化學(xué)原料藥質(zhì)量研究及原始記錄常見問題討論--余立

1、化學(xué)原料藥質(zhì)量研究及原始記錄常見問題討論,余立yuliyy8716@vip.sina.com,,,特性研究-理化、穩(wěn)定性,對照品研究-標(biāo)化、校正因子,方法研究-建立、驗(yàn)證,原料藥研究的特點(diǎn),,雜質(zhì)研究-工藝、殘留溶劑,,1,4,3,2,建立標(biāo)準(zhǔn)時要考慮的問題,,,,,,,Growth,200820072006,200520042003,200220012000,常見研究誤區(qū)以及供參考的經(jīng)驗(yàn)和體會,新版藥典動態(tài)對化學(xué)原料藥

2、質(zhì)量研究的影響,研發(fā)原始記錄中常見問題及改進(jìn)建議,,,,主要討論內(nèi)容,Click to edit title style,,,,雜質(zhì)控制,微?？刂?安全性控制,,注射劑所用的原輔料應(yīng)從來源及工藝等生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格控制并應(yīng)符合注射用的質(zhì)量要求。,標(biāo)準(zhǔn)增項(xiàng),雜質(zhì)譜的比較,供注射用原料質(zhì)控變化重點(diǎn)提示,雜質(zhì)控制力度大幅度提高,,未修訂品種,,鹽酸阿糖胞苷,* 性狀項(xiàng)下還有熔點(diǎn)和比旋度項(xiàng)，,第一次飛躍,第二次飛躍,

3、,有關(guān)物質(zhì)的研究 －雜質(zhì)質(zhì)控理念的變遷,,雜質(zhì)譜的定義,Impurity Profile （雜質(zhì)譜）: A description of the identified and unidentified impurities present in a drug substance. 對存在于藥品中所有已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的總的描述。,www.themegallery.com,Company Logo

4、,名詞解釋,已鑒定雜質(zhì)Identified Impurity,特定雜質(zhì)Specified Impurity,潛在雜質(zhì)PotentialImpurity,雜質(zhì)譜Impurity Profile,,,,,已確證了結(jié)構(gòu)特征的雜質(zhì),在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查并有自己限度標(biāo)準(zhǔn)的雜質(zhì)。已鑒定或未鑒定,按照理論推測在生產(chǎn)或貯藏過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)，實(shí)際產(chǎn)品中不一定存在,存在于藥品中的雜質(zhì)組成或模式,Click to edit title styl

5、e,,,,選擇最優(yōu),多種互補(bǔ),結(jié)構(gòu)確證,,比較雜質(zhì)的數(shù)與量，一致或基本一致，物質(zhì)基礎(chǔ)相同決定可否橋接已上市藥品的安全有效性結(jié)果,雜質(zhì)譜比較,雜質(zhì)譜的比較,新方法,分析方法的有效性（氨芐西林鈉/舒巴坦鈉）,原方法,中國抗生素雜志，2009，34：734,在對各國藥典方法比較的基礎(chǔ)上確定分析方法,雜質(zhì)譜的比較－多種互補(bǔ),不同色譜系統(tǒng)（流動相、色譜柱、波長）不同檢測器（uv、DAD）不同原理的方法-分離或檢測,雜質(zhì)譜的比較－多種互補(bǔ),

6、柱串聯(lián)技術(shù)適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，通過將一根SCX（陽離子交換）短柱與一根MGⅡ C18長柱串聯(lián)就可以簡單達(dá)到將其分離的目的。原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會由于SCX短柱的離子交換作用而被保留在短柱中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會毫無阻礙的通過短柱進(jìn)入C18長柱中，從而成功分離；然后由于MGⅡC18長柱中疏水性基團(tuán)間的相互作用而對

7、中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對帶負(fù)電荷物質(zhì)無強(qiáng)保留作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡單被分開了如果為了讓峰形更好，各峰間分離更開，還可在陽離子交換短柱與C18長柱前接一根NH2短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。,雜質(zhì)譜分析的基本途經(jīng),新雜質(zhì)的研究 －藥物雜質(zhì)的可能來源,1.原料：紅霉素 A、紅霉素 B、紅霉素 C、紅霉素D、紅霉素 E、紅霉素

