“敏篩”說明書

1、Instructionmanual(說明書說明書)：AllergyScreen過敏原檢測試劑盒過敏原檢測試劑盒1.用途用途AllergyScreen過敏原定量檢測系統(tǒng)采用免疫印跡方法，定量檢測人血清中過敏原特異性IgE抗體。2.概述概述IgE免疫球蛋白發(fā)現(xiàn)始于1964年，它在I型變態(tài)反應(yīng)發(fā)生機(jī)制中起重要作用。免疫應(yīng)答時B淋巴細(xì)胞分化成熟為漿細(xì)胞，并合成和分泌不同類型的抗體。該過程由Th和Ts細(xì)胞調(diào)節(jié)，如果調(diào)節(jié)失控，通常不會造成損害的抗原

2、也能激發(fā)免疫應(yīng)答，刺激抗原特異性B細(xì)胞分化成熟為漿細(xì)胞，并產(chǎn)生IgE抗體IgE抗體通過Fc段同嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面Fc受體結(jié)合。當(dāng)同一變應(yīng)原再次進(jìn)入機(jī)體，直接作用于IgE，并通過它的決定簇與IgE分子Fab段間的結(jié)合，形成IgE受體聚集成片這些變化最終導(dǎo)致嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺等生物活性物質(zhì)，從而產(chǎn)生如麻疹`蕁麻疹、皮炎、關(guān)節(jié)炎，枯草熱（過敏性鼻炎）`哮喘及過敏性休克等典型的I型變態(tài)反應(yīng)癥狀。3.檢測原理檢測原理特異

3、性過敏原被吸附于硝酸纖維素膜表面，置于反應(yīng)槽中。用移液器加入病人血清，室溫下孵育，標(biāo)本中過敏原特異性的IgE抗體與過敏原發(fā)生反應(yīng)，并連接在硝酸纖維素膜上。將多余的抗體沖洗脫掉，再加入標(biāo)記了生物素的抗人IgE抗體，室溫下孵育，沖脫未結(jié)合上的抗抗體。然后加入結(jié)合有堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素，室溫下孵育，鏈霉親和素和生物素結(jié)合。將未結(jié)合上的酶標(biāo)鏈霉親和素沖洗干凈。當(dāng)再加入BCIPNBT酶作用底物并孵育后，堿性磷酸酶發(fā)生特定的酶顯色反應(yīng)，試劑條

4、上出現(xiàn)沉淀。顏色深淺與血清中sIgE抗體含量成正比。待試劑條干燥后，CCD相機(jī)照相，讀取檢測結(jié)果。4.檢測系統(tǒng)組成檢測系統(tǒng)組成每套檢測系統(tǒng)包括：112檢測條：標(biāo)記有20種過敏原的硝酸纖維素膜，置于塑料反應(yīng)槽中（混合過敏原組，吸入組，食物組）1洗脫液：（TRISNaCl，包含0.1%NaN3）可稀釋成1x500ml的清洗液，pH=7.5（20ml）1標(biāo)記有生物素的抗人IgE抗體（白蓋，多抗），含0.1%NaN31酶標(biāo)鏈霉親和素（紅蓋），連

5、接有堿性磷酸酶的鏈霉親和素1底物（藍(lán)蓋），BCIPNBT10.檢測過程檢測過程10.1概述概述?使用前所有試劑及反應(yīng)槽都應(yīng)先恢復(fù)到室溫(2022℃)。試劑在使用前必須充分混勻。結(jié)果的可重復(fù)性主要取決于準(zhǔn)確的加樣，嚴(yán)格地遵守孵育時間`溫度和規(guī)范性地沖洗檢測條。通常底物顯色反應(yīng)時，溫度每升高1℃，反應(yīng)時間應(yīng)相應(yīng)減少30秒鐘。?實驗中應(yīng)盡量避光，建議遮蓋反應(yīng)槽以避免蒸發(fā)損耗。拿反應(yīng)槽時應(yīng)避免接觸其表面，而握其手柄。病人資料（如編號）可以貼在手

6、柄上。?嚴(yán)格按說明書操作，否則孵育時間和溫度的偏差會導(dǎo)致標(biāo)本的結(jié)果錯誤。?底物孵育必須在暗箱中操作，以免底物自動顯色。?嚴(yán)格按照檢驗室規(guī)程工作。10.2清洗液的制備清洗液的制備將洗脫液置于500ml的量筒內(nèi)，加滿蒸餾水，充分?jǐn)嚢杌靹颍⑥D(zhuǎn)移到洗瓶中。如果需要，可37℃水浴溶解洗脫液中的結(jié)晶。10.3初次孵育初次孵育將實驗所需的檢測條從包裝內(nèi)取出，用稀釋過的洗脫液沖洗幾秒鐘，用加樣器取250l患者血清，注意每加一份血清就更換一個加樣器頭。

7、置于混勻器（120次振動分鐘）上室溫（2022℃）孵育45分鐘。10.4沖洗沖洗反應(yīng)槽用洗脫液沖洗5秒鐘，上下轉(zhuǎn)動，使清洗液充分流過檢測條。輕輕晃動可以增強(qiáng)清洗效果。如使用自動化洗板機(jī)此過程可簡化。10.5二次孵育二次孵育在每個反應(yīng)槽中加入250l的抗抗體，仍放在混勻器上室溫孵育45分鐘。10.6沖洗沖洗過程同10.4。10.7第三次孵育第三次孵育加入250l鏈霉親和素酶標(biāo)物，混勻器上室溫孵育20分鐘。10.8沖洗沖洗過程同10.4。1