協(xié)和-一般藥理新講稿

1、1,2,一、發(fā)展史二、定義三、指導(dǎo)原則內(nèi)容四、方法學(xué)五、小結(jié),提 綱,3,1968年在德國伯林召開藥理學(xué)會議，Irwin, S.教授作了一份〈全面性檢測評價〉的重要報告，《系統(tǒng)性定量評價小鼠行為和生理狀態(tài)的程序》。這為一般藥理學(xué)研究的發(fā)展奠定了重要的基礎(chǔ)。1991年Haggerty, GC教授發(fā)表了名叫〈新藥神經(jīng)毒性檢測的策略和經(jīng)驗〉的文章后, 它對檢測新藥的神經(jīng)毒性具有特別重要的指導(dǎo)意義。1991年日本厚

2、生勞動省頒布的一般藥理學(xué)研究，對新藥必須進行一般藥理學(xué)研究的嚴格規(guī)定。一般藥理的研究目的是發(fā)現(xiàn)沒有預(yù)測到的對器官功能的作用和尋找其他的藥理學(xué)作用，而安全藥理學(xué)的研究著眼點則集中在發(fā)現(xiàn)新藥的不良反應(yīng)上。1993年7月中國衛(wèi)生部藥政局頒布的《新藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》中，首次在我國出現(xiàn)新藥一般藥理研究的指導(dǎo)原則。方法較簡單，未提及到藥物的次要新作用和不良反應(yīng)的觀察，不利于對新藥一般學(xué)藥理研究的全面考慮。,一、發(fā)展史,4,,199

3、4年Murphy, DJ教授發(fā)表了《安全藥理學(xué)中呼吸系統(tǒng)的研究方法和實驗設(shè)計》的文章后, 它對新藥安全藥理學(xué)中呼吸系統(tǒng)研究方法具有重要貢獻和實際應(yīng)用的指導(dǎo)意義。1996年Mattsson, JL教授等發(fā)表了《大鼠功能性觀測的系統(tǒng)檢查指導(dǎo)臨床的操作規(guī)程》的文章后，對一般藥理學(xué)研究中功能性系統(tǒng)檢查具有特別重要的意義。1997年美國FDA分別頒發(fā)ICH M3 《非臨床安全性研究的時程對藥品臨床試驗的指導(dǎo)原則》和ICH S6 《生物技術(shù)藥品

4、的臨床前安全性評價》文件。這兩份文件首次把一般藥理學(xué)研究改為安全性藥理學(xué)，它使安全性藥理學(xué)提高到一個新的階段。1999年9月中國新藥審批文件修訂的一般藥理研究的指導(dǎo)原則（討論稿），參考了國外的一些文獻，強調(diào)根據(jù)藥物的藥理作用，在較廣泛的研究不同系統(tǒng)功能的基礎(chǔ)上，根據(jù)藥物的治療領(lǐng)域、作用特點進行系統(tǒng)的專項研究，但對一般藥理或推測藥物與人用安全性的關(guān)系方面未進行深入探討。,5,,2001年美國FDA的ICH協(xié)調(diào)會制訂了〈人用藥安全藥理學(xué)的

5、指導(dǎo)原則S7A〉，重視了對藥物的安全性評價與臨床的相關(guān)意義。 2002年美國FDA的ICH協(xié)調(diào)會制訂了〈安全藥理學(xué)研究評價人用藥對延遲心室復(fù)極化（QT間期延長）的指導(dǎo)原則S7A〉。 這將使人生命功能最重要的器官---心臟具有更安全的藥物評價。  2003年最新研究表明科學(xué)合理的一般藥理學(xué)/安全藥理學(xué)研究對提高臨床用藥的安全性具有特別重要的意義。,6,二、定義,何謂一般藥理學(xué)？一般藥理學(xué)的研究目的一般藥理

