逆境條件下玉米幼苗根系69.5kd熱穩(wěn)定蛋白的分離提取及其表達調(diào)控研究

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文逆境條件下玉米幼苗根系69.5kD熱穩(wěn)定蛋白的分離提取及其表達調(diào)控研究姓名：吳學(xué)友申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：李德全20050528山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文逆境條件下玉米幼苗根系6 9 ．5 k D 熱穩(wěn)定蛋白的分離提取及其表達調(diào)控研究生命科學(xué)學(xué)院研究生：吳學(xué)友指導(dǎo)教師：李德全教授摘要本論文以抗逆( 旱) 性較強的玉米( Z e aM a y s ) 品種‘魯單9 0 0 2 ’號為材料，于H o a

2、 g l a n d 營養(yǎng)液中培養(yǎng)幼苗，用鹽、干旱、低高溫等處理幼苗根系，提取根系蛋白質(zhì)并進行S D S —P A G E 電泳，以正常培養(yǎng)為對照，找出不同脅迫下玉米幼苗根系表達產(chǎn)生的新的特異蛋白并確定其分子量；然后用不同脅迫交叉處理，檢測新的特異蛋白的表達變化情況，以此作為一個方面來反映玉米響應(yīng)不同逆境脅迫啟動的系統(tǒng)抗性及其交叉適應(yīng)現(xiàn)象。最后進一步用激素及其它重要信號物質(zhì)處理玉米幼苗根系，分析特異逆境蛋白的信號傳遞途徑與表達調(diào)控情況。

3、主要結(jié)果如下：1 ．脅迫處理下熱穩(wěn)定蛋白的提取 將不同脅迫處理的玉米幼苗根系于液氮中研磨，接1 ．5 ：2 的比例加入T r i s 。H C I 提取液( 1 0 0 m r n o l - L ～r i f f s —H C l ，4 m m o l ·L ～E D T A —N a 2 ，l m m o l —L ～P M S F ，p H 7 ．2 1 ，4 ℃提取2 0 r a i n ，1 0 ，0 0 0 9 離

4、心2 0 m i n ，上清液在8 0 。C 水浴中加熱1 0 m i n ，冷卻后，6 ，0 0 0 9離心1 0 m i n 。上清液經(jīng)冷丙酮沉淀后用上樣緩沖液溶解，混勻后置1 0 0 ℃水浴中煮5 r a i n ，離心，上清液點樣。2 ．新的熱穩(wěn)定性特異蛋白的確定 S D S ．P A G E 電泳后，以正常培養(yǎng)為對照，發(fā)現(xiàn)不同脅迫下均有一種新的特異蛋白表達產(chǎn)生，該蛋白穩(wěn)定表達，其表達量占總熱穩(wěn)定蛋白的比例較大．分子量大約為6