固相萃取—保護(hù)PCR法檢測環(huán)境中二惡英類化合物.pdf

1、二惡英類化合物(Dioxin-Like Chemicals, DLCs)是包括多氯代二苯并二惡英（polychlorinated dibenzo-p-dioxins, PCDDs），多氯代二苯并呋喃（polychlorinated dibenzofurans, PCDFs）和共平面多氯聯(lián)苯（polychlorinated biphenyls, PCBs）等一大類化合物的總稱，由于其在環(huán)境中分布廣泛，不易于生物及化學(xué)降解，毒性高以及生物富

2、集和生物放大的特性，對人和生態(tài)環(huán)境構(gòu)成嚴(yán)重的危害, 急需加強對其監(jiān)測。 高分辨氣相色譜－高分辨質(zhì)譜聯(lián)用檢測（high resolution chromatography combined with high-resolution mass spectrometry, HRGC/HRMS）被認(rèn)為是二惡英定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法。但該方法檢測費用昂貴，費時，因此快速、經(jīng)濟(jì)和能反映DLCs總體機體效應(yīng)的生物檢測方法顯得十分必要。本研究基于

3、DLCs的作用機制，利用介導(dǎo)DLCs效應(yīng)的芳香烴受體（arl hydrocarbon receptor, AhR）建立了一種新的DLCs檢測生物技術(shù)，稱為結(jié)合保護(hù)PCR分析方法（Binding Protection Mediated Polymerase Chain Reaction , BPM－PCR）。同時，針對BPM-PCR方法而建立了索氏提取-固相萃取-芳烴羥化酶降解的樣品前處理方法。本研究分為二個部分： 一、索氏提取

4、－固相萃?。紵N羥化酶降解樣品前處理方法建立目的：本部分依據(jù)BPM－PCR方法而建立一種新的二惡英樣品前處理方法。方法：用索氏提取、固相萃取處理和凈化飛灰樣品，將提取液分成兩份（樣品1和樣品2），樣品1用高壓液相－熒光檢測(激發(fā)波長246nm;發(fā)射波長431nm)準(zhǔn)確測定飛灰樣品中苯并[a]芘含量,飛灰中苯并[a]芘含量為1.52ug/g；樣品2用芳烴羥化酶來降解樣品中苯并[a]芘，再用高效液相－熒光檢測苯并[a]芘含量。本部分研究也對

5、實驗條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果：在溫度為28度，時間為30分鐘條件下，垃圾焚燒爐飛灰中苯并[a]芘降解達(dá)85％以上。結(jié)論：索氏提?。滔噍腿。紵N羥化酶降解具有快速、經(jīng)濟(jì)、簡便的特點，是一種新穎而實用的二惡英樣品前處理方法。 二、結(jié)合保護(hù)PCR分析方法檢測環(huán)境樣本中二惡英類化合物目的：利用BPM-PCR 檢測環(huán)境樣本（焚燒爐飛灰）中的DLCs的毒性當(dāng)量（TEQs）。方法：將2g兩份飛灰樣本經(jīng)過丙酮索氏抽提、固相萃取、芳烴羥化酶降解等

6、步驟的前處理后，溶于500μl二甲基亞砜(DMSO)，然后采用BPM－PCR檢測其中的DLCs的毒性當(dāng)量（TEQs）。結(jié)果與高分辨氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HRGC/HRMS）檢測結(jié)果相比較。結(jié)果：對稀釋1000倍的飛灰樣本提取物檢測得到對應(yīng)的TCDD濃度分別為3.517×10-11mol/L和4.022×10-10 mol/L，換算得到的樣本TEQ值分別為1.133ng/g和12.952ng/g，是根據(jù)HRGC/HRMS檢測結(jié)果估算出來

7、的TEQ值的1.42倍和2.13倍。BPM-PCR檢測TEQ值略高于HRGC/HRMS檢測結(jié)果，但在同一個數(shù)量級上。結(jié)論：利用索氏提取、固相萃取、芳烴羥化酶降解進(jìn)行樣品前處理，BPM－PCR進(jìn)行檢測可以快速地用于實際樣本的定性與定量檢測，結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)方法具有很好的可比性。 總之，利用索氏提取－固相萃取－芳烴羥化酶降解進(jìn)行樣品前處理，用BPM－PCR進(jìn)行檢測，是一種頗具前景的有效的二惡英檢測方法，它具有很高的靈敏性、特異性與穩(wěn)