糞便檢查病原學(xué)診斷

1、寄生蟲(chóng)病診斷、流行、防治 與臨床,,,（1）詢(xún) 問(wèn) 病 史 (History)：感染史、排蟲(chóng) 史及臨床癥狀,（2）體 格 檢 查 (Physical examination)： 皮下包塊、皮疹,一、Diagnosis of Parasitosis,患者，男，59歲，高校教師，長(zhǎng)沙市人，因生食魚(yú)片1月余在腹部皮膚出現(xiàn)匍行疹。經(jīng)皮膚組織活檢，在切片中發(fā)現(xiàn)棘顎口線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)切面，后從組織塊中分

2、離到殘存的蟲(chóng)體。,一、寄生蟲(chóng)病診斷(Diagnosis of Parasitosis),（1）詢(xún)問(wèn)病史 ( Taking History) 感染史、排蟲(chóng)史及臨床癥狀,（2）體格檢查 ( Physical Examination) 皮下包塊、皮疹,（3）實(shí)驗(yàn)室檢查 (Laboratory test),實(shí)驗(yàn)室檢查 (Laboratory test),1、基本原則 ( Basic principl

3、e )2、注意事項(xiàng) (Note)3、病原學(xué)檢查方法 ( Etiological test),（1）寄生蟲(chóng)通過(guò)宿主的排泄物、分泌物、 血 液離開(kāi)人體，繁殖力強(qiáng)，感染較 重 直接到宿主的排泄物、分泌 物、血液中 查找離體階段。,1、基本原則( Basic principle ),,A. Lumbricoides egg,S. Japonicum egg,B. Mal

4、ayi Microfilaria,Trichomonas vaginalis,（2）寄生蟲(chóng)通過(guò)宿主的排泄物、分泌物、 血液離開(kāi)人體。對(duì)感染較輕、數(shù)量較 少或離體階段個(gè)體太小者，可采取濃 集法查找離體階段。,1、基本原則( Basic principle ),Ancylostoma egg,Clonorchis. sinensis egg,（3）寄生于體內(nèi)卻在肛周產(chǎn)卵或蟲(chóng)卵在

5、 經(jīng)過(guò)肛門(mén)時(shí)粘附在肛門(mén)周?chē)?用肛門(mén)拭子法查蟲(chóng)卵。,1、基本原則( Basic principle ),Enterobius.vermicularis egg,,Taenia egg,（4）有離體階段的寄生蟲(chóng)在查不到離體 階段時(shí)，又高度懷疑為感染者或進(jìn) 行大面積人群調(diào)查——可采用免疫 學(xué)檢查。,1、基本

6、原則( Basic principle ),Circumoval precipitin test (COPT),（5）寄生于體內(nèi)卻無(wú)離體階段或呈隱性 感染——可采用組織活檢法查寄生 階段和血清學(xué)檢查。,1、基本原則( Basic principle ),Toxoplasma gondii trophozoite,,Trichinella spiralis cyst,（1）注意蠕蟲(chóng)卵之間和

7、原蟲(chóng)包囊之間的鑒別， 以及蠕蟲(chóng)卵與各種相似物之間的鑒別；,2、注意事項(xiàng) (Note),（2）注意各種檢查方法的適應(yīng)對(duì)象。,（3）有些寄生蟲(chóng)要注意采集標(biāo)本的時(shí)間及 送檢的時(shí)間。,（4）有些寄生蟲(chóng)的離體階段有間隙性排放 的特點(diǎn)，應(yīng)反復(fù)多次檢查。,（5）有些寄生蟲(chóng)的離體階段具有感染性， 實(shí)驗(yàn)室檢查時(shí)應(yīng)防止實(shí)驗(yàn)室感染。,（6）血清學(xué)檢查應(yīng)考慮交叉反應(yīng)、假陽(yáng)性

8、 和假陰性的存在，僅有輔助診斷意義。,2、注意事項(xiàng) (Note),寄生蟲(chóng)病實(shí)驗(yàn)室診斷Laboratory diagnosis of parasitic diseases,,病原學(xué)診斷 免疫學(xué)診斷 分子生物學(xué)診斷,1.糞便檢查*2.血液檢查*3.活體組織檢查4.其他排泄物或抽取液的檢查5.動(dòng)物接種,病原學(xué)診斷,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,原蟲(chóng)的滋養(yǎng)體 多種蠕蟲(chóng)卵,?生理鹽水直接涂片法,1.直接涂片法,原

9、蟲(chóng)的包囊,?生理鹽水直接涂片法?碘液直接涂片法,1.直接涂片法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,?直接涂片法簡(jiǎn)便易行，但若用糞量過(guò)少，則存在一定的漏檢率。,1.直接涂片法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,重力沉淀法,適合于比重大于水的原蟲(chóng)包囊及各種蠕蟲(chóng)卵。,重力沉淀法,1.直接涂片法2.濃集法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,1.直接涂片法2.濃集法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,浮聚法,飽和鹽水浮聚法硫酸鋅浮聚法,飽和鹽水浮聚法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,1