6、學(xué)包括哪些研究內(nèi)容？一般藥理學(xué)在新藥安全評價中有何意義？如何設(shè)計一般藥理學(xué)試驗？,7,一般藥理學(xué)（general pharmacology ）是對主要藥效學(xué)作用以外進行的廣泛的藥理學(xué)研究，包括次要藥效學(xué)和安全藥理學(xué)的研究。,,二、定義,8,1、次要藥效學(xué)：主要研究藥物非期望的、與治療目的不相關(guān)的效應(yīng)和作用機制。2、安全藥理學(xué)：研究藥物治療范圍內(nèi)或治療范圍以上的劑量時，潛在不期望出現(xiàn) 的對生理功能的不良影響。3、根據(jù)需要

7、可能進行追加和/或補充的安全藥理學(xué)研究。 3.1 追加的安全藥理學(xué)研究：根據(jù)藥物的藥理性質(zhì)和化學(xué)類型，估計可能出現(xiàn) 的不良反應(yīng)。如果對已有的動物和臨床試驗結(jié)果產(chǎn)生懷疑，可能影響人的 安全性，此時應(yīng)做進一步追加的安全藥理學(xué)研究，即對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心 血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)進行深入的研究。 3.2 補充的安全藥理學(xué)研究：是評價受試藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和 呼吸系統(tǒng)以外的

8、器官功能的影響，包括對泌尿系統(tǒng)腎臟、自主神經(jīng)系統(tǒng)、 胃腸道系統(tǒng)和其它器官組織的研究。,二、定義,9,研究目的確定藥物可能關(guān)系到人的安全性的非期望藥理作用評價藥物在毒理學(xué)和/或臨床研究中所觀察到的藥物不良反應(yīng)和/或病理生理作用研究所觀察到的和/或推測的藥物不良反應(yīng)機制。,10,三、化學(xué)藥物一般藥理學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則2005.4.31,基本原則實驗設(shè)計的基本要求主要研究內(nèi)容數(shù)據(jù)處理與結(jié)果評價參考文獻附錄起草

9、說明,11,（一）實驗方法應(yīng)根據(jù)藥物的用途和特性，采用合理的方法進行一般藥理學(xué)研究。實驗設(shè)計需根據(jù)藥物作用的特點和臨床使用的目的而變化，選用國內(nèi)外認可的方法，包括科學(xué)而有效的新技術(shù)和新方法。某些安全性藥理檢測可根據(jù)藥效反應(yīng)的模型、藥代動力學(xué)的特征、實驗動物的種類、敏感性和可重復(fù)性來選擇實驗方法。實驗可采用體內(nèi)和/或體外的方法。（二）可免做一般藥理學(xué)研究的藥物1 、在全身體內(nèi)血藥濃度低，或其它組織器官分布很少的局部用藥，如皮膚

10、、 眼科用藥等。2 、只用于治療晚期癌癥病人的細胞毒類藥物，在首次用于臨床前可不做一般 藥理學(xué)研究。但具有新的作用機制的此類藥物例外。,基本原則,12,（三）追加和/或補充的安全藥理學(xué)研究根據(jù)藥物的藥理特性和化學(xué)類型，估計可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)，或?qū)σ延械膭游锖团R床試驗結(jié)果產(chǎn)生懷疑，可能影響人的安全性，此時應(yīng)做追加和/或補充的安全藥理學(xué)研究。（四）研究的階段性一般藥理學(xué)研究貫穿在新藥研究全過程中，可分階段進行。在藥物進入臨床試

11、驗前，應(yīng)完成對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)影響的研究。追加和/或補充的安全藥理學(xué)研究可在臨床研究期間進行。（五）執(zhí)行GLP 的要求安全藥理學(xué)研究，應(yīng)執(zhí)行GLP 規(guī)范。,13,（一）生物材料生物材料有以下幾種：整體動物，離體器官及組織，血液及血液成分，體外培養(yǎng)的細胞、菌種或病毒，提純或重組的受體、酶或因子等。整體動物常用小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、犬等。動物選擇應(yīng)與試驗方法相匹配，同時還應(yīng)注意品系、性別及年齡等因素。生物材料選