8、 F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素 C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉素C 6，9-亞胺醚、紅霉素A內(nèi)酰胺 3.副產(chǎn)物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素A、N-去甲基阿奇霉素A、氨基阿奇霉素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉素A、N-去甲基-N-苯磺?；⑵婷顾?、阿奇霉素N-氧化物、3’-去（二

9、甲氨基）- 3’,4’-去氫阿奇霉素、 O-甲苯磺酰基紅霉素肟、紅霉素Z肟重排物、氮紅霉素11，12-硼酸酯、 N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷顾谹、丙基阿奇霉素、3’-N， N-去二甲基氨基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產(chǎn)物：去克拉克定糖阿奇霉素A、去克拉克定糖氮紅霉素、紅霉素8， 9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉素6，9：9，12-螺縮酮,阿奇霉素中可能存在的雜質(zhì)：37種,www.themegalle

10、ry.com,Company Logo,,結(jié)構(gòu)確證常用的方法,模擬色譜圖,實(shí)際色譜圖,毒性快速評價平臺,斑馬魚毒性快速評價平臺，對雜質(zhì)的胚胎毒性、神經(jīng)毒性，心臟毒性等進(jìn)行評價。優(yōu)點(diǎn)：雜質(zhì)用量少無需知道雜質(zhì)結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)周期短（3－4天一個周期）,,藥物耳毒性檢測利用一種特殊染料對斑馬魚幼體頭部耳蝸區(qū)神經(jīng)丘毛細(xì)胞的染色，檢測毛細(xì)胞的存活狀態(tài)，來判斷檢測物的耳毒性。下圖中紅色圈示耳蝸區(qū)域；給藥組中紅色箭頭示給藥后毛細(xì)胞減少，黃色圈示

11、給藥后1神經(jīng)丘消失。,給藥后,,,系統(tǒng)對照組（正常幼體）,,增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控,結(jié)合藥品的制法和工藝特點(diǎn)，以及雜質(zhì)的特殊性設(shè)立特色有針對性檢測項(xiàng)目，最大限度解決安全隱患。 人尿制品增加乙肝表面抗原檢查：如尿激酶、尿促性素、絨促性素、烏司他丁等重組品種增加菌體蛋白殘留量、外源性DNA殘留量如重組人生長激素、重組人胰島素等。含不飽和脂肪酸的品種增加甲氧基苯胺值檢查：如多烯酸乙酯（P272）等。,增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)-甲氧基苯胺

12、值,含有不飽和脂肪酸的藥物在生產(chǎn)和貯藏過程中易被氧化，初級氧化產(chǎn)物一般不穩(wěn)定，又可進(jìn)一步生成醛類等化合物，而甲氧基苯胺值（也稱p-茴香胺值）就是ISO推薦的一種對此類降解產(chǎn)物進(jìn)行評價的手段，歐洲藥典附錄2.5.36收載了此測定方法。藥物的甲氧基苯胺值越高，說明其劣變程度越嚴(yán)重。測定原理：甲氧基苯胺與醛反應(yīng)生成醇胺，醇胺脫水生成的醛亞胺可采用紫外-可見分光光度法在350nm波長處測定。,增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)-甲氧基苯胺值,注意：甲氧基苯胺

13、試劑為無色結(jié)晶，具有一定毒性，使用時應(yīng)避免接觸皮膚，一旦失誤，需用水沖洗15分鐘以上。甲氧基苯胺的冰醋酸溶液不穩(wěn)定，需當(dāng)天配制使用。以異辛烷作空白做基線校正時，如果測得的甲氧基苯胺冰醋酸溶液的吸光度超過了0.2，則需重新配制試劑。供試品溶液中加入0.25％的4-甲氧基苯胺冰醋酸溶液后應(yīng)注意避光，在350nm波長處的吸光度隨時間的延長緩慢增加，需準(zhǔn)確放置10分鐘后測定，盡量減小誤差。本試驗(yàn)受水分影響較大，樣品及試劑中水分的存在會導(dǎo)致反

