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1、LPC2013051第一章第一章緒論緒論一簡述分子生物學(xué)的主要內(nèi)容。一簡述分子生物學(xué)的主要內(nèi)容。1.DNA重組技術(shù)(又稱基因工程)2.基因表達(dá)調(diào)控研究3.生物大分子的結(jié)構(gòu)功能的研究——結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)4.基因組、功能基因組與生物信息學(xué)研究二什么是遺傳學(xué)的中心法則和反中心法則?二什么是遺傳學(xué)的中心法則和反中心法則?遺傳學(xué)中心法則:描述從一個(gè)基因到相應(yīng)蛋白質(zhì)的信息流的途徑。遺傳信息貯存在DNA中,DNA被復(fù)制傳給子代細(xì)胞,信息被拷貝或由DNA
2、轉(zhuǎn)錄成RNA,然后RNA翻譯成多肽。反中心法則:由RNA逆轉(zhuǎn)錄到DNA,再由DNA轉(zhuǎn)錄到RNA,然后RNA翻譯成多肽、蛋白質(zhì)。第二章第二章染色體與染色體與DNADNA一、名詞解釋一、名詞解釋半保留復(fù)制:半保留復(fù)制:DNA復(fù)制時(shí),以親代DNA的每一條鏈作為模版,合成完全相同的兩個(gè)雙鏈自帶DNA分子,每個(gè)子代DNA分子中都含有一條親代DNA鏈的復(fù)制方式。岡崎片段:岡崎片段:在DNA復(fù)制過程中,前導(dǎo)鏈能連續(xù)合成,而滯后鏈只能是斷續(xù)的合成5
3、3的多個(gè)短片段,這些不連續(xù)的小片段稱為岡崎片段。復(fù)制子:復(fù)制子:從復(fù)制原點(diǎn)到終點(diǎn),組成一個(gè)復(fù)制單位,叫復(fù)制子。插入序列插入序列:最簡單的轉(zhuǎn)座子,不含有任何宿主基因,它們是細(xì)菌染色體或質(zhì)粒DNA的正常組成部分。DNADNA的變性和復(fù)性:變性:的變性和復(fù)性:變性:指DNA雙鏈的氫鍵斷裂,完全變成單鏈。復(fù)性:復(fù)性:指熱變性的DNA緩慢冷卻,單鏈恢復(fù)成雙鏈。雙向復(fù)制:雙向復(fù)制:復(fù)制從一個(gè)固定的起始點(diǎn)開始,同時(shí)向兩個(gè)方向等速進(jìn)行。引物酶:引物酶
4、:一種特殊的RNA聚合酶,在DNA模版上合成一段RNA鏈,這段RNA鏈?zhǔn)荄NA復(fù)制起始時(shí)必需的引物。轉(zhuǎn)座子:轉(zhuǎn)座子:存在與染色體DNA上可自主復(fù)制和位移的基本單位。堿基切除修復(fù):堿基切除修復(fù):首先由糖苷水解酶識別特定受損核苷酸上的Nβ糖苷鍵,在DNA上形成AP位點(diǎn),由AP核酸內(nèi)切酶把受損的核苷酸的糖苷磷酸鍵切開,移去包括AP位點(diǎn)在內(nèi)的小片段DNA,由聚合酶Ⅰ合成新片段,DNA連接酶最終把兩者連接成新的DNA鏈。DNADNA重組修復(fù):重組
5、修復(fù):即“復(fù)制后修復(fù)”。機(jī)體細(xì)胞對在復(fù)制起始時(shí)尚未修復(fù)的DNA部位可先復(fù)制再修復(fù)。在復(fù)制時(shí),先跳過損傷部位,在和成鏈中留下一個(gè)缺口。對該缺口的修復(fù)即“DNA重組修復(fù)”:先從同源DNA母鏈上將相應(yīng)核苷酸序列片段移至子鏈缺口處,然后再用新合成的序列補(bǔ)上母鏈空缺。解旋酶:解旋酶:通過水解ATP獲得能量來解開雙鏈DNA的酶。單鏈結(jié)合蛋白:單鏈結(jié)合蛋白:與解開的DNA單鏈緊密結(jié)合,防止重新形成雙鏈,并免受核酸酶降解。在復(fù)制中維持模板處于單鏈狀態(tài)。