12、擇應(yīng)注意敏感性、重現(xiàn)性和可行性，以及與人的相關(guān)性等因素。體內(nèi)研究最好使用清醒動物。如果使用麻醉動物，應(yīng)注意麻醉藥物和麻醉深度的選擇。（二）受試物受試物的質(zhì)量應(yīng)符合臨床用藥的要求。外用藥物和注射劑一般用制劑。（三）樣本量每組動物數(shù)以能夠科學(xué)合理地解釋所獲得的實驗結(jié)果、能恰當(dāng)?shù)胤从成飳W(xué)上有意義的作用，并符合統(tǒng)計學(xué)要求為原則。,實驗設(shè)計的基本要求,14,（四）劑量安全藥理學(xué)研究：安全藥理學(xué)研究的低劑量應(yīng)不低于有效劑量，高劑量以不

13、產(chǎn)生嚴重毒性反應(yīng)為限?？赡艿那闆r下，應(yīng)對副作用的時程（如效應(yīng)的起始和持續(xù)時間）進行研究。一般來說，對引起副作用的劑量進行評價時，應(yīng)與在試驗動物中觀察到的主要藥效作用的劑量或在人體上產(chǎn)生預(yù)期治療作用的劑量相比較。其最低劑量（或濃度）一般設(shè)定為主要藥效學(xué)ED50 以上劑量（或濃度），其最高劑量（或濃度）可設(shè)定為高于藥效劑量（或濃度）但不產(chǎn)生毒性作用的劑量（或濃度）。體內(nèi)研究應(yīng)觀察到劑量-效應(yīng)關(guān)系。體外研究應(yīng)盡量確定受試物的濃度-效應(yīng)關(guān)系，受

14、試物的最低濃度至少應(yīng)對生物材料產(chǎn)生作用。,15,（五）對照一般可選用溶媒對照。如為了說明新藥與已知藥物的異同或特性，可選用陽性對照藥。（六）給藥途徑整體動物試驗，首先考慮應(yīng)與臨床擬用途徑一致，否則需有明確理由。（七）給藥次數(shù)一般采用單次給藥。但是若主要藥效學(xué)研究表明，該受試物需要在給藥一段時間后才能起效，或者重復(fù)給藥非臨床研究和人用結(jié)果出現(xiàn)令人關(guān)注的安全性問題時，應(yīng)根據(jù)這些作用合理設(shè)計給藥次數(shù)。（八）觀察時間

15、應(yīng)根據(jù)受試物的藥效學(xué)和藥代動力學(xué)特性選擇觀察時間點和觀察時間。,16,（一）對重要生命功能系統(tǒng)的影響根據(jù)對生命功能的重要性，觀察受試物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響。1 、中樞神經(jīng)系統(tǒng)定性和定量評價給藥后動物的運動功能、行為改變、協(xié)調(diào)功能、感覺/運動反射和體溫的變化，以確定藥物對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響。2 、心血管系統(tǒng)測定并記錄給藥前后血壓（包括收縮壓、舒張壓和平均壓）、心電圖（包括QT 間期、PR 間期、ST

16、段和QRS 波等）和心率等的變化。如藥物從適應(yīng)癥、藥理作用或化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于易于引起人類QT間期延長類的化合物，例如：抗精神病類藥物、抗組織胺類藥物、抗心律失常類藥物和氟喹諾酮類藥物，應(yīng)進行深入的實驗研究，觀察藥物對QT 間期的影響。3 、呼吸系統(tǒng)測定并記錄給藥前后動物的呼吸頻率和呼吸深度的變化。,主要研究內(nèi)容,17,（二）其他觀察指標--追加和/或補充的安全藥理學(xué)研究當(dāng)安全性藥理試驗、臨床試驗、流行病學(xué)、體內(nèi)外實驗、以及文獻報