14、應(yīng)不完全，測定值偏低，當(dāng)樣品中水分含量超過0.1%時，可按10g樣品加1～2 g無水硫酸鈉的比例脫除水分后測定。另外，應(yīng)取用新開啟包裝的供試品。,2-乙基己酸β-內(nèi)酰胺類抗生素對生產(chǎn)工藝過程中使用2-乙基己酸的原料，增加此項(xiàng)檢查，采用氣相色譜法測定；方法增訂為附錄－2010年版藥典二部（附錄Ⅶ L）； 如:頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐西林鈉等。,2-乙基己酸 勘誤：β-內(nèi)酰胺類抗生素對生產(chǎn)工藝

15、過程中使用2-乙基己酸的原料，增加此項(xiàng)檢查，采用氣相色譜法測定；方法增訂為附錄－2010年版藥典二部（附錄Ⅶ L）； 如:頭孢地嗪鈉、頭孢呋辛鈉、頭孢孟多酯鈉、氨芐西林鈉等?？闭`：,,目前中國不僅接受了ICH對化學(xué)藥品中殘留溶劑控制的理念，而且結(jié)合中國國情，建立了具有中國特色的殘留溶劑檢查方法?！吨袊幍洹?005版中，對殘留溶劑的分類及限度標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)與ICH的要求完全一致，但僅在附錄中作為原則性統(tǒng)一要求。 《中國藥典》20

16、10版中，原料藥要求在各論項(xiàng)下根據(jù)其生產(chǎn)工藝制定殘留溶劑檢查方法抗生素原料藥幾乎所有品種均在各論項(xiàng)下增訂了詳細(xì)的殘留溶劑檢查方法 從附錄走向各論,殘留溶劑,如：頭孢泊肟酯 殘留溶劑 照殘留溶劑測定法（附錄Ⅷ P）測定。 甲醇、乙腈、丙酮、二氯甲烷、異丙醇、丁酮、乙酸乙酯、四氫呋喃、乙酸丁酯、1,2-二氯乙烷、乙酸異丙酯、苯、四氯化碳、環(huán)己烷、二氧六環(huán)、甲基異丁基酮、吡啶、甲苯 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 略

17、 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正丙醇適量，用二甲基亞砜稀釋制成每1ml中約含200μg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。,殘留溶劑,,殘留溶劑檢查方法及驗(yàn)證,除正文已明確列有“殘留溶劑”檢查的品種必須依法進(jìn)行檢查外，其他未在“殘留溶劑”項(xiàng)下明確列出的有機(jī)溶劑與未在正文中列有此項(xiàng)的品種，如生產(chǎn)過程中引入或產(chǎn)品中殘留有機(jī)溶劑，均應(yīng)按附錄“殘留溶劑測定法”檢查并應(yīng)符合相應(yīng)溶劑的規(guī)定,檢測方法進(jìn)行了相應(yīng)的調(diào)整：頂空進(jìn)樣甲烷氣體，記錄死時間(t0)頂空進(jìn)樣供試品

18、溶液，記錄色譜圖，按公式計(jì)算諸色譜峰的保留時間( tR )相對于參考物質(zhì)保留時間( t’R )的相對調(diào)整保留時間( Relative adjustment retention time，RART)法替代RRT法tR為組分的保留時間;t’R為參比物的保留時間。t0為甲烷保留時間。,殘留溶劑,檢測方法選擇：直接進(jìn)樣？頂空進(jìn)樣？限度比較？對照品法？標(biāo)準(zhǔn)加入法？內(nèi)標(biāo)？外標(biāo)？驗(yàn)證項(xiàng)目確定：回收試驗(yàn)？最低定量限？最低檢測限？線性？耐

19、用性試驗(yàn)？原始記錄較常發(fā)現(xiàn)的問題連帶問題：按無水無溶劑計(jì)算,殘留溶劑方法建立、驗(yàn)證與常見問題,高聚物凝膠色譜法（2010年版新增的19個標(biāo)準(zhǔn)）,高聚物2010版：品種增加,方法多元化 1、 自填柱和商品玻璃柱：填料常用葡聚糖凝膠G-10（Sephadex G 10）；短柱子的使用，減少分離時間 2、 商品凝膠柱TSK-GEL G2000SWXL ：頭孢地嗪（北京所） 3、ODS柱，聚合物-氨芐西林鈉舒巴坦鈉（浙江所)