10、.直接涂片法2.濃集法,鉤蟲(chóng) 糞類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng) 毛圓線(xiàn)蟲(chóng),鉤蚴培養(yǎng)法,1.直接涂片法2.改良加藤氏法3.濃集法4.線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)培養(yǎng)法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,1.直接涂片法2.改良加藤氏法3.濃集法4.線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)培養(yǎng)法5.毛蚴孵化法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,棉拭子法 透明膠紙法,1.直接涂片法2.改良加藤氏法3.濃集法4.線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)培養(yǎng)法5.毛蚴孵化法6.肛門(mén)拭子法,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,,,病原學(xué)診斷 ?糞便檢查,

11、病原學(xué)診斷 ?血液檢查,瘧原蟲(chóng)絲蟲(chóng)利什曼原蟲(chóng)弓形蟲(chóng),病原學(xué)診斷 ?血液檢查,1.薄血膜法(查瘧原蟲(chóng)）,采血,,推片,,畫(huà)線(xiàn),,染色,,鏡檢,病原學(xué)診斷 ?血液檢查,2.厚血膜法(查瘧原蟲(chóng)和微絲蚴）,采血,,涂片,,溶血,,染色,,鏡檢,1.薄血膜法(查瘧原蟲(chóng)）,病原學(xué)診斷 ?血液檢查,注意事項(xiàng)：1.玻片的潔凈程度對(duì)涂制血膜的質(zhì)量有直接關(guān)系，因此要求嚴(yán)格按規(guī)程清洗玻片。,2. 采血時(shí)間：瘧疾現(xiàn)癥病人可隨時(shí)取血，一般以 寒熱

12、發(fā)作時(shí)或發(fā)作后數(shù)小時(shí)取血為好；夜現(xiàn)周 期型淋巴絲蟲(chóng)感染調(diào)查則應(yīng)在21～2時(shí)之間采 血。,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚,皮膚利什曼病 皮膚阿米巴病 豬囊尾蚴病 肺吸蟲(chóng)病 棘腭口線(xiàn)蟲(chóng)病 盤(pán)尾絲蟲(chóng)病 疥瘡,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓,杜氏利什曼原蟲(chóng),病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓? 淋巴結(jié),內(nèi)臟利什曼病 錐蟲(chóng)病 弓形蟲(chóng)病 絲蟲(chóng)病,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚?

13、骨髓? 淋巴結(jié)? 肌肉,旋毛蟲(chóng)病 囊蟲(chóng)病 裂頭蚴病 肺吸蟲(chóng)病,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓? 淋巴結(jié)? 肌肉? 直腸,溶組織內(nèi)阿米巴 血吸蟲(chóng)卵,病原學(xué)診斷 ?組織活檢,? 皮膚? 骨髓? 淋巴結(jié)? 肌肉? 直腸? 肺,衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)成蟲(chóng)/蟲(chóng)卵 溶組織內(nèi)阿米巴 卡氏肺孢子蟲(chóng),?痰液,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng) 蛔蟲(chóng)幼蟲(chóng) 鉤蟲(chóng)幼蟲(chóng) 糞類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng) 卡氏肺孢子蟲(chóng) 溶組織內(nèi)阿米

14、巴滋養(yǎng)體,?痰液?尿液,埃及血吸蟲(chóng)卵 腎膨結(jié)線(xiàn)蟲(chóng)卵 陰道毛滴蟲(chóng) 艾氏小桿線(xiàn)蟲(chóng)成蟲(chóng),病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物,陰道毛滴蟲(chóng) 溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物?十二指腸抽取液,藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(chóng) 華支睪吸蟲(chóng)卵 肝片形吸蟲(chóng)卵 布氏姜片蟲(chóng)卵 溶組織內(nèi)阿米巴大滋養(yǎng)體,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物?十二指腸抽取液?鞘膜

15、積液,班氏微絲蚴,病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,?痰液?尿液?陰道分泌物?十二指腸抽取液?鞘膜積液?腦脊液,弓形蟲(chóng) 耐格里屬阿米巴 廣州圓線(xiàn)蟲(chóng),病原學(xué)診斷 ?其他標(biāo)本檢查,病原學(xué)診斷 ?動(dòng)物接種,在懷疑弓形蟲(chóng)感染時(shí)，可采取血液、骨髓、淋巴結(jié)、腦脊液沉淀的涂片染色鏡檢，但陽(yáng)性機(jī)會(huì)不大，因此常將上述材料接種小白鼠以分離病原體。,1.皮內(nèi)試驗(yàn)(IDT)2.間接血凝試驗(yàn)(IHA)3.免疫熒光法（IF）4.免疫酶染色試驗(yàn)（IE

