鄰苯二甲酸酯類(lèi)化合物對(duì)大鼠卵巢功能的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 在外界中存在著很多化學(xué)物質(zhì)，它們可以通過(guò)模擬人體內(nèi)天然激素的生化及生理等作用，干擾人體內(nèi)正常的內(nèi)分泌平衡，從而產(chǎn)生毒性作用，這類(lèi)化學(xué)物質(zhì)我們稱(chēng)其為環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(Enviromnental Endocrine Disruptors，EEDs)。1995年，世界衛(wèi)生組織公布鄰苯二甲酸酯類(lèi)(Phthalic Acid Esters，PAEs)化合物是一類(lèi)擾亂內(nèi)分泌、并已造成全球性環(huán)境污染的、必須加強(qiáng)控制的化學(xué)物

2、質(zhì)，其中以鄰苯二甲酸二乙基己酯(Di-(2-ethylhexyl) Phthalate，DEHP)應(yīng)用最廣泛、污染最嚴(yán)重，其應(yīng)用量每年超過(guò)2百萬(wàn)噸，占PAEs總量的40％。為了評(píng)價(jià)PAEs化合物對(duì)大鼠卵巢功能的影響，探討其對(duì)女性生殖健康方面潛在的危害性，本研究選用DEHP為研究對(duì)象，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究不同劑量及不同療程的DEHP處理后各大鼠動(dòng)情周期、性激素水平及卵巢組織學(xué)的改變，來(lái)探討其對(duì)大鼠卵巢功能的影響。本研究彌補(bǔ)了當(dāng)前關(guān)于研究DE

3、HP對(duì)雌性性腺卵巢毒性方面資料的不足，為全面評(píng)價(jià)PAEs化合物的毒性作用提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：
　　 選取健康SD雌性大鼠80只，隨機(jī)分為以下8組(每組10只)：短療程空白對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組及長(zhǎng)療程空白對(duì)照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組。低、中、高劑量組根據(jù)體重，分別灌喂DEHP：1000mg/kg/d，2000mg/kg/d和3000mg/kg/d?？瞻讓?duì)照組：無(wú)藥物干預(yù)。短療程灌胃14天，

4、長(zhǎng)療程灌胃28天。整個(gè)觀(guān)察期間，各組大鼠每日陰道涂片觀(guān)察動(dòng)情周期；每周一、四測(cè)量大鼠體重以觀(guān)察動(dòng)物生長(zhǎng)情況并調(diào)整用藥劑量。觀(guān)察期末，各組大鼠麻醉手術(shù)，摘取雙側(cè)卵巢，稱(chēng)重后固定，制成石蠟切片進(jìn)行組織學(xué)研究。同時(shí)各組大鼠選用下腔靜脈采血，按酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)血清中孕酮(Progesterone，P)、雌二醇(Estrogen，E2)、睪酮(Testosterone，T)、卵泡刺激素(Follicle Stimulating Hormon

5、e，F(xiàn)SH)、黃體生成素(LuteinizingHormone，LH)含量。采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，應(yīng)用單因素方差分析、Kruskal-Wallis檢驗(yàn)或Wilcoxon秩和檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較，應(yīng)用LSD-t檢驗(yàn)或Bonferroni法進(jìn)行多重比較。
　　 結(jié)果：
　　 1、DEHP作用下大鼠體重增長(zhǎng)受限
　　 實(shí)驗(yàn)全程大鼠未出現(xiàn)病、死現(xiàn)象；空白對(duì)照組大鼠基本生活狀態(tài)良好，體重增長(zhǎng)理想，毛發(fā)有光澤，但藥物組在

6、給藥后逐漸出現(xiàn)食欲減退現(xiàn)象，毛發(fā)光澤度下降，體重增長(zhǎng)不理想，以長(zhǎng)療程高劑量組明顯，個(gè)別大鼠甚至出現(xiàn)體重下降現(xiàn)象。處理前各組大鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；處理后，短療程高、中、低劑量組的體重低于空白對(duì)照組，四個(gè)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.042)，進(jìn)行多重比較可見(jiàn)高、低劑量組分別與空白對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.029，0.010)；長(zhǎng)療程高、中、低劑量組的體重低于空白對(duì)照組，四個(gè)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)，進(jìn)行多重