20、 4、柱切換（中檢所），實(shí)現(xiàn)凝膠色譜與反相色譜的統(tǒng)一,高聚物　鹽酸頭孢替安聚合物分析方法的比較,,,,Sephadex G-10系統(tǒng),TSK-Gel G2000swxl系統(tǒng),0.8ml/min,供注射用原料可見異物檢查,頭孢他啶：取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸鈉溶液（經(jīng)0.45μm濾膜濾過）溶解，依法檢查（附錄Ⅸ H），應(yīng)符合規(guī)定。頭孢地嗪鈉：取本品5份，每份2.0g，分別加微粒檢查用水溶解，依法檢查（附錄Ⅸ H），

21、應(yīng)符合規(guī)定。,有些品種如堿性藥物與玻璃容器久置起反應(yīng)，產(chǎn)生白點(diǎn)、白塊和玻璃屑有些品種如甲硝唑等與重金屬發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生不溶物有些品種如喹諾酮類藥物對金屬設(shè)備產(chǎn)生腐蝕，易有金屬屑有些品種如胰島素等提取的生化大分子易產(chǎn)生蛋白沉淀有些品種如頭孢噻肟鈉等成鹽不完全，溶解度太低，產(chǎn)生白點(diǎn)、白塊,引發(fā)不合格的部分原因,供注射用原料不溶性微粒檢查,頭孢他啶：取本品3份，加1%碳酸鈉溶液（經(jīng)0.45μm濾膜濾過）溶解制成每1ml中含30mg的溶液

22、，依法檢查（附錄Ⅸ C），每1g樣品中含10μm以上的微粒不得過6000個，含25μm以上的微粒不得過600個。頭孢曲松鈉：取本品3份，加微粒檢查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法檢查（附錄Ⅸ C），每1g樣品中含10μm以上的微粒不得過6000個，含25μm以上的微粒不得過600個。,供注射用的原料藥增加不溶性微粒檢查以保證制劑能符合注射劑的要求由于光阻法測定結(jié)果僅與一定濃度范圍內(nèi)樣品溶液成正比，故標(biāo)準(zhǔn)給出了不溶性微

23、粒檢查供試品溶液濃度制劑最多有11個規(guī)格，均按每1g樣品中含10µm以上的微粒不得過6000粒，含25µm以上微粒不得過600粒；,強(qiáng)化不溶性微粒等項(xiàng)目控制,強(qiáng)化不溶性微粒等項(xiàng)目控制,供注射用原料不溶性微粒檢查,可見異物/不溶性微粒檢查,原始記錄問題不詳細(xì)無趨勢缺方法摸索及分析原始記錄建議,控制生產(chǎn)環(huán)境和過程中的污染-外源異物考察藥物與容器的兼容性-內(nèi)源異物考察活性成分的穩(wěn)定性以及與溶劑/添加物的穩(wěn)定性

24、-內(nèi)源異物深刻理解“藥品的質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”認(rèn)真做好處方研究/工藝驗(yàn)證和穩(wěn)定性考察！,可見異物檢查的目的,標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一、規(guī)范、明確、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)湫晚?xiàng)目-無菌檢查方法,無菌檢查是藥物安全性風(fēng)險控制的重要項(xiàng)目之一，但具體檢查方法以前標(biāo)準(zhǔn)中均不給出，由檢驗(yàn)者自己摸索。抗生素陽性菌選用不注意抗菌譜，存在試驗(yàn)的有效性、一次成功率等問題對每個品種均要求經(jīng)過驗(yàn)證，確定樣品使用的最適宜方法（直接接種法？薄膜過濾法），最佳溶解方式、最佳沖洗液、沖洗方式、敏感的

25、陽性對照菌等操作關(guān)鍵因素，并將上述內(nèi)容按統(tǒng)一規(guī)范格式在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中單獨(dú)立項(xiàng)表述詳細(xì)。,供注射用原料無菌檢查,供注射用原料無菌檢查,頭孢呋辛鈉：取本品3份，加1%碳酸鈉溶液（經(jīng)0.45μm濾膜濾過）溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法檢查（附錄Ⅸ C），每1g樣品中含10μm以上的微粒不得過6000個，含25μm以上的微粒不得過600個。頭孢曲松鈉：取本品3份，加微粒檢查用水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法檢查（附錄Ⅸ

