1.rankl介導(dǎo)ghrelin抑制血管平滑肌細(xì)胞成骨樣分化的機(jī)制研究2、ghrelin抑制成骨細(xì)胞mc3t3e1凋亡的作用機(jī)制研究

1、中圖分類號星望2 ：羔U D C 厶f 旦博士學(xué)位論文學(xué)校代碼 ! Q §蘭三密級 公玨1 、R A N K I ，介導(dǎo)Q 鵬l i n 抑制血管平滑肌細(xì)胞成骨樣分化的機(jī)制研究2 、m e l i n 抑制成骨細(xì)胞M C 3 T 3 ．E 1 凋亡的作用機(jī)制研究1 ．T h eR ．o l eo f R A N K I J i nM e c h a n i s m o f ( m e l i nI n h i b i t i

2、n gO s t e o b l a s t i c D i 虢r e n t i a t i o n o f V a s c u l a rS m o o t h M u s c l e C e l l s2 ．M e c h a n i s m o f I I 蚰b i t o 巧E 虢c t so f G 1 Ⅱe l i no nA p o p t 9 s i s o f O s t e o b l a s t i cM C 3

3、 T 3 一E lC e l l s作者姓 學(xué)科專 研究方學(xué)院( 系、指導(dǎo)教論文答辯日期名： 梁秋華業(yè)： l 臨床醫(yī)學(xué)向： 內(nèi)科學(xué)所) ： 湘雅二醫(yī)院師： 廖二元教授答辯委員會主蘊(yùn)遺中南大學(xué)二O 一三年五月博士學(xué)位論文 中文摘要摘要第一部分R A N K L 介導(dǎo)G 1 1 r e l i n 抑制血管平滑肌細(xì)胞成骨樣分化的機(jī)制研究第一章G h r e l i n 下調(diào)R A N K L 在小鼠血管平滑肌細(xì)胞的表達(dá)目的：觀察核因子．K

4、B 受體活化因子配體( r e c e p t o ra c t i v a t o r f o rn u c l e a r f a c t o r - KB l i g a n d ，R A N K I ，) 在小鼠血管平滑肌細(xì)胞( v a s c u l a rs m o o t h m u s c l ec e l l s ，V S M C s ) 成骨樣分化過程中的表達(dá)，以及G h r e l i n對R A N K I ，表

5、達(dá)的影響。方法：分離小鼠的原代V S M C s ，細(xì)胞免疫化學(xué)法及W - e s t e m b l o t 法檢測平滑肌肌動蛋白0 【( s m o o t h m u s c l e0 【一a c t i n ，S M c c —a c t i n ) ，鑒定其細(xì)． 胞表型；使用1 0 m M p 一甘油磷酸鈉( p ·g l y c e r o p h o s p h a t e ，p —G P ) 誘導(dǎo)小鼠原代V S

6、 M C s 向成骨樣細(xì)胞分化，以l O ～～1 0 培M 的G h r e l i n 干預(yù)p —G P 誘導(dǎo)的小鼠V S M C s ，W ．e s t e mb l o t 分析法檢測R u m 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2 ( R u n t ．r e l a t e d t r a n s c r i p t i o nf a c t o r2 ，R - u n x 2 ) 蛋白的表達(dá)；熒光定量P C R ( p 0 1 y m e r a

7、 s e c h a i n r e a c t i o n ) 檢測R A N K I ，、R u n X 2 、骨形成蛋白一2 ( b o n em o 印h o g e n e t i c p r o t e i n 一2 ，B M P 一2 ) m R N A 的表達(dá)；酶聯(lián)免疫吸附法( e n z y m e l i n k e di m m u n o s o r b e n t a s s a y ，E L I S A )

8、檢測R A N K I ，蛋白的分泌量；堿性磷酸酶( a l k a l i n ep h o s p h a t a s e ，A L P ) 試劑盒檢測A L P 活性；茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)的形成情況。結(jié)果：( 1 ) 成功分離了小鼠原代V S M C s ，細(xì)胞免疫化學(xué)法及W r e s t e mb l o t 結(jié)果顯示S M u —a c t i n 表達(dá)陽性；( 2 ) p —G P 可顯著增加I №x 2 和B Ⅷ．2