16、ST）5.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）6.膠體金免疫測(cè)定技術(shù)（CGIA）,免疫學(xué)診斷,免疫學(xué)診斷,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,1) 抗原包被2) 加樣（一抗）3) 洗滌4) 加酶標(biāo)抗體（二抗）5) 洗滌6) 加底物顯色7) 觀察結(jié)果,免疫學(xué)診斷,膠體金免疫測(cè)定技術(shù)（CGIA）,Dipstick,+ –,CT,,,免疫學(xué)診斷,存在的問(wèn)題 1. 不同寄生蟲(chóng)之間的交叉反應(yīng)， 2. 難以區(qū)分現(xiàn)癥感染與既往感染。,解

17、決辦法 1. 單一組分抗原， 2. 檢測(cè)短程抗體。,分子生物學(xué)診斷,1.核酸分子雜交技術(shù),,,*,蟲(chóng)體 DNA模板,標(biāo)記的 DNA 探針,,,,,,,分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),50?l反應(yīng)體系10×PCR緩沖液 5?lP1 0.2?mol/LP2 0.2

18、?mol/LdNTP 200?mol/LTaq酶 2U樣本DNA 0.1?g H2O 補(bǔ)足50?l,分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),94℃ 4’94℃ 1’56℃ 1’72℃ 1’72℃ 8’,,35 Cycles,

19、分子生物學(xué)診斷,2. PCR技術(shù),PCR技術(shù)具有高度的敏感性，有嚴(yán)格的操作要求，若操作不當(dāng)，很容易出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性，因此，在試驗(yàn)中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，并同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照。,湖 南 63794 76.705 4652.9,湖 南 63794 76.705

20、 4652.9,,感染蟲(chóng)種數(shù) 感染人數(shù) 平均感染率（%） 構(gòu)成比（%） 1 499871 33.8267 56.6709 2 256684 17.3700 29.1005

21、3 96225 7.3009 10.9091 4 24109 1.6315 2.7332 5 4372 0.2959

22、 0.4957 6 686 0.0464 0.0778 7 95 0.0064 0.0108 8

23、 16 0.0011 0.0018 9 2 0.0001 0.0002,,,,單一與多蟲(chóng)感染的感染率及構(gòu)成比,（二）寄生蟲(chóng)病的流行特點(diǎn),1、地方性：,a. 中間宿主與媒介昆蟲(chóng)的分布,（二）寄生蟲(chóng)病的流行特點(diǎn),1、地方性：,a. 中間宿

24、主與媒介昆蟲(chóng)的分布,b. 生活習(xí)慣和生產(chǎn)方式 ( 血吸蟲(chóng)的感染方式),（二）寄生蟲(chóng)病的流行特點(diǎn),1、地方性：,a. 中間宿主與媒介昆蟲(chóng)的分布,b. 生活習(xí)慣和生產(chǎn)方式 ( 血吸蟲(chóng)的感染方式),c. 氣候,2、季節(jié)性：,a. 媒介昆蟲(chóng)的季節(jié)性所致,b. 人類(lèi)生產(chǎn)、生活活動(dòng)形成感染季節(jié)性,（二）寄生蟲(chóng)病的流行特點(diǎn),,2、季節(jié)性：,a. 媒介昆蟲(chóng)的季節(jié)性所致,b. 人類(lèi)生產(chǎn)、生活活動(dòng)形成感染季節(jié)性,c. 寄生蟲(chóng)在外界發(fā)育及活動(dòng)的季節(jié)性,（二）

25、寄生蟲(chóng)病的流行特點(diǎn),,3、自然疫源性,a. 基本概念： 有些人體寄生蟲(chóng)無(wú)明顯宿主特異性， 可寄生于多種動(dòng)物，這些寄生蟲(chóng)可在 無(wú)人參與的情況下在動(dòng)物之間相互傳 播。這種性狀稱(chēng)自然疫源性。,b. 人獸共患寄生蟲(chóng)病(parasitic zoonoses):

26、 在脊椎動(dòng)物與人之間自 然傳播的寄生蟲(chóng)病。,c. 意義：(a) 反映寄生蟲(chóng)在自然界的演化過(guò)程； (b) 反映寄生蟲(chóng)病在流行病學(xué)和防治中 的復(fù)雜性；,（二）寄生蟲(chóng)病的流行特點(diǎn),（三）流行三環(huán)節(jié),1、傳 染 源 體內(nèi)有寄生蟲(chóng)生存、繁殖，并能將 寄生蟲(chóng)排出體外的人和動(dòng)物。