26、C），每1g樣品中含10μm以上的微粒不得過6000個，含25μm以上的微粒不得過600個。,無菌檢查方法規(guī)范表述方式舉例,氧氟沙星氯化鈉注射液： 無菌 取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，用0.1%無菌蛋白胨水溶液分次沖洗（每膜不少于500ml），每管培養(yǎng)基中加入0.1mol/L硫酸錳溶液1ml，以大腸埃希菌為陽性對照菌，依法檢查（附錄Ⅺ H），應(yīng)符合規(guī)定。乙酰谷酰胺注射液： 無菌 取本品，經(jīng)薄膜過濾法處理，用0.1%無菌

27、蛋白胨水溶液分次沖洗（每膜不少于100ml），以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌，依法檢查（附錄Ⅺ H），應(yīng)符合規(guī)定。,注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示,純度要高、雜質(zhì)要少、生物負(fù)荷要低＊從源頭控制雜質(zhì)的數(shù)和量、染菌的數(shù)和量、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素重點(diǎn)品種為營養(yǎng)性、無抑菌性、制劑有注射劑型注射劑用原料注重數(shù)量口服原料也要限定菌屬種類（沙門氏菌）,原料藥微生物限度檢查,注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示,胰島素（制劑為注射劑）取本品0.2g,依法檢查（附

28、錄Ⅺ J），每1g中含細(xì)菌數(shù)不得過300個。胰酶（制劑為口服制劑，來源于動物提?。┤”酒?依法檢查（附錄Ⅺ J），每1g供試品中細(xì)菌數(shù)不得過10000個，霉菌和酵母菌總數(shù)不得過100個。并不得檢出大腸埃希菌；每10g供試品中不得檢出沙門菌。,原料藥微生物限度檢查,注射劑制劑通則變化重點(diǎn)提示,必要時應(yīng)增設(shè)相應(yīng)的安全性檢查，如異常毒性、過敏反應(yīng)、溶血與凝聚、降壓物質(zhì)、熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素等因?yàn)橛行┧幬锍煞謴?fù)雜、組分結(jié)構(gòu)不清晰（如多組分抗生

29、素動物來源提取的生化藥等）、采用化學(xué)手段難于監(jiān)控雜質(zhì)異常毒性：有可能污染生物毒性物質(zhì)的品種（發(fā)酵）過敏反應(yīng)：有可能污染異源蛋白或未知過敏反應(yīng)物質(zhì)的品種降壓物質(zhì)：有可能污染組胺、類組胺樣物質(zhì)的品種（腐?。?供注射用原料安全性檢查,增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控,用化學(xué)手段不能控制組成、雜質(zhì)無法控制的生物來源品種均增加了異常毒性、過敏反應(yīng)等動物試驗(yàn)：如硫酸魚精蛋白等,硫酸魚精蛋白,魚精蛋白主要存在于魚類的成熟精巢組織中，與DNA緊密結(jié)

30、合在一起，以核精蛋白的形式存在。它是一種小而簡單的球形堿性蛋白質(zhì)，分子量在1萬以下，由30個左右的氨基酸組成，其中2/ 3以上是精氨酸，幾乎不含芳香族氨基酸。 吸光度 參照BP2008/EP6.0增訂。根據(jù)本品組成，如果純化步驟將核酸和雜蛋白均去除的話，在260?280nm的波長范圍內(nèi)吸光度應(yīng)很小，但考察結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過BP2008/EP6.0所規(guī)定的0.1。,峰1. 縮宮素；峰2. 三氯叔丁醇，其余均為雜質(zhì)峰,縮宮素注射液HPLC檢查

31、色譜圖,增設(shè)有效項(xiàng)目指標(biāo)加強(qiáng)安全性監(jiān)控,成分復(fù)雜、雜質(zhì)無法控制但質(zhì)量與顏色相關(guān)度高的品種增加溶液的顏色，如糜蛋白酶等。,溶液顏色檢查的目的,,,溶液顏色,,自身性質(zhì),,純度,,雜質(zhì)含量,-簡易、直觀、快速、綜合的對有色雜質(zhì)進(jìn)行檢查,,,,,穩(wěn)定性差,質(zhì)量與顏色聯(lián)系緊密的,安全性要求高,用儀器定量測雜質(zhì)困難,注射劑用原料,僅在紫外區(qū)查雜質(zhì),成分復(fù)雜,變質(zhì)就變色,檢查顏色的品種,適宜進(jìn)行溶液的顏色檢查的原料,建立方法時要考慮的問題

