人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（mip-2）試劑盒使用建議

1、人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）試劑盒使用建議）試劑盒使用建議本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍：檢測(cè)范圍：96T15pgml400pgml使用目的：使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）含量。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）水平。用純化的人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入巨

2、噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2），再與HRP標(biāo)記的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人巨噬細(xì)胞炎癥蛋白2（MIP2）濃度。試劑盒組成試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液

3、6ml1瓶2酶標(biāo)試劑6ml1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（800pgml）0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml1瓶4樣品稀釋液6ml1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml1瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求標(biāo)本要求1標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）

4、活性。操作步驟操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。400pgml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200pgml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100pgml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50pgml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25pgml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入

5、150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性

6、，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請(qǐng)避光保存。7嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。