17、道提示藥物存在潛在的與人安全性有關(guān)的不良反應(yīng)時，應(yīng)進行追加和/或補充的安全藥理學(xué)研究。1 、追加的安全藥理學(xué)研究,中樞神經(jīng)系統(tǒng)：觀察藥物對行為藥理、學(xué)習(xí)記憶、神經(jīng)生化、視覺、聽覺和/或電生理等的影響。心血管系統(tǒng)：觀察藥物對心輸出量、心肌收縮作用、血管阻力等心血管功能的影響，并探討其作用機制。呼吸系統(tǒng)：觀察藥物對氣道阻力、肺動脈壓力、血氣分析等的影響。,18,2 、補充的安全藥理學(xué)研究泌尿系統(tǒng)：觀察藥物對腎功能的影響，如對尿量

18、、比重、滲透壓、pH 、電解質(zhì)平衡、蛋白質(zhì)、細胞和血生化（如尿素氮、肌酐、蛋白質(zhì)）等指標的檢測。自主神經(jīng)系統(tǒng)：觀察藥物對自主神經(jīng)系統(tǒng)的影響，如與自主神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)受體的結(jié)合，體內(nèi)或體外對激動劑或拮抗劑的功能反應(yīng)，對自主神經(jīng)的直接刺激作用和對心血管反應(yīng)、壓力反射和心率的影響。胃腸系統(tǒng)：觀察藥物對胃腸系統(tǒng)的影響，如胃液分泌量和pH 、胃腸損傷、膽汁分泌、體內(nèi)轉(zhuǎn)運時間、體外回腸收縮等指標的測定。3 、其它研究在其它相關(guān)研究中，尚

19、未研究藥物對下列器官系統(tǒng)的影響并懷疑有影響的可能性時，如潛在的依賴性、骨骼肌、免疫和內(nèi)分泌功能等的影響，則應(yīng)考慮藥物對這方面的影響，并做出相應(yīng)的評價。,19,根據(jù)詳細的試驗記錄，選用合適的統(tǒng)計方法，對數(shù)據(jù)進行定量和定性分析。應(yīng)結(jié)合藥效、毒理、藥代以及其他研究資料進行綜合評價，為臨床研究設(shè)計提出建議。,用離體動物或人體心肌細胞、培養(yǎng)心肌細胞系或克隆人離子通道的異種表達體系測定離子流。用離體心臟標本進行動作電位參數(shù)的測定，或?qū)β樽韯游餀z測

20、具有動作電位周期特異性的電生理參數(shù)。測定清醒或麻醉動物的ECG 參數(shù)。用離體心臟標本或動物進行致心律失常作用的測定。,數(shù)據(jù)處理與結(jié)果評價,推薦的QT 間期試驗方法：可通過4 個方面的電生理實驗，研究藥物延遲心室復(fù)極化作用。,附錄,20,本指導(dǎo)原則以1993 年西藥一般藥理研究的指導(dǎo)原則、1999 年新藥一般藥理研究的指導(dǎo)原則（討論稿）為基礎(chǔ)，參考ICH 的指導(dǎo)原則，結(jié)合我國實際國情進行修訂。1993 年7 月衛(wèi)生部藥政局頒布的《新

21、藥（西藥）臨床前研究指導(dǎo)原則匯編》中，已有新藥一般藥理研究的指導(dǎo)原則，它重視的是對主要藥效作用以外廣泛藥理作用的研究，未提及對可能發(fā)現(xiàn)藥物新的作用、不良反應(yīng)的觀察。1999 年9 月修訂的一般藥理研究的指導(dǎo)原則（討論稿），參考了國外的一些文獻，強調(diào)根據(jù)藥物的藥理作用，在較廣泛的研究不同系統(tǒng)功能的基礎(chǔ)上，根據(jù)藥物的治療領(lǐng)域、作用特點進行系統(tǒng)的專項研究，但其對一般藥理與確定或推測藥物與人用安全性的關(guān)系方面未進行深入的探討。,起草說明,21

