 端堿
2、基最好是 G 或 C 最好不是 T互補(bǔ): 引物自身、引物之間不要出現(xiàn) 3 個(gè)或更多堿基的互補(bǔ)3' 端不要出現(xiàn) 2 個(gè)或更多堿基的互補(bǔ)擴(kuò)增產(chǎn)物大小:80-150bpRT-PCR 引物設(shè)計(jì)原則引物長度: 17-25bpGC 含量: 45-55%Tm: 上下游引物 Tm 值相差不能太大Oligo:63-68℃ Primer3:60-65℃序列: 堿基要
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