32、,,,,溶劑,濃度,穩(wěn)定性,,臨床安全性需要工藝生產(chǎn)能力同類產(chǎn)品水平,溶液的顏色,制訂限度時要考慮的問題,,,,主成分純度,雜質(zhì)的含量,穩(wěn)定性數(shù)據(jù),,臨床安全性需要工藝生產(chǎn)能力同類產(chǎn)品水平,顏色的限度,應(yīng)用色差計(jì)轉(zhuǎn)換進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn)-舉例,溶液的顏色 取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液應(yīng)無色；如顯色，與同體積的比色液（取棕紅色貯備液1.8ml加8.2ml水，混勻）比較（中國藥典2010年版二部附錄Ⅸ A第一法）

33、，不得更深。,色差計(jì)法應(yīng)用舉例,說明：企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)按EP檢查，規(guī)定“與B5號標(biāo)準(zhǔn)比色液（EP第5版2.2.2溶液的顏色）比較不得更深”。因EP標(biāo)準(zhǔn)比色液從三原色開始就與中國藥典不同，如按此檢查會有困難，故采用色差計(jì)進(jìn)行了對比測定，結(jié)果EP的B5號標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差值（△E*=3.58）與中國藥典BR3號（△E*=3.19）和BR4號（△E*=4.46）的中值（3.82）較為接近，約相當(dāng)于BR3.5號。因BR3號是取棕紅色貯備液1.5ml加8.

34、5ml水，BR4號是取棕紅色貯備液2.0ml加8.0ml水配制而成，所以本次復(fù)核將棕紅色貯備液1.8ml加8.2ml水配制了專用比色液，該比色液的△E*為3.64，與EP B5號標(biāo)準(zhǔn)比色液的色差值幾乎一致，按此轉(zhuǎn)換限度既不改變質(zhì)控原有水平，又方便在國內(nèi)檢驗(yàn)。,應(yīng)用色差計(jì)轉(zhuǎn)換進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn)-舉例,藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例,由于某些藥物組成的復(fù)雜性，特別是一些生物大分子藥物，使用傳統(tǒng)的分析方法已經(jīng)不能滿足當(dāng)前的質(zhì)控需要，2010年版藥典逐

35、漸改用現(xiàn)代分析技術(shù)。 首次運(yùn)用毛細(xì)管電泳法 注射用抑肽酶：檢查兩個特定雜質(zhì) 注射用鹽酸頭孢吡肟： 方法1-毛細(xì)管電泳法 N-甲基吡咯烷 方法2-HPLC法（羧基柱，電導(dǎo)檢測）,,毛細(xì)管電泳法檢查特定雜質(zhì),抑肽酶由上海藥檢所起草，參考USP增訂去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙氨酸抑肽酶檢查項(xiàng)色譜條件：石英毛細(xì)管分離柱，毛細(xì)管溫度

36、：30℃，電極液：磷酸二氫鉀溶液；分離壓：12KV；波長：214nm結(jié)果：去丙氨酸抑肽酶RT為0.99，去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶RT為0.98，兩相關(guān)物間分離度1.40，去丙氨酸-抑肽酶與抑肽酶間分離度1.24、抑肽酶拖尾因子1.8,抑肽酶SDS-PAGE凝膠電泳圖,本品系自牛胰或肺中提取、純化制得的肽酶抑制劑。采用SDS-PAGE凝膠電泳的方法抑肽酶的有關(guān)物質(zhì)，結(jié)果如圖所示，都只有一個條帶?？赡苁且蛛拿负陀嘘P(guān)物質(zhì)的分子量相差不大