22、,安全藥理學(xué)研究，是探討在治療或治療劑量以上劑量范圍時，對生理機能潛在不期望出現(xiàn)的不良作用。安全藥理學(xué)研究概念最早出現(xiàn)于1997 年ICH 的實施新藥臨床研究所需非臨床安全性試驗的時間安排（M3 指導(dǎo)原則）和生物技術(shù)藥物的臨床前安全性評價（S6 指導(dǎo)原則）中，要求在非臨床安全性評價中必須進行安全藥理學(xué)研究，用于支持藥物的人體臨床研究。在安全藥理學(xué)概念被采用前，廣泛使用的是一般藥理學(xué)研究的概念。日本厚生勞動省于1991 年頒布的一般藥理學(xué)

23、研究指南，闡明一般藥理學(xué)的研究目的是發(fā)現(xiàn)新藥對器官功能不能預(yù)測的作用和其他藥理學(xué)作用，而安全藥理學(xué)的研究重點是發(fā)現(xiàn)新藥的不良反應(yīng)。如ICH M3 和S6 中要求的一樣，安全藥理學(xué)研究的目的和意義在于發(fā)現(xiàn)可能與臨床安全性有關(guān)的不期望出現(xiàn)的藥理作用，評價在毒理實驗或臨床研究中觀察到的不良反應(yīng)或病理作用，探討發(fā)生不良反應(yīng)的作用機理。從而最大限度的保障新藥進入臨床研究之前或上市之后，發(fā)現(xiàn)可能出現(xiàn)的治療作用之外的不良反應(yīng)。,22,2001 年的I

24、CH 協(xié)調(diào)會，制訂了安全藥理學(xué)的指導(dǎo)原則，即：S7ASafety Pharmacology Studies for Human Pharmaceuticals ，重視了對藥物的安全性評價與臨床的相關(guān)意義。我們在起草本指導(dǎo)原則時，力求將一般藥理學(xué)研究與安全藥理研究完全分開，安全藥理學(xué)只是一般藥理學(xué)的一部分內(nèi)容，本指導(dǎo)原則主要是關(guān)于安全藥理學(xué)的內(nèi)容。但在實際上很難將二者截然分開，因此，在本指導(dǎo)原則可能見到一般藥理學(xué)、安全藥理學(xué)的兩個概念。

25、目前國內(nèi)一般藥理學(xué)研究方面存在的主要問題是：國內(nèi)新藥研發(fā)單位對一般藥理學(xué)的研究重視不夠，對其研究目的認識不清，僅為滿足注冊要求而機械的執(zhí)行指導(dǎo)原則，對一般藥理學(xué)研究的意義沒有充分的認識?？茖W(xué)合理的一般藥理學(xué)研究可提高臨床人用的安全性。我們在起草本指導(dǎo)原則中，引入了ICH 的追加和/或補充安全藥理學(xué)研究、QT 間期延長研究的內(nèi)容，突出了一般藥理學(xué)研究與安全性研究密切相關(guān)；提出可免做安全藥理學(xué)研究的藥物，有利于掌握根據(jù)藥物的具體情況，進行

26、一般藥理學(xué)研究；研究階段性的提出，符合新藥研究是逐步進行過程的規(guī)律。,23,……（三）藥理毒理研究資料 16、藥理毒理研究資料綜述。 17、主要藥效學(xué)試驗資料及文獻資料。 18、一般藥理研究的試驗資料及文獻資料。 19、急性毒性試驗資料及文獻資料。 20、長期毒性試驗資料及文獻資料。 21、過敏性（局部、全身和光敏毒性）、溶血性和局部（血管、 皮膚、粘膜、肌肉等）刺激

