共軛亞油酸甘油酯檢測技術標準研究.pdf

1、目的：本研究旨在制備出高純度的共軛亞油酸甘油三酯（CLA-TG）、1,3-共軛亞油酸甘油二酯（1,3-CLA-DG）、1,2-共軛亞油酸甘油二酯（1,2-CLA-DG）和共軛亞油酸甘油一酯（CLA-MG），為共軛亞油酸甘油酯的定性定量檢測提供對照品。建立共軛亞油酸甘油酯的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）檢測方法。
　　方法：以富含亞油酸的紅花籽油為原料，用堿異構化方法將其中的亞油酸轉(zhuǎn)化成共軛亞油酸，并用尿素包合

2、法對共軛亞油酸進行純化。以脂肪酶Novozyme435為催化劑，在無溶劑體系下催化共軛亞油酸與甘油進行酯化反應生成共軛亞油酸甘油酯。采用柱層析法、薄層色譜法和液相制備色譜法對共軛亞油酸甘油酯進行分離、純化，制備出了高純度的CLA-TG、1,3-CLA-DG、1,2-CLA-DG、CLA-MG對照品。采用紅外光譜法、氣相色譜法、液相色譜法對四種共軛亞油酸甘油酯對照品進行結構鑒定和純度分析。采用HPLC-ELSD法，通過優(yōu)化色譜柱、流動相、

3、檢測器參數(shù)等條件，建立共軛亞油酸甘油酯分析方法。
　　結果：堿異構化合成共軛亞油酸并用尿素包合法純化后制備出了含量高達95%的共軛亞油酸，酶法合成共軛亞油酸甘油酯后進一步分離、純化制備出了 CLA-TG、1,3-CLA-DG、1,2-CLA-DG、CLA-MG對照品。紅外光譜顯示四種共軛亞油酸甘油酯的結構中都含有羰基、C=C-C=C共軛雙鍵、順式CHR=CHR’和反式CHR=CHR’等基團，氣相色譜法檢測得出四種共軛亞油酸甘油酯中

4、CLA的含量均達到了99%，液相色譜法檢測得出四種共軛亞油酸甘油酯的純度均達到了99%。本研究建立的共軛亞油酸甘油酯的HPLC-ELSD法線性相關性好，檢測時間短，四種共軛亞油酸甘油酯的檢出限分別為0.06、0.20、0.20、0.25 mg/kg，定量限分別為0.6、1.2、1.2、1.2 mg/kg，相對標準偏差在1.46%~4.71%之間。
　　結論：成功制備出了高純度的CLA-TG、1,3-CLA-DG、1,2-CLA-D