7、比較見(jiàn)長(zhǎng)療程高、中劑量組分別與空白對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.014，0.006)，即長(zhǎng)療程高、中劑量組大鼠的體重比空白對(duì)照組明顯減輕，因此可推斷DEHP使大鼠體重增長(zhǎng)受限。
　　 2、DEHP作用下大鼠動(dòng)情周期發(fā)生改變
　　 短療程高劑量組及長(zhǎng)療程高、中、低劑量組大鼠出現(xiàn)明顯的動(dòng)情周期延長(zhǎng)，短療程高、中、低劑量組及空白對(duì)照組四個(gè)組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02)，進(jìn)行多重比較發(fā)現(xiàn)短療程高劑量組分別與中、低

8、劑量組及空白對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.008，0.019，0.002)，具有劑量依賴(lài)性；長(zhǎng)療程高、中、低劑量組及空白對(duì)照組四個(gè)組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，進(jìn)行多重比較發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)療程高、中、低劑量組分別與空白對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均＜0.001)；低、中劑量組的長(zhǎng)、短療程之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均＜0.001)，而高劑量組的長(zhǎng)、短療程之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不具有明顯的時(shí)間依賴(lài)性。
　　

9、 3、DEHP作用下大鼠卵巢的改變
　　 (1)卵巢大體改變：卵巢外表光滑，有光澤，可分清皮質(zhì)和髓質(zhì)兩部分。大鼠卵巢質(zhì)量以卵巢質(zhì)量指數(shù)進(jìn)行比較(卵巢質(zhì)量指數(shù)=卵巢質(zhì)量(g)/大鼠體質(zhì)量(g)×100[3])，短療程高、中、低劑量組的卵巢質(zhì)量指數(shù)小于空白對(duì)照組，四個(gè)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)，進(jìn)行多重比較可見(jiàn)高、中劑量組分別與空白對(duì)照組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.001，0.007);長(zhǎng)療程高、中、低劑量組的卵巢

10、質(zhì)量指數(shù)小于空白對(duì)照組，四個(gè)組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)，進(jìn)行多重比較見(jiàn)長(zhǎng)療程高、中劑量組分別與空白對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.017，0.026)，即長(zhǎng)療程高、中、劑量組大鼠的卵巢質(zhì)量比空白對(duì)照組明顯減輕，因此從大體上可推斷DEHP使大鼠卵巢發(fā)育受影響，重量減輕，并隨著劑量增加，差異越顯著，具有劑量依賴(lài)性。
　　 (2)卵巢組織形態(tài)學(xué)改變：短療程各劑量組卵巢組織未見(jiàn)異常。長(zhǎng)療程四個(gè)組可發(fā)現(xiàn)個(gè)別卵巢組織出現(xiàn)顆

11、粒細(xì)胞及卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞發(fā)育欠佳，表現(xiàn)為顆粒細(xì)胞層數(shù)減少或缺如，卵細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清晰，甚至消失，透明帶皺縮。長(zhǎng)療程高、中劑量組的卵巢中成熟卵泡相對(duì)減少。其它沒(méi)有觀(guān)察到卵巢組織變性、壞死等明顯病理變化。據(jù)此可推測(cè)在本實(shí)驗(yàn)條件下，DEHP對(duì)卵巢組織未產(chǎn)生明顯的直接損傷作用。
　　 4、DEHP處理后大鼠血清性激素水平的改變
　　 短療程高、中、低劑量組和空白對(duì)照組四組的睪酮水平逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)，進(jìn)行多重

12、比較發(fā)現(xiàn)短療程高劑量組分別與低劑量組、空白對(duì)照組之間的睪酮水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.026，＜0.001)，具有劑量依賴(lài)性；長(zhǎng)療程高、中、低劑量組和空白對(duì)照組四組的睪酮水平逐漸下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.006)，進(jìn)行多重比較發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)療程高劑量組與空白對(duì)照組之間的睪酮水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)，具有劑量依賴(lài)性；各劑量組的長(zhǎng)、短療程之間的睪酮水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不具有時(shí)間依賴(lài)性。長(zhǎng)、短療程高、中、低劑量組的雌二

13、醇水平分別比空白對(duì)照組稍低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各劑量組的長(zhǎng)、短療程之間的雌二醇水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。長(zhǎng)、短療程各組間的孕酮、卵泡刺激素及黃體生成素水平均無(wú)顯著性差異，各劑量組的長(zhǎng)、短療程之間的孕酮、卵泡刺激素及黃體生成素水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、DEHP引起大鼠血清睪酮水平上升，抑制排卵，使大鼠動(dòng)情周期延長(zhǎng)，具有生殖毒性作用，并具有劑量依賴(lài)性，但不具有明顯的時(shí)間依賴(lài)性。
　　 2、DEHP