27、 性等主要與局部、全身給藥相關(guān)的特殊安全性試驗研究和文獻資料。 22、復(fù)方制劑中多種成份藥效、毒性、藥代動力學(xué)相互影響的試驗資料及文獻資料。 23、致突變試驗資料及文獻資料。 24、生殖毒性試驗資料及文獻資料。 25、致癌試驗資料及文獻資料。 26、依賴性試驗資料及文獻資料。 27、動物藥代動力學(xué)試驗資料及文獻資料。 ……,24,四、方法學(xué),25,如何設(shè)計一般藥理學(xué)試驗？,核心

28、組合實驗（core battery）中樞神經(jīng)系統(tǒng)：運動功能、行為改變、協(xié)調(diào)功能、感覺/運動反射、體溫心血管系統(tǒng)：血壓（收縮壓、舒張壓、平均壓）、心率、心電圖（QT間期、PR間期、ST段和QRS波）呼吸系統(tǒng)：呼吸頻率和呼吸深度追加的安全藥理學(xué)實驗（Follow-up Safety Pharmacology Studies）中樞神經(jīng)系統(tǒng)心血管系統(tǒng)呼吸系統(tǒng)補充的安全藥理學(xué)實驗（Supplemental Safety Pharm

29、acology Studies）泌尿腎臟系統(tǒng)自主神經(jīng)系統(tǒng)胃腸系統(tǒng),26,動物：動物常用小鼠、大鼠、貓、狗等，性別不限，但觀察循環(huán)和呼吸系統(tǒng)一般不宜用小鼠和兔。盡量采用清醒動物，也可以在麻醉動物上進行。小動物數(shù)目不能少于10只，大動物不等低于少于6只。給藥途徑應(yīng)與臨床推薦劑量相同。試驗應(yīng)設(shè)2-3個劑量組及相應(yīng)的溶劑對照組，其中低劑量應(yīng)參考臨床用量或前期藥效學(xué)實驗的半數(shù)有效量進行折算。觀察的系統(tǒng)指標：1.神經(jīng)精神系統(tǒng)2.心

30、血管系統(tǒng)3.呼吸系統(tǒng),如何具體操作？,27,28,29,30,31,32,小獵兔犬（Beagle，比格犬）：原產(chǎn)英國，是獵犬中較小的一種。1880年引入美國，開始大量繁殖。因其有體型?。ǔ赡牦w重為7～10公斤，體長為30～49公分），短毛形態(tài)和體質(zhì)均一，稟性溫和，易于馴服和抓捕，親人，對環(huán)境的適應(yīng)力、抗病力較強、性成熟期（約8～12個月）早，產(chǎn)仔數(shù)多等優(yōu)點，被公認為是較理想的實驗用家犬，已成為目前實驗研究型別中最標準的動物，此種犬多用

31、于長期的慢性實驗。在國外，它已被廣泛用于生物化學(xué)、微生物學(xué)、病理學(xué)、病毒學(xué)、藥理學(xué)以及腫瘤學(xué)（如癌的病因?qū)W和癌的治療學(xué)等）等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的研究工作中，而農(nóng)藥的各種安全性試驗，特別是制藥工業(yè)中的各種實驗，使用該犬最多。近年來，上海有的單位、北京等地已引入Beagle種犬，且飼育繁殖成功。 血容量（%體重）5.6～8.3心率（次/分）120(100～130)心輸出量（升/分）2.3血壓不麻醉（mmHg）112（95～136

32、）~56（43～66）血壓戊巴比妥鈉麻醉(mmHg)149（108～189）~100（75～122）呼吸頻率(次/分)18(11～37)潮氣量（毫升）320(251～432)通氣量（升/分）5.21(3.3～7.4)耗氧量（毫米3/克活體重）580,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,待測藥一般藥理學(xué)試驗報告樣本  摘要 根據(jù)《新藥審批辦

