基因工程試題及答案全集

1、1、基因：是遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ)，是DNA（脫氧核糖核酸）分子上具有遺傳信息的特定核苷酸序列的總稱，是具有遺傳效應(yīng)的DNA分子片段。2、基因組該指單倍體細胞中包括編碼序列和非編碼序列在內(nèi)的全部DNA分子3、操縱子:原核生物的幾個功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因往往排列在一起，轉(zhuǎn)錄生成一個mRNA，然后分別翻譯成幾種不同的蛋白質(zhì)。這些蛋白可能是催化某一代謝過程的酶，或共同完成某種功能。這些結(jié)構(gòu)基因與其上游的啟動子，操縱基因共同構(gòu)成轉(zhuǎn)錄單位，稱操縱子。4、啟動

2、子:是RNA聚合酶結(jié)合位點周圍的一組轉(zhuǎn)錄控制組件，包括至少一個轉(zhuǎn)錄起始點。在真核基因中增強子和啟動子常交錯覆蓋或連續(xù)。有時，將結(jié)構(gòu)密切聯(lián)系而無法區(qū)分的啟動子、增強子樣結(jié)構(gòu)統(tǒng)稱啟動子。5、增強子:是一種能夠提高轉(zhuǎn)錄效率的順式調(diào)控元件，最早是在SV40病毒中發(fā)現(xiàn)的長約200bp的一段DNA，可使旁側(cè)的基因轉(zhuǎn)錄提高100倍，其后在多種真核生物，甚至在原核生物中都發(fā)現(xiàn)了增強子。增強子通常占100～200bp長度，也和啟動子一樣由若干組件構(gòu)成，基

3、本核心組件常為8～12bp，可以單拷貝或多拷貝串連形式存在。6、基因表達：是指細胞在生命過程中，把儲存在DNA順序中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯，轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子。1、說明限制性內(nèi)切核酸酶的命名原則要點。答：限制性內(nèi)切核酸酶采用三字母的命名原則即屬名種名株名的各一個首字母再加上序號.基本原則:34個字母組成方式是:屬名種名株名序號首字母:取屬名的第一個字母且斜體大寫第二字母:取種名的第一個字母斜體小寫第三字母:(1)取種名的第二

4、個字母斜體小寫(2)若種名有詞頭且已命名過限制酶則取詞頭后的第一字母代替.第四字母:若有株名株名則作為第四字母是否大小寫根據(jù)原來的情況而定但用正體.順序號:若在同一菌株中分離了幾種限制酶則按先后順序冠以IⅡⅢ…等用正體.2、什么是限制性內(nèi)切核酸酶的星號活性？受哪些因素影向？答：Ⅱ類限制酶雖然識別和切割的序列都具有特異性，但是這種特異性受特定條件的限制，即在一定環(huán)境條件下表現(xiàn)出來的特異性。條件的改變，限制酶的特異性就會松動，識別的序列和切

5、割都有一些改變，改變后的活性通常稱第二活性，而將這種因條件的改變會出現(xiàn)第二活性的酶的右上角加一個星號表示，因此第二活性又稱為星號活性。概括起來，誘發(fā)星活性的因素有如下幾種：(1)高甘油含量(5％v／v)；(2)限制性內(nèi)切核酸酶用量過高(100U／ugDNA)；(3)低離子強度(25mmol／L)；(4)高pH(8.0以上)；(5)含有有機溶劑，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2的二價陽離子存在(如Mn2，Cu2，C02，Zn2等)。3

6、、影響DNA連接酶催化連接反應(yīng)的因素有哪些？答：（1）DNA的純度（2）DNA甲基化的程度（3）酶切消化反應(yīng)的溫度（4）DNA的分子結(jié)構(gòu)（5）核酸內(nèi)切限制酶的緩沖液4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草桿菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到兩個片段，其中大片段的分子量為75kDa，它具有53聚合酶和35外切核酸酶的活性，小片段具有53外切核酸酶活性。由于大片段失去了DN

7、A聚合酶I中會降解5引物的53外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。Klenow酶主要有下列用途：(1)修復反應(yīng)，制備平末端?？捎肒lenow酶修復限制性內(nèi)切核酸酶或其他方法產(chǎn)生的5或3突出末端，制備平末端，這樣可以使原來具有不相容的黏性末端的DNA片段通過平末端重組。如在反應(yīng)系統(tǒng)中加入放射性同位素標記的脫氧核苷酸，用這種末答：化學合成一些長為10bp含有EcI識別位點的短的DNA片段，然后與待克隆片段兩端連接起來，如果用EcI切割

8、這種連接片段，就會產(chǎn)生EcI的單鏈末端。這種片段就可以插入到任何EcI的限制性內(nèi)切酶位點中。1.什么是Western印跡？它與Southern印跡有什么不同答：Western印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持物上，然后用特異性的抗體進行檢測。它與Southern的不同在于探針的性質(zhì)不同，在Western印跡中使用的探針是抗體(蛋白質(zhì))。1、DNA變性：DNA分子由穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)松解為無規(guī)則線性結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。變性時維持雙螺旋

9、穩(wěn)定性的氫鍵斷裂，堿基間的堆積力遭到破壞，但不涉及到其一級結(jié)構(gòu)的改變。2、DNA復性：變性DNA在適當條件下二條互補鏈全部或部分恢復到天然雙螺旋結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象它是變性的逆轉(zhuǎn)過程。3、退火：指模板雙鏈DNA經(jīng)熱變性，螺旋解開成單鏈后，通過緩慢冷卻到55℃左右，使引物(即具有互補堿基的RNA片段)與該模板DNA單鏈重新配對，形成新的雙鏈分子的過程。4、DNA芯片：是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接將大量的DNA探針以顯微打印的方式有序地