6、DNADNA連接酶:連接酶:連接DNA鏈3?OH末端和相鄰DNA鏈5?P末端,形成磷酸二酯鍵,從而把兩段相鄰的DNA鏈連接成完整的鏈。轉(zhuǎn)座子:轉(zhuǎn)座子:一段DNA順序可以從原位上單獨(dú)復(fù)制或斷裂下來,環(huán)化后插入另一位點(diǎn),并對其后的基因起調(diào)控作用。P轉(zhuǎn)座子:轉(zhuǎn)座子:是一種能夠誘發(fā)雜種不育的果蠅轉(zhuǎn)座子,果蠅中幾乎所有的雜種不育都由P轉(zhuǎn)座子引起。二、理解題二、理解題1DNADNA和RNARNA分子的基本組成成分。分子的基本組成成分。1、DNA由4
7、種主要的脫氧核苷酸(dAMP、dGMP、dCMT和dTMP)通過3′,5′磷酸二酯鍵連接而成。2、RNA是由核糖核苷酸經(jīng)磷酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個(gè)核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。RNA的堿基主要有4種,即A腺嘌呤,G鳥嘌呤,C胞嘧啶,U尿嘧啶。2.DNA2.DNA分子的一級結(jié)構(gòu):定義、組成和表示方法。分子的一級結(jié)構(gòu):定義、組成和表示方法。LPC2013053原核生物DNA聚合酶種類的比較polIpolIpolIIpolIIpo
8、lIIIpolIII5→35→3聚合酶活性聚合酶活性3→53→5外切酶活性外切酶活性5→35→3外切酶活性外切酶活性–構(gòu)成(亞基數(shù))單體不詳多亞基體外鏈延長速度(核苷酸分)600309000分子數(shù)細(xì)胞400不詳10~20功能修復(fù)合成去除引物填補(bǔ)空隙校對不詳復(fù)制校對6.DNA6.DNA復(fù)制的基本過程和終止機(jī)理?復(fù)制的基本過程和終止機(jī)理?1、DNA雙螺旋的解旋:DNA在復(fù)制時(shí),其雙鏈?zhǔn)紫冉忾_,形成復(fù)制叉,這是一個(gè)有多種蛋白質(zhì)以及酶參
9、與復(fù)制的過程。2DNA復(fù)制的引發(fā):所有的DNA聚合酶都從3’羥基端起始DNA合成。DNA復(fù)制時(shí),往往先由引發(fā)每在DNA復(fù)制時(shí),往往先由引發(fā)酶在DNA模版上合成一段RNA鏈,它提供引發(fā)末端(即引物),接著由DNA聚合酶從RNA聚合酶從RNA引物3’端開始合成新的DNA鏈。3、在DNA聚合酶的作用下,水解切除RNA引物,填補(bǔ)空缺。4、在DNA連接酶的作用下,連接相鄰DNA片段。5、終止機(jī)理:當(dāng)復(fù)制叉前移遇到22個(gè)堿基的重復(fù)性終止序列(TER
10、)時(shí),TerTus復(fù)合物能使DnaB不再將DNA解鏈,阻擋復(fù)制叉的繼續(xù)遷移,等到相反方向的復(fù)制叉到達(dá)后,停止復(fù)制。期間,人后50~100bp未被復(fù)制,由修復(fù)方式填補(bǔ)空缺,而后兩條鏈解開。7.DNA7.DNA復(fù)制保真信的原理?復(fù)制保真信的原理?至少依賴三種機(jī)制:1.遵守嚴(yán)格的堿基配對規(guī)律;2.聚合酶在復(fù)制延長中對堿基的選擇功能;3.復(fù)制中的即時(shí)校讀功能。8.8.什么是什么是RNARNA反轉(zhuǎn)錄,以及他的生物學(xué)意義?反轉(zhuǎn)錄,以及他的生物學(xué)意義
11、?定義:以RNA為模版以四種dNTP為原料,在PBA指導(dǎo)的DNA聚合酶的催化下,按照堿基互補(bǔ)配對的原則合成DNA的過程。意義:對分子生物學(xué)的中心法則進(jìn)行了修正和補(bǔ)充;在實(shí)際工作中,有助于基因工作的實(shí)施,可用于目的基因的制備。9.9.什么是什么是DNADNA自發(fā)性損傷?自發(fā)性損傷?復(fù)制過程中堿基配對時(shí)產(chǎn)生的誤差,經(jīng)DNA聚合酶校正和SSB等綜合校對,任未被校正的DNA損傷。包括:DNA復(fù)制中的錯(cuò)誤;DNA的自發(fā)性化學(xué)變化(堿基的異構(gòu)互變、
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