33、法》有關(guān)規(guī)定，本實驗對待測藥進行一般藥理學(xué)研究，結(jié)果證實待測藥 ??? mg/kg體重、 ??? mg/kg體重和??? mg/kg體重十二指腸給藥后對麻醉犬的血壓、心電、呼吸沒有影響； ??? mg/kg體重、 ??? mg/kg體重和??? mg/kg體重口服灌胃后對小鼠的自由活動及一般行為未見明顯影響。 材料2.1 藥品：待測藥：黃色粉末，先加入少量吐溫助溶，再用蒸餾水稀釋，配制成所需濃度備用。2.2 動物：昆明

34、種小鼠，二級，56只，體重18~22g，雌雄各半，由???提供，合格證號??? ；beagle犬，雌雄兼用，24只，體重8~14kg，由???提供，合格證號???。2.3  試劑：肝素鈉注射液（ ???生產(chǎn)，批號??? ）；戊巴比妥鈉（ ???生產(chǎn)， 批號??? ）；生理鹽水（ ???生產(chǎn)， 批號??? ）。 2.4 儀器：MP100型多道生理記錄儀（美國BIOPAC制造）；XZ–4小鼠自由活動記數(shù)器（中國醫(yī)學(xué)科

35、學(xué)院藥物研究所制造）。,46,方法3.1 對麻醉犬血壓、心電、呼吸的影響將24只犬隨機分為4組(高劑量組、中劑量組、低劑量組和溶劑對照組)，每組6只，分別十二指腸給待測藥???mg/kg體重、 ???mg/kg體重和???mg/kg體重及等體積的溶劑（含有少量吐溫的蒸餾水），均為1ml/kg體重。犬稱重麻醉（戊巴比妥鈉30mg/kg體重頭腹靜脈注射）。頸部手術(shù)分離氣管和一側(cè)頸總動脈，作氣管插管、動脈插管（預(yù)先充滿0.1%肝素液）

36、，分別通過呼吸換能器、壓力換能器與多道生理記錄儀相連，記錄呼吸和血壓。連接II導(dǎo)聯(lián)心電圖至多道生理記錄儀，記錄心電圖。腹部手術(shù)作十二指腸插管（預(yù)先充滿生理鹽水）用于給藥。記錄正常血壓（收縮壓、舒張壓、平均壓）、心電圖、心率、呼吸的頻率和幅度后，十二指腸給藥，分別于給藥后0 ’ 、5’、15 ’ 、30 ’ 、45 ’ 、60 ’ 、90 ’ 、120 ’ 、150 ’ 、180 ’各時間點記錄上述各指標。3.2 小鼠自由活動測定昆明

37、種小鼠56只，雌雄各半，隨機分為4組(高劑量組、中劑量組、低劑量組和溶劑對照組)，每組14只，分別灌胃給待測藥???mg/kg體重、 ???mg/kg體重和???mg/kg體重及等體積的溶劑（含有少量吐溫的蒸餾水），均為0.2ml/10g體重。給藥后1小時將小鼠放入自由活動計數(shù)器中，記錄5分鐘內(nèi)自由活動次數(shù)。,47,結(jié)果由表1可見待測藥高、中、低劑量組與溶劑對照組比較，均無顯著性差異（P>0.05）。由表2和圖1~4可見待測藥

38、高、中、低劑量組及溶劑對照組，給藥前后犬的收縮壓、舒張壓、平均壓、心電圖、心率、呼吸變化未見明顯改變，統(tǒng)計學(xué)表明無顯著性差異。 結(jié)論待測藥 ???mg/kg體重、 ???mg/kg體重和???mg/kg體重十二指腸給藥后對麻醉犬的血壓、心電、呼吸沒有影響； ??? mg/kg體重、 ??? mg/kg體重和??? mg/kg體重口服灌胃后對小鼠的自由活動及一般行為也沒有明顯作用。,48,,表1 小鼠自由活動