甘油保護(hù)對離子注入e.coli存活的影響及離子束介導(dǎo)dna轉(zhuǎn)化e.coli

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文甘油保護(hù)對離子注入E.coli存活的影響及離子束介導(dǎo)DNA轉(zhuǎn)化E.coli姓名：楊天佑申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物物理學(xué)指導(dǎo)教師：吳健20040501A b s t r a c tT h e a r t i c l em a i n l ys t u d i e dt h r e ea s p e c t s ：T h ee f f e c to f G l y c e r o lo ns u r v i v a l

2、o fE ．c o l i i m p l a n t e db yl o we n e r g yi o nb e a m ，t r a n s f e r r i n g t h eE ．c o l i i n d u c e db yI o nb e a m ，a n d c o n s t r u c t i v ei m p r o v e m e n t i nt h e m e t h o d s o f i o n —b

3、 e a m m i c r o b e t e c h n o l o g y ．T h e s t u d yo f t h ee f f e c to f G l y c e r o l o n s u r v i v a lo f t h e E ．c o l is h e w G l y c e r o lc o u l dp r o t e c tE c o l ia n di m p r o v ed r y , v a

4、c n u n qa n di m p l a n t a t i o n a ls u r v i v a lr a t ed u r i n gi o nb e a m i m p l a n t i n g t h e E ．c o l i ．T h ew h o l e s u r v i v a l r a t eo f p r o t e c t e dt h e E ．c o l ii m p l a n t e db y

5、3 0 k e VN + w a s 5 3 0 —1 0 0 0 0t i m e sh i 曲e rt h a nu n p r o t e c to n e s ．G l y c e r o lc h a n g e db a c t e r i ao u t e rc o l o ra n d s u r v i v a l r a t ec u r v e ．A tt h es a m e d o s e s ，t h ec

6、o l o ro f t h e E ．c o l ip r o t e c t e d b yf i v e a n d o n e p e r c e n t G l y c e r o l w a s w h i t e o r y e l l o w , l i g h t e r t h a nu n p r o t e c t e d ．I na d d i t i o n ．t h es u r v i v a lr a

7、t e c u r v eo f t h eE ．c o l iw i t l lG l y c e r o ll o c a t e da b o v e o n e w i t h o u t G l y c e r o l ，a n d t h e p e a k o f w h i c h w a s h i g h e r a n d d e l a y e d a t d o s e ．T h r e e k i n d o

8、 r i o n b e a m ，N ，A r a n dM g i o nb e a m ，a n d n i n e d o s e s ，1 ×1 0 1 4 N ／c m 2 ，2 ×1 0 1 4 N ／c m 2 ，3 ×1 0 1 4 N ／a m 2 ，5 ×1 0 “N ／c m z ，1 ×1 0 1 5 N ／c m 2 ，2 ×1 0 ‘5 N ／c

9、m 2 ，3 ×1 0 。5 N ／a m 2 ，5 ×1 0 ”N ／c m 2 ，1 ×1 0 ”N ／c m 2 ．w e r ea p p l i e da tt r a n s f o r m a t i o ni n d u c e db yi o nb e a m ．A m o n g 13 0 e x p e r i m e n t s i o nb e a m i n d u c i n

10、g p l a s m i d D N A d i r e c t l yt r a n s f e rt h eE ．c o l i ．8o f w h i c h s u c c e e d e d ．A l t h o u g ht r a n s f o r m a t i o n a lr a t ei sl o w , s o m e l a w w e r ef o u n d ：A r i o nb e a m w a

11、s s u p e r i o r t oN a n dM g i o nb e a m ；T h e d o s e 卜3 ×1 0 ‘5 N ／c m 2w a s m o r eh e l p f o ri o n —b e a mt r a n s f o r m a t i o n ；F o rp l a s m i dD N A ．s u p e r h e l i xD N A w a sm o r ee f f

12、 i c i e n t t h a n l i n e d D N A a n d 2 0 Bg C m l D N A w a sb e r e tc o n c e n t r a t i o n ．T h o s ec o n c l u s i o n s g a v e v a l u e d r e f e r e n c ef o rm i c r o b e i o n - b e a m t r a n s f o

13、r m a t i o n ．A d d i t i o ni r o ni o ns o l u t i o nt oE ．c o l ii m p l a n t e db yl o we n e r g yi o nb e a mc a ni m p r o v et r a n s f o r m a f i o nr a t e ．E s p e c i a l l y , t h ee f f e c t o ft h eb

14、 i v a l e n tC a 2 + a n dM g z +s o l u t i o nw a ss e v e r a ld o z e n o r h u n d r e dt i m e sa sh i g ha st h eo n eo f u n i v a l e n tK 十a(chǎn) n dL i + ．F o rK - a n d L i + ．4 m o l ／L K + a n d 2 m o l ／LL i +

15、 i s m o r e e f f i c i e n tt h a n0 ．2 m o l ／L1 0 a n d0 ．2 m o l ／L L i + ．I n a w o r d ，C o o p e r a t i o no ft h ei o nb e a mi m p l a n t a t i o n a n di r o ni o ns o l u t i o n p r o m o t e d p l a s m i

16、 d D N A t r a n s f o r m t h e E ．c o l i ．O n t h ef o u n d a t i o n o f p r a c t i c ea n d w o r k ，a s e r i e so f p r o m p t a n ds i m p l e m e t h o d sw a s s e t u p ，s u c ha sm e t h o d s p r e a d i