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文檔簡介
1、雜色鮑(Haliotis diversicolor)屬軟體動物門,腹足綱,前鰓亞綱,原始腹足目,鮑科,是我國南方鮑種,因其生長迅速,經(jīng)濟價值高,在南海海域得到廣泛養(yǎng)殖。但長期以來遭受疾病困擾,致使鮑魚養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)常遭受重大損失,而迄今尚無有效的免疫防治措施。為探索鮑的免疫相關(guān)機制,本實驗室前期利用SSH技術(shù),構(gòu)建了細(xì)菌攻毒雜色鮑血淋巴細(xì)胞SSH cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)細(xì)菌感染下雜色鮑血淋巴細(xì)胞中細(xì)胞色素P450(CYP7A1)與谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶
2、(abGSTsigma)基因上調(diào)表達(dá),推測在鮑體內(nèi)CYP7A1與abGSTsigma不僅參與異源物質(zhì)的代謝過程,也可能參與機體的免疫應(yīng)答過程。本研究擬在此基礎(chǔ)上,對雜色鮑分別進行BaP暴露與細(xì)菌攻毒,觀察在兩個不同刺激過程中CYP7A1與abGSTsigma基因分別在雜色鮑體內(nèi)的誘導(dǎo)表達(dá)情況,從而對CYP7A1與abGSTsigma是否參與異源物質(zhì)的代謝以及可能的免疫應(yīng)答過程做出分析。取得的主要研究成果如下。 1,利用RACE技
3、術(shù)克隆了雜色鮑CYP7A1與abGSTsigma cDNA全長序列:CYP7A1 cDNA序列(GeneBank登錄號為EF587282)全長2185bp,包含一個1494bp的開放閱讀框,編碼498個氨基酸,其理論分子量為57557.0Da,等電點為6.56。abGSTsigma cDNA序列全長1328bp(GeneBank登錄號為EF546619)。包含有一個624bp ORF,編碼208個氨基酸,其理論分子量為23.67KDa,
4、等電點為5.67。 2, CYP7A1與abGSTsigma mRNA在健康雜色鮑的存在情況:利用Real-time PCR技術(shù)檢測了CYP7A1與abGSTsigma在健康雜色鮑體內(nèi)的不同組織器官(鰓、血淋巴細(xì)胞、消化腺、外套膜、腹足、上足、性腺、腎、粘液腺)中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況,結(jié)果表明abGSTsigma、CYP7A1基因均廣泛的在各種組織中表達(dá)。其中外套膜,鰓等表達(dá)量較高,腹足,消化腺和次之,血淋巴細(xì)胞表達(dá)量最低。
5、3,在BaP暴露條件下CYP7A1與abGSTsigma兩種基因在雜色鮑不同組織中的表達(dá)變化:在BaP誘導(dǎo)下abGSTsigma在消化腺、鰓、外套膜、血淋巴細(xì)胞4個組織中均上調(diào)表達(dá),酶活性也有提高。而CYP7A1則僅在血淋巴細(xì)胞中有上調(diào)表達(dá),在外套膜、消化腺、鰓中無上調(diào)表達(dá)。 4,在細(xì)菌攻毒條件下CYP7A1與abGSTsigma兩種基因在雜色鮑不同組織中的表達(dá)變化:abGSTsigma在被檢測的4個組織中均顯著上調(diào)表達(dá),酶活性
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