27、,2、傳播途徑 寄生蟲(chóng)由傳染源排出以后，經(jīng)過(guò)一 定的方式再侵入其他易感者所經(jīng)過(guò) 的途徑。,經(jīng)口感染,蛔蟲(chóng)、蟯蟲(chóng)、溶組織內(nèi)阿米巴、肺吸蟲(chóng)、肝吸蟲(chóng)、帶絳蟲(chóng)等,感染方式小結(jié),,經(jīng) 口 感 染,自 體 外 感 染,自 體 內(nèi) 感 染,輸 血

28、 感 染,經(jīng) 胎 盤(pán) 感 染,直 接 接 觸 傳 播,由 節(jié)肢 動(dòng)物 傳 播,經(jīng)皮膚、粘膜感染,蛔蟲(chóng)、蟯蟲(chóng)、溶組織內(nèi)阿米巴、肺吸蟲(chóng)、肝吸蟲(chóng)、帶絳蟲(chóng)等,鉤蟲(chóng)、血吸蟲(chóng)、絲蟲(chóng)等,絲蟲(chóng)、瘧原蟲(chóng)、利氏曼原蟲(chóng),陰道毛滴蟲(chóng)、疥螨,弓形蟲(chóng),瘧原蟲(chóng),豬帶絳蟲(chóng),蟯蟲(chóng),感染方式小結(jié),,,,,,,,,（三）流行三環(huán)節(jié),1、傳 染 源 體內(nèi)有寄生蟲(chóng)生存、繁殖，并能將

29、 寄生蟲(chóng)排出體外的人和動(dòng)物。,2、傳播途徑 寄生蟲(chóng)由傳染源排出以后，經(jīng)過(guò)一 定的方式再侵入其他易感者所經(jīng)過(guò) 的途徑。,3、易感人群 對(duì)寄生蟲(chóng)有較高感受性的人群。,（四）影響寄生蟲(chóng)病流行的因素,1、自然因素 溫度、濕度、雨量、植被、地理環(huán)

30、 境等。,各?。▍^(qū)、市）總感染率分級(jí)標(biāo)化感染率（%） ?。▍^(qū)、市）17.0~29.9 黑龍江、內(nèi)蒙古 北30.0~39.9 吉林、寧夏、北京、天津、山西40.0~49.9 河北、新疆、甘肅、青海、陜西、上海

31、50.0~59.9 湖北、西藏、山東、遼寧60.0~69.9 江蘇、河南、安徽70.0~79.9 廣東、云南、湖南、江西80.0~89.9 浙江、貴州、四川、福建、廣西90.0~ 海南

32、 南,,,,,（四）影響寄生蟲(chóng)病流行的因素,1、自然因素 溫度、濕度、雨量、植被、地理環(huán) 境等。,3、社會(huì)因素 國(guó)家政策、經(jīng)濟(jì)狀況、科學(xué)水平、 文化教育、醫(yī)療衛(wèi)生、防疫保健、生產(chǎn)方式。,2、生物因素 中間宿主、媒介昆蟲(chóng)。,原則：切斷寄生蟲(chóng)病流行的三環(huán)節(jié),（一）消 滅 傳 染 源

33、 普查、普治病人、帶蟲(chóng)者以及 保蟲(chóng)宿主,（二）切斷傳播途徑 加強(qiáng)糞便和水源管理，注意環(huán) 境和個(gè)人衛(wèi)生，控制和消滅傳 播媒介及中間宿主,（三）保 護(hù)

34、易 感 者 加強(qiáng)個(gè)體防護(hù)，提高自我保護(hù) 意識(shí),,,患者周××，男，25歲，某部戰(zhàn)士，四川五勝縣人，因糞便毛蚴孵化陽(yáng)性而入院?；颊?965年入伍，駐四川省西昌專(zhuān)區(qū)某地，該地為血吸蟲(chóng)病流行區(qū)，入伍后，曾參加水稻種植，常與疫水接觸。1967年間因經(jīng)常有間歇性腹瀉，懷疑患血吸蟲(chóng)病，在本單位先后作毛蚴孵化檢查八次，均為陰性。后又發(fā)現(xiàn)肝、脾腫

35、大。1970年8月曾在部隊(duì)醫(yī)院割治扁桃腺，住院期間曾作過(guò)血吸蟲(chóng)皮內(nèi)試驗(yàn)，呈陽(yáng)性反應(yīng)，但因乙狀結(jié)腸組織鏡檢未見(jiàn)蟲(chóng)卵而未能確診。出院回原單位后，于一次腹瀉后在衛(wèi)生隊(duì)又做糞便毛蚴孵化檢查，結(jié)果孵出毛蚴，才確診為血吸蟲(chóng)病。,體格檢查：肝可觸及，有壓痛。脾于肋緣下約 2cm處觸及，中等硬度，無(wú)壓痛。余 無(wú)異常?；?yàn)結(jié)果：白細(xì)胞總數(shù)7400，嗜酸性粒細(xì)胞10%， 肝功能正常。治療