乏氧輻射雙誘導(dǎo)pcdna3.1()hreegr1dbait載體的構(gòu)建及其對宮頸癌hela細胞的放射增敏研究

1、}lI ，I《；目 錄縮略詞表?????????????????????????????1中文摘要?????????????????????????????2英文摘要?????????????????????????????4‘ 前言··?????····?···??·??··?··?·?

2、?···??????????”·6％、 材料和方法????????????????????????????9I f§ 1 ．材料?????????????????????????????l o}2 ．方法??????··???????????????????·???1 5巴 結(jié)果???????????????????????????????2 3白 討論&#

3、183;????·??????···- ·???·····?··??···??????··??··2 5I’結(jié)論??···?·????””·????····?&

4、#183;???·?????···?··???·2 8論文圖表?????????????????????????????2 9參考文獻?????????????????????????????3 8’’綜述?·?····?··???·····

5、3;???··?········????···????????·4 l【 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文題目?????????????????4 7臨床培訓(xùn)小結(jié)???????????????????????????4 8致謝······

6、83;·??········?················?·····?·????·??··?&

7、#183;····?- ·?···5 0論文聲明?????????????????????????????5 l論文審閱認定書??????????????????????????5 2。I＼徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文乏氧輻射雙誘導(dǎo)p c D N A 3 ．1 ( + ) ．H R E —E g r - 1 - D b a i t 載體的構(gòu)建及其對宮頸癌H e l

8、 a 細胞的放射增敏研究中文摘要目的構(gòu)建攜帶新型放射增敏劑D b a i t 的乏氧輻射雙誘導(dǎo)的重組質(zhì)粒一p c D N A 3 ．1 ( + ) ．H R E ．E g r - 1 一D b a i t ，探討其乏氧條件下對宮頸癌H e l a 細胞的放射增敏作用，為D b a i t 的基因靶向放射增敏治療提供實驗依據(jù)。方法1 、p c D N A3 ．1 ( + ) 一H R E - E g r - 1 - D b a i t 的

9、構(gòu)建：( 1 ) 提取C 5 7 B L ／6 裸鼠肝組織D N A ，P C R 法擴增出早反應(yīng)生長因子( e a r l y g r o w t hr e s p o n s e - 1 ，E g r - 1 ) 啟動子序列。( 2 ) 人工合成H R E 增強子序列和D b a i t 的寡核苷酸片段。( 3 ) 雙酶切反應(yīng)，依次將D b a i t 、E g r - 1 、H R E 片段亞克隆入哺乳動物真核表達質(zhì)粒p c D

10、N A3 ．1 ( + ) 中，構(gòu)建成具有輻射乏氧雙啟動子的p c D N A 3 ．1 ( + ) - H R E - E g r - 1 - D b a i t 質(zhì)粒。2 、p c D N A3 ．1 ( + ) - H R E —E g r - I —D b a i t 對宮頸癌H e l a 細胞的輻射增敏作用：在常氧和乏氧狀態(tài)下，p c D N A 3 ．1 ( + ) 一H R E ．E g r - 1 - D b a i

11、t 與宮頸癌H e l a 細胞共轉(zhuǎn)染2 4 h ，集落形成實驗檢測細胞存活分數(shù)，應(yīng)用單擊多靶模型和線性二次模型擬合細胞存活曲線，通過計算D o 、D q 、S F 2 、Q 、1 3 、Q ／1 3 等放射生物學(xué)參數(shù)，比較常氧和乏氧狀態(tài)下的輻射增敏比( S E R ) 和氧增強比( O E R ) 。結(jié)果 1 、合成的乏氧誘導(dǎo)增強子H R E 、輻射誘導(dǎo)啟動子E g r - 1 、新型放射增敏劑D b a i t ，測序鑒定結(jié)果顯示克

12、隆成功。2 、亞克隆方法依次將D b a i t 、E g r - 1 、H R E 序列插入真核表達質(zhì)粒載體p c D N A3 ．1 ( + ) 中，構(gòu)建成p c D N A3 ．1 ( + ) ．H R E ．E g r - 1 ．D b a i t 質(zhì)粒，雙酶切和測序鑒定結(jié)果顯示質(zhì)粒構(gòu)建成功。3 、細胞存活曲線顯示( 1 ) 在常氧情況下，H e l a 細胞的D o 、D q 、S F z 、a ／1 3 值分別為2 ．5 0

13、 、1 ．4 3 、O ．6 5 、7 ．4 1 ：H e l a 細胞與p c D N A 3 ．1 ( + ) 一H R E ．E g r - 1 - D b a i t 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染后，其D o 、D q 、S F 2 、Q ／1 3 值分別為1 ．9 8 、0 ．9 3 、 O ．5 2 、1 1 ．1 2 ，兩者的S E R 為1 ．2 6 。( 2 ) 在乏氧情況下，H e l a 細胞的D o 、D q 、S F 2 、Q