超聲波輔助酶解谷朊粉制備抗氧化肽的研究.pdf

1、本課題研究了堿性蛋白酶酶解谷朊粉,以提高酶解產(chǎn)物的抗氧化能力作為最終目標,使用超聲波作為酶解輔助手段,考察了超聲波功率、頻率、酶解時間對酶解產(chǎn)物抗氧化活性的影響,通過單因素和正交試驗篩選出最佳工藝參數(shù)為:超聲波功率(400w),低頻(25kHz)、酶解時間30min。在最佳酶解條件下(溫度50℃,pH9.0),亞鐵離子螯合能力IC50值為0.513mg／mL,當?shù)鞍踪|(zhì)含量為2.4mg／mL時,酶解產(chǎn)物的還原能力為0.385,ABTS自由

2、基清除能力相當于1.40mmol／L Trolox,且對亞油酸自動氧化抑制效果顯著(P<0.05)。
　　 研究了超濾處理方式富集酶解產(chǎn)物中的抗氧化組分的效果,結果表明:分子量在5kDa以下的組分抗氧化能力最強,當濃度為0.2和0.4mg／mL時,亞鐵離子螯合能力是超濾前樣品的2倍左右；對亞油酸自氧化的抑制能力在36h后比其它分子量片段的組分效果明顯；而當濃度為2.4mg／mL時,TEAC值達到1.45mmol／L Trolox

3、；并且由高效液相色譜法對其相對分子質(zhì)量進行分析發(fā)現(xiàn),分子量在2kDa以下的組分含量占了90.81％,推測抗氧化肽主要集中在2kDa以下。
　　 檢測分析了谷朊粉酶解產(chǎn)物(WGH)及5kDa超濾膜超濾樣(WGHU-5)對D-半乳糖誘導衰老模型小鼠抗氧化能力的影響,結果表明:四組實驗組都可以提高D-半乳糖致衰老模型中小鼠血漿、心臟、腦、肝臟和腎組織的SOD(超氧化物歧化酶)、T-AOC(總抗氧化能力)、GSH-PX(谷胱甘肽過氧化物

4、酶)的活性,而降低其體內(nèi)MDA(丙二醛)含量,WGHU-5高劑量組效果最為顯著(P<0.01),說明WGH具有明顯的防衰老抗氧化作用。
　　 采用DA201-C型大孔吸附樹脂對谷朊粉抗氧化肽進行分級篩選。靜態(tài)吸附實驗發(fā)現(xiàn)大孔吸附樹脂對谷朊粉抗氧化肽吸附很快,在30min時基本達到吸附平衡,75％乙醇靜態(tài)解吸率在30min時可以達到70％。動態(tài)洗脫中,采用乙醇梯度洗脫效果良好,可以將谷朊粉抗氧化肽很好的分級分離,乙醇梯度洗脫組各組

5、分的抗氧化能力隨著疏水性的增加先增加后減小。75％乙醇洗脫組分的抗氧化能力最高,在蛋白質(zhì)濃度為0.4mg／mL時,亞鐵離子螯合能力達到84.13％,TEAC值為0.36mmol／L Trolox,除鹽率達到93.56％。
　　 采用質(zhì)譜分析了產(chǎn)物中兩個主要組分的相對相對分子質(zhì)量為951和1349Da。MALDI-TOF-TOF MS結合串聯(lián)質(zhì)譜儀(TOF MS／MS)的方法得出:951Da肽段的一級序列為Ser-Arg-Tyr-