2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文芒果(Mangifera indica L.)生長(zhǎng)素反應(yīng)因子類基因MiARF2在不定根誘導(dǎo)時(shí)的功能研究姓名:陳啟助申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):生物技術(shù)指導(dǎo)教師:黃學(xué)林20080605芒果( M a n g i f e r a i n d i c a L .) 生長(zhǎng)素反應(yīng)因子類基因M i A R F 2 在不定根誘導(dǎo)時(shí)的功能研究本文旨在進(jìn)一步揭示M i A R F 2 基因在芒果子葉切段不定根形成時(shí)的有關(guān)功能,主要的研究結(jié)

2、果如下:本研究通過S o u t h e r n 雜交分析了其拷貝數(shù),發(fā)現(xiàn)M i A R F 2 基因在芒果基因組中是一個(gè)單拷貝基因。通過構(gòu)建原核表達(dá)載體p E T - 3 2 a - M i A R F 2 ,將M i A R F 2 轉(zhuǎn)入大腸桿菌,研究了該基因的表達(dá)活性,得到了M i A R F 2 基因的可溶性融合蛋白。利用R T - P C R 技術(shù)初步分析了M i A R F 2 基因在芒果子葉切段第一種類型不定根形成過程中的

3、表達(dá)情況。結(jié)果顯示,在不定根的發(fā)端階段( 不定根誘導(dǎo)7 d 后) ,M i A R F 2 基因開始在近胚軸面表達(dá),不定根誘導(dǎo)的生長(zhǎng)分化階段( 誘導(dǎo)1 0 d 時(shí))表達(dá)量增強(qiáng)。而在幼嫩的根尖及遠(yuǎn)胚軸面,不定根誘導(dǎo)的各個(gè)時(shí)段都檢測(cè)不到M i A R F 2 基因的表達(dá)。同時(shí)利用實(shí)時(shí)定量P C R ( R e a l .T i m eP C R ) 技術(shù)進(jìn)一步對(duì)M i A R F 2 基因在芒果子葉切段兩種類型不定根形成的各個(gè)階段的表達(dá)情況

4、進(jìn)行了研究,結(jié)果表明,在芒果子葉切段第一種類型不定根發(fā)生過程中,M i A R F 2 基因只在近胚軸面表達(dá),不定根誘導(dǎo)7 d 后( 不定根的發(fā)端階段) 其表達(dá)量開始增加;誘導(dǎo)1 0 d 時(shí)( 發(fā)育階段) 表達(dá)量達(dá)到頂峰,約為本底水平的7 倍;誘導(dǎo)1 3 d ( 不定根突破表皮) 時(shí),M i A R F 2 基因的表達(dá)量回落到本底水平。在芒果子葉第二種類型不定根發(fā)生過程中,M 謝尺力基因在背面表達(dá),其表達(dá)趨勢(shì)與第一種類型不定根發(fā)生時(shí)相似

5、。而在芒果子葉的兩種類型不定根發(fā)生過程中,M i A R F 2 基因在子葉遠(yuǎn)胚軸面幾乎都不表達(dá)。由此可見,M i A R F 2 基因主要在不定根的根原基的發(fā)端及其發(fā)育階段中起作用。采用熒光原位雜交的方法研究了M i A R F 2 基因在芒果子葉切面生根時(shí)的組織學(xué)的表達(dá)特性。結(jié)果顯示,在誘導(dǎo)7 d 后M i A R F 2 基因只在芒果子葉近胚軸面的維管束部位表達(dá),主要在分泌腔外層的上皮細(xì)胞和韌皮部薄壁細(xì)胞中表達(dá)。這與我們先前的組織

6、學(xué)切片觀察發(fā)現(xiàn)不定根起源于芒果子葉維管束韌皮部的薄壁細(xì)胞相吻合。為了通過觀察轉(zhuǎn)基因煙草的表型變化探討M i A R F 2 基因在不定根形成中的功能,本研究還構(gòu)建了M i A R F 2 基因的植物表達(dá)載體,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)將其轉(zhuǎn)入煙草( N i c o t i a n at a b a c u m 刪X a n t h i ) 。對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草植株不定根根長(zhǎng)的表型分析發(fā)現(xiàn),在固體培養(yǎng)基和水培溶液中,轉(zhuǎn)p 3 5 S :M i A R F

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