生物,動(dòng)物,本科生畢業(yè)論文

1、骨骼肌TEF1轉(zhuǎn)錄因子下游靶基因Nudt6和Tcta的克隆、測序、SNP檢測及性狀關(guān)聯(lián)分華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)專業(yè)2006級(jí)1前言1.1研究背景骨骼肌的生長速度是豬的生產(chǎn)性能的主要決定因素之一，動(dòng)物的產(chǎn)肉力與肌纖維細(xì)胞的數(shù)量、長短、橫截面積和生長密切相關(guān)（Oksbjergetal.，2004）。因此加快肌肉的生長速度和提高瘦肉率一直都是豬遺傳改良研究的重點(diǎn)。但由于豬的產(chǎn)肉性狀大多是由多基因控制的數(shù)量性狀，通過常規(guī)選育難以進(jìn)一步提高。因此結(jié)

2、合分子標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行豬育種改良，可以為豬肌肉經(jīng)濟(jì)性狀的遺傳改良研究注入強(qiáng)大的新動(dòng)力，已成為一種趨勢。近年來，豬的分子遺傳育種取得了很大的進(jìn)展，許多新基因被分離克隆，并與豬肉質(zhì)性狀、胴體性狀和生長性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，從而為現(xiàn)代分子遺傳標(biāo)記應(yīng)用于豬遺傳育種提供了分子遺傳基礎(chǔ)，并推動(dòng)了豬育種的發(fā)展。因此對(duì)重要經(jīng)濟(jì)性狀候選基因的分離克隆和研究，為加快我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展、加速豬新品種的培育具有非常重要的意義。豬的生長性狀是提高養(yǎng)豬生產(chǎn)效率的重要基

3、礎(chǔ)，是當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)中的一個(gè)重點(diǎn)。而豬的生長性狀關(guān)鍵在于肌肉的生長，因此對(duì)肌肉生長相關(guān)的候選基因的研究成為必要。1.2TEF1在肌肉生長發(fā)育中的作用肌纖維細(xì)胞是由胚胎發(fā)育早期的成肌細(xì)胞經(jīng)過增殖和肥大而形成。雖然肌肉的發(fā)育和生長是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，但主要分為三個(gè)階段，即成肌細(xì)胞（myoblast）分化決定階段、成肌細(xì)胞的形成與分化階段和肌管（myotube）形成階段（Scott2003）。骨骼肌不同階段的演化涉及到許多細(xì)胞因子（如調(diào)節(jié)因子，

4、成肌決定因子，細(xì)胞周期作用因子和增強(qiáng)因子等），還包括細(xì)胞凋亡過程。目前已經(jīng)鑒定的調(diào)節(jié)因子包括轉(zhuǎn)錄因子、信號(hào)分子及生長因子。Nudt6在人的多種組織以及食管癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Nudt6和FGF2的過表達(dá)可以減少食管癌的復(fù)發(fā)率。而在豬上面還沒有關(guān)于該基因的報(bào)道。1.3.2Tcta的研究進(jìn)展1995年Aplan等在T細(xì)胞白血病易位斷點(diǎn)t（1；3）（p34；p21）克隆并鑒定了一個(gè)新的基因，并命名為Tcta（T細(xì)胞白血病易位相關(guān)基因），定位到3p

5、21。Tcta的mRNA在各種組織中都有表達(dá)，尤其在腎臟中表達(dá)最高。Tcta基因的功能還不清楚。但是在進(jìn)化過程中，從低等真核生物（如果蠅）和脊椎動(dòng)物中，各物種的Tcta基因高度保守。從ATG起始密碼子開始，Tcta基因僅有103個(gè)氨基酸殘基的開放閱讀框，編碼了相對(duì)分子質(zhì)量11300的蛋白質(zhì)，這個(gè)蛋白質(zhì)不與任何之前報(bào)到的蛋白質(zhì)同源。在4個(gè)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系的Southern雜交中，有3個(gè)細(xì)胞系Tcta表達(dá)減弱，表明Tcta基因的兩個(gè)拷貝中，

6、有一個(gè)缺失了。Tcta的mRNA在人的正常組織中廣泛表達(dá)，預(yù)示著它不可能涉及特定細(xì)胞的變異。Tcta的mRNA在腎臟的表達(dá)水平比其他組織的高，預(yù)示它編碼的蛋白質(zhì)有橫跨膜的作用，但還沒有發(fā)現(xiàn)明確的特征。2005年又報(bào)到Tcta可以在蛋白質(zhì)組圖譜水平，影響SMAD4蛋白。2009年ShigeruKotake等發(fā)現(xiàn)Tcta蛋白是人破骨細(xì)胞生成必須的。但是Tcta的功能依然不清楚。1.4SNP在豬育種中的應(yīng)用單核苷酸的多態(tài)性（SNP）是指由于一

7、個(gè)核苷酸突變導(dǎo)致的DNA序列多態(tài)性，包括單堿基的轉(zhuǎn)換(同型堿基的置換，一個(gè)嘧啶置換另一個(gè)嘧啶；一個(gè)嘌呤替換另一個(gè)嘌呤)、顛換(異型堿基的置換，即一個(gè)嘌呤替換另一個(gè)嘧啶；一個(gè)嘧啶置換另一個(gè)嘌呤)，以及單堿基的插入或缺失等。理論上講，SNP既可能是二等位多態(tài)性也可能是3個(gè)或4個(gè)等位多態(tài)性，但實(shí)際上，SNP具有偏愛性，后兩者非常少見，幾乎可以忽略。SNP幾乎遍布于整個(gè)基因組，非常的豐富。據(jù)估計(jì)，在人類基因組中，任何2個(gè)同源染色體間，估計(jì)平均每

8、1000個(gè)堿基對(duì)就有1個(gè)SNP。NCBI數(shù)據(jù)庫dbSNPBuild131版中人類（Homosapiens）SNPs已有32017159個(gè)，dbSNPBuild128版中豬（Susscrofa）SNPs已有374379個(gè):www.ncbi.nlm.nih.govprojectsSNPsnp_summary.cgi。單核苷酸多態(tài)性（SNP）是繼限制性片段長度多態(tài)性和微衛(wèi)星之后，新發(fā)展起來的第3代分子標(biāo)記，在人類和動(dòng)物基因組中普遍存在。具有密