人白細胞介素-18il-18試劑盒使用方法

1、人白細胞介素人白細胞介素18（IL18）試劑盒使用方法試劑盒使用方法檢測范圍：檢測范圍：96T5ngL180ngL使用目的：使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中人白細胞介素18（IL18）含量。實驗原理實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞介素18（IL18）水平。用純化的人白細胞介素18（IL18）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素18（IL18），再與HRP標記的白細胞介

2、素18（IL18）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素18（IL18）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人白細胞介素18（IL18）濃度。試劑盒組成試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液6ml1瓶2酶標試劑6ml1瓶8標準品（320ngL）0.5ml1

3、瓶3酶標包被板12孔8條9標準品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml1瓶12密封袋1個標本要求標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，

4、用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。160ngL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液80ngL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液40ngL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液20ngL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液10ngL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各

5、步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，

6、以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9