10、固化于支持物表面，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，即可獲得樣品的遺傳信息。由于常用計算機硅芯片作為固相支持物，所以稱為DNA芯片。5、錯義突變：堿基替換的結(jié)果引起氨基酸順序的變化。6、基因診斷：又稱DNA診斷或分子診斷，通過分子生物學和分子遺傳學的技術(shù)，直接檢測出分子結(jié)構(gòu)水平和表達水平是否異常，從而對疾病做出判斷。1、什么是藍白斑篩選法？答：這種方法是根據(jù)組織化學的原理來篩選重組體。主要是在?載體的非必要區(qū)插入一個帶有大

11、腸桿菌?—半乳糖苷酶的基因片段，攜帶有l(wèi)ac基因片段的?載體轉(zhuǎn)入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—?—D—半乳糖苷(Xgal)平板上形成淺藍色的噬菌斑。外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后，重組的噬菌體將喪失分解Xgal的能力，轉(zhuǎn)入lac宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—?—D—半乳糖苷(Xgal)平板上形成白色的噬菌斑，非重組的噬菌體則為藍色噬菌斑。2、什么是基因文庫？用重組DNA技術(shù)將某種生物細胞的

12、總DNA或染色體DNA的所有片斷隨機地連接到基因載體上然后轉(zhuǎn)移到適當?shù)乃拗骷毎校ㄟ^細胞增殖而構(gòu)成各個片段的無性繁殖系（克隆），在制備的克隆數(shù)目多到可以把某種生物的全部基因都包含在內(nèi)的情況下，這一組克隆的總體就被稱為某種生物的基因文庫。3、黏性末端連接法是最常用的連接方法，具有許多優(yōu)點，但是也有一些不足，請指出這些不足之處。答：黏性末端連接法不足之處有：(1)載體易自身環(huán)化；(2)若是用同一種限制性內(nèi)切核酸酶產(chǎn)生的黏性末端連接又不易定

13、向克??；(3)難插入特定的基因；(4)再者就是大片段DNA的重組率較低，即使用堿性磷酸酶處理了載體，防止了載體的自身環(huán)化，載體也有成環(huán)的傾向；(5)用這種方法產(chǎn)生的重組體往往含有不止一個外源片段或不止一個載體連接起來的串聯(lián)重組體，增加篩選工作的困難。4、什么是同聚物加尾連接法？用何種方法加尾？具有哪些優(yōu)缺點？答：所謂同聚物加尾法就是利用末端轉(zhuǎn)移酶在載體及外源雙鏈DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和載體DNA

14、分子要分別加上不同的寡聚核苷酸，如dA(dG)和dT(dC)然后在DNA連接酶的作用下漣接成為重組的DNA。這種方法的核心是利用末端轉(zhuǎn)移酶的功能，將核苷酸轉(zhuǎn)移到雙鏈DNA分子的突出或隱蔽的3OH上。以Mg2作為輔助因子，該酶可以在突出的3OH端逐個添加單核苷酸，如果用Co2作輔助因子則可在隱蔽的或平末端的3OH端逐個添加單個核苷酸。同聚物加尾法實際上是一種人工黏性末端連接法，具有很多優(yōu)點：(1)首先不易自身環(huán)化，這是因為同一種DNA的兩

15、端的尾巴是相同的，所以不存在自身環(huán)化。(2)因為載體和外源片段的末端是互補的黏性末端，所以連接效率較高。(3)用任何一種方法制備的DNA都可以用這種方法進行連接。同聚物加尾法也有一些不便之處：(1)方法繁瑣；(2)外源片段難以回收。由于添加了許多同聚物的尾巴，可能會影響外源基因的表達。另外要注意的是，同聚物加尾法同平末端連接法一樣，重組連接后往往會產(chǎn)生某種限制性內(nèi)切核酸酶的切點。5、何謂接頭連接法？答：將人工合成的或來源于現(xiàn)有質(zhì)粒的一小

16、段DNA分子(在這一小段DNA分子上有某種限制性內(nèi)切核酸酶的識別序列)，加到載體或外源DNA的分子上，這樣便在載體DNA和外源DNA上制造出新的酶切點。把這一小段含有酶切點的DNA分子稱為連接器分子，這種方法稱為接頭連接法。1、什么是基因組文庫(genomiclibrary)構(gòu)建基因組文庫，涉及哪些基本過程它同遺傳學上的基因庫有什么不同答：基因組文庫是用基因工程的方法，人工構(gòu)建的含有某一生物基因組DNA的各種片段的克隆群。一般以改造的噬

17、菌體DNA或黏粒作為載體，包括下列過程：(1)高分子量染色體DNA的制備；(2)體外重組連接；(3)包裝蛋白的制備；(4)重組體的體外包裝；(5)將重組DNA導人寄主細胞；(6)篩選?；蚪M文庫同遺傳學上所講的基因庫是完全不同的概念?；驇?genepool)是指在進行有性生殖的某一群體中，能進行生殖的個體所含總的遺傳信息。在基因組文庫的構(gòu)建中，由于使用的載體不同，分為噬菌體載體和黏粒載體構(gòu)建的基因組文庫、YAC文庫、BAC文庫等。1、