[雙語翻譯]--醫(yī)學外文翻譯--epha2efna1在人類胃癌中的表達（譯文）

1、中文 中文 5500 字出處： 出處：Nakamura R, Kataoka H, Sato N, et al. EPHA2/EFNA1 expression in human gastric cancer.[J]. Cancer Science, 2005, 96(1):42-7.EPHA2/EFNA1 在人類胃癌中的表達摘要 摘要：Eph 受體酪氨酸激酶 A2(EphA2)在人類多種癌癥中過表達和磷酸纖維化，并伴隨著惡性的轉(zhuǎn)化。然而

2、，最近有一則報道指出：刺激 EphA2 配體EFNA1 可以抑制胃癌中 EphA2 表達。作者使用半定量 PCR 方法對胃癌的四個細胞系和 49 個原發(fā)的胃癌樣品及其正常胃癌組織的 EphA2 和 EFNA1 表達進行檢測。在 27 例患者中 EphA2 在癌組織中的的表達比正常組織中高很多（55%） ，而 EFNA1 在 28 例患者癌組織中過表達（57%） 。在表達水平和組織學特征如腫瘤大小、年齡、浸潤或淋巴結(jié)參與之間沒有檢測到顯著

3、的關系。然而,EPHA2 在宏觀 3，4 型腫瘤中的過表達比進展期胃癌 1，2 型突出。作者觀察了被檢測的四個胃癌細胞系中的三個（AGS,KATO3, MKN74）EPHA2 的表達。在一個細胞系中，TMK1，用 northern blotting，RT-PCR，western blotting幾乎未檢測到 EPHA2 的表達。相比，在所有細胞系中檢測到了 EFNA1 的表達。在內(nèi)生表達 EPHA2 胃癌細胞系中由 ephrinA1-F

4、c 刺激引起 EPHA2 蛋白表達下降和提高 EPHA2 的磷酸化作用。最后，EPHA2 的表達通過可溶的ephrinA1-Fc 的重復刺激而抑制。總之，這些表明 EPHA2 和 EFNA1 的表達也許會影響人類胃癌的特征。EPH 受體是目前已知的最大的酪氨酸激酶受體家族并可由細胞表面配體EFN 激活。有證據(jù)表明 EPH 家族中的許多成員及其 EFN 配體通過細胞粘附，形成，毛細管生成參與了血管形成和發(fā)展。EPH 受體分成兩類：EPHA

5、 和EPHB。EPHA 的相對應的配體是 EFNA,EPHB 的是 EFNB 配體。EPH 的表達轉(zhuǎn)錄已在黑素瘤和癌癥中證實。EPHA2 的過表達被認為在乳房上皮細胞轉(zhuǎn)化為惡性時很重要。EFNA2 過表達食管鱗狀細胞癌預后比 EFNA2 表達低的差。胃癌預后很差，激酶在胃癌細胞中的作用是研究的重點。Ogawa等在2000年鑒定在一些胃癌病例中EFNA1和EPHA2有表達，但是他們的分子作用還不清楚，盡管在胃癌中對酪氨酸激酶進一步研究。所

6、以，作者用定量PCR，RT-PCR, Northern 雜交，免疫印跡雜交對胃癌樣本和胃癌細胞系的EPHA2和EFNA1的表達水平進行了檢測。這是首例報道EFNA1和EPHA2在胃癌中有表??‘N1, N2 and N3’用的也是JCS法 T檢驗法和秩和檢驗法。細胞培養(yǎng) 細胞培養(yǎng) 在添加10%胎牛血清的 RPMI1640中培養(yǎng)胃癌細胞系（KATO3, MKN74,TMK1） ，而 AGS 細胞系用添加10%胎牛血清的 Ham’s F

7、12K 培養(yǎng)基培養(yǎng)。293T 人類腎胚胎細胞系用已添加10%胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)。RNA 提取和反轉(zhuǎn)錄 提取和反轉(zhuǎn)錄 根據(jù)廠家紀錄使用 ISOGEN RNA 提取試劑盒從人類組織中提取總 RNA。從總的 RNA 得到單鏈 cDNA，20L 體系中還含有1g oligo dT隨機引物，MMuLV-RT 反轉(zhuǎn)錄酶，RNA 酶抑制劑。定量 定量 PCR 分析 分析 本研究中使用了比先前方法改進的定量 PCR 方法。簡要

8、說，cDNA 用水稀釋，20?L 體系中混0.625 ?mol/L 引物，1 U Taq DNA 酶（羅氏）和1 Ci dCTP（Amersham Biosciences, Piscataway, NJ, USA). ，使用 DNA 循環(huán)器擴增（PC-700; ASTEC, Fukuoka, Japan)。對照??-actin ，30個循環(huán)，包括：94℃變性45S, 59℃退火1min, 72℃1min ,最后延伸 72℃10min 。

9、EPHA2 and EFNA1使用35個循環(huán)94℃變性45S,59℃退火1min, 72℃1min ,最后延伸72℃10 min 。用這些條件對 ACTB,EPHA2,EFNA1進行指數(shù)冪擴增。每個反應設立陰性對照排除 DNA 的污染。通過 ACTB mRNA 在相同樣品存在及在28S,18S 中的峰（使用 Agilent 2100 Bioanalyzer）來證實從臨床標本提取 RNA 的完整性。ACTB,EPHA2,EFNA1的片段

10、大小分別為:121bp,260bp,230p。引物序列為：（a（EPHA2上游：5′-GCAACATCCTCGTCAACAGC-3′下游：5′-TGGCTTTCATCACCTCGTGG-3′（b（?FHA1:上游：5′-AACAA-GCTGTGCAGGCATGG-3′下游：5′-CTCCACAGATGAGGTCTTGC-3′（c（ACTB：上游：5′-GCTACGTCGCCCTGGACTTC-3′下游：5′-AGCGGAACCGCTCA