GM6001對TNBs誘導的大鼠潰瘍性結腸炎的保護作用.pdf

1、背景與目的：潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis，UC)主要侵及腸道的粘膜層和粘膜下層，以腸道細胞外基質(Extracellular matrix，ECM)的降解和粘膜潰瘍形成為主要病理特點。前期的研究表明，基質金屬蛋白酶(MatrixmetaUoproteinases，MMPs)在此過程中發(fā)揮重要作用，MMP-1的表達增加及TIMP-1的表達相對不足與UC的結腸組織損傷顯著相關，可以作為評價UC臨床病情的有用的生物學指標

2、；MMPs的活性可被組織抑制因子(Tissue inhibitors ofmatrix metaUoproteinases，TIMPs)所抑制，因此，能否應用外源性MMPs抑制劑(MMPs inhibitor，MMPI)替代治療成為探索UC治療的一條嶄新的思路。 本研究將MMPs的外源性特異性抑制劑GM6001(Ilomastat)應用于以三硝基苯磺酸(Trinitrobenzenesulfonic acid，TNBs)誘導的大

3、鼠UC模型，分別在mRNA及蛋白水平檢測MMP-1和TIMP-1在UC模型組、GM6001保護組和正常對照組的表達的變化以及組織病理學變化，了解外源性MMPI的保護作用，探討GM6001治療UC的有效性及可行性，為其今后應用于臨床UC的治療提供理論依據(jù)。 方法： 1、實驗動物：6周齡SD大鼠(Sprague-Dawley)，雄性，體重180-220g。 2、動物分組：將大鼠隨機分為四組，每組8只； U

4、C 模型組：僅予TNBs/乙醇混合液灌腸； GM6001保護A組：予TNBs/乙醇混合液灌腸，并予10mg/kgGM6001每日2次腹腔注射； GM6001保護B組：予TNBs/乙醇混合液灌腸，并予20mg/kgGM6001每日2次腹腔注射； 正常對照組：予生理鹽水灌腸。 GM6001均于灌腸前30分鐘給藥。 3、動物模型制備：將禁食48小時的大鼠經(jīng)水合氯醛腹腔注射麻醉后，予100mg/kg

5、TNBs與50﹪乙醇0.25ml混合液經(jīng)肛門一次性注入。所有大鼠均于灌腸后三周處死。 4、大鼠處死后取病變結腸作為組織標本，應用蘇木素-伊紅(HE)染色法觀察結腸組織病理形態(tài)學變化： 5、采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)對大鼠MMP-1、TIMP-1在mRNA水平的表達進行半定量測定。 6、免疫組織化學SP染色法對大鼠MMP-1、TIMP-1蛋白水平的表達進行半定量測定。 結果： 1、光

6、鏡病理形態(tài)學觀察(HE染色)： (1)潰瘍性結腸炎模型復制成功，UC模型組可見粘膜缺損，侵及粘膜層與粘膜下層，固有層有大量炎，性細胞以中性粒細胞為主浸潤，并可見淋巴細胞等，組織壞死明顯。 (2)GM6001保護A、B組與UC模型組相比較，結腸黏膜炎癥程度明顯減輕，中性粒細胞和淋巴細胞明顯減少。保護A組與保護B組比較，發(fā)現(xiàn)保護B組的結腸粘膜損傷程度較A組減輕，可見血管增生，粘膜上皮再生覆蓋潰瘍面：由底部肉芽組織，瘢痕組織充

7、填。 2、RT-PCR及免疫組織化學染色法分析各組結腸組織中MMP-1、TIMP-1的基因和蛋白表達的變化 (1)MMP-1、TIMP-1在UC模型組和GM6001保護組的表達較正常對照組明顯增高(P<0.05)， MMP-1的增高程度較TIMP-1更為明顯：MMP-1在GM6001保護組的表達較UC模型組的表達明顯降低(P<0.05)；TIMP-1在GM6001保護組的表達和UC模型組相比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05

8、)。 (2)MMP-1在GM6001保護B組的表達低于A組(P<0.05)；TIMP-1在兩組的表達比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 結論： 1、TNBs誘導的大鼠潰瘍性結腸炎模型MMP-1和TIMP-1的表達明顯增加，以前者增加程度更為顯著。MMP-1和TIMP-1在UC的發(fā)病過程中起著重要的作用。 2、GM6001通過下調MMP-1的表達減輕結腸粘膜損傷程度，對于TNBs誘導的潰瘍性結腸炎具