37、，使用凝膠電泳不能將其分離,藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例,首次運(yùn)用柱串聯(lián)技術(shù)-抑肽酶 參照USP32用三根TSK柱串聯(lián)檢查高分子蛋白質(zhì)。采用分子排阻色譜法，用三根色譜柱串聯(lián)（TSK-G4000SWXL柱）柱溫35℃，流速1.0ml/min,二聚體RT0.9，與主峰分離度1.4，主峰拖尾因子0.91。,藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例,柱串聯(lián)技術(shù)適用于溶解度無明顯差異但電荷上有明顯差異的難分離物質(zhì)，通過將一根SCX（陽離子交換）短柱與一根MGⅡ

38、C18長柱串聯(lián)就可以簡單達(dá)到將其分離的目的。原理：有電荷差異的被分離物質(zhì)進(jìn)入色譜柱串聯(lián)系統(tǒng)后，帶正電荷的物質(zhì)（通常是堿性物質(zhì)）會由于SCX短柱的離子交換作用而被保留在短柱中，而帶負(fù)電荷的物質(zhì)（通常為酸性物質(zhì)）與中性物質(zhì)則會毫無阻礙的通過短柱進(jìn)入C18長柱中，從而成功分離；然后由于MGⅡC18長柱中疏水性基團(tuán)間的相互作用而對中性物質(zhì)有強(qiáng)保留作用，但對帶負(fù)電荷物質(zhì)無強(qiáng)保留作用，這樣帶負(fù)電荷物質(zhì)與中性物質(zhì)也簡單被分開了如果為了讓峰形更好，

39、各峰間分離更開，還可在陽離子交換短柱與C18長柱前接一根NH2短柱（它可與陰離子發(fā)生交換作用），進(jìn)行三根串聯(lián)，也可以使帶負(fù)電荷的酸性物質(zhì)與中性物質(zhì)達(dá)到更好的分離效果。,藥典采用現(xiàn)代分析技術(shù)舉例,首次運(yùn)用肽圖分析技術(shù)： 根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點(diǎn)，使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶，一般為肽鏈內(nèi)切酶，作用于特殊的肽鏈位點(diǎn)將多肽裂解成小片斷，再通過一定的分離檢測手段形成特征性指紋圖譜，用此法進(jìn)行鑒別，專屬性強(qiáng)，可鑒別僅相差一

40、個氨基酸殘基的不同種屬來源的樣品。 如胰島素-采用V8酶解+HPLC法； 重組人生長激素-采用胰蛋白酶酶解+HPLC法獲得肽圖進(jìn)行鑒別等。,胰島素肽圖,人胰島素酶解-HPLC肽圖,豬胰島素酶解-HPLC肽圖,,,電泳法-等電聚焦水平板電泳法,,,,,,,,,,,瓊脂糖凝膠電泳法,醋酸纖維素薄膜電泳法,紙電泳法,等點(diǎn)聚焦水平板電泳法,聚丙烯酰胺凝膠電泳法,SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法,典型的等電聚焦圖譜重組人生長激素（二部第56

41、6頁）用此法做鑒別,純化水、注射用水和滅菌注射用水的增修訂,純化水、注射用水的修訂增訂：,電導(dǎo)率,,氯化物硫酸鹽鈣鹽二氧化碳,替代,總有機(jī)碳測定,易氧化物,可任選一項(xiàng),,藥典中新檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用,藥典附錄通用檢測方法變化提示,重金屬檢查法： 甲管（標(biāo)準(zhǔn)）＋乙管（供試品） +丙管（標(biāo)準(zhǔn)+供試品） 如丙管顏色淺于甲管則將一法改為二法進(jìn)行檢查 勘誤！第二法規(guī)定乙管（標(biāo)準(zhǔn)）中顯出的顏色與甲管（供試品）比較，不

42、得更深。,附錄通用檢測方法中的變化提示,澄清度檢查法： 增加“幾乎澄清”的定義：0.5號～1號溶液顏色檢查法 恢復(fù)“無色或幾乎無色”的定義 性狀顏色描述與顏色檢查項(xiàng)匹配：原有些液體制劑品種顏色檢查項(xiàng)規(guī)定“與黃色2號標(biāo)準(zhǔn)比色液比較，不得更深”，但性狀描述為“無色或幾乎無色的澄明液體”，與附錄定義不匹配，現(xiàn)修訂為“無色至微黃色的澄明液體”。 本版藥典中極個別品種仍然存在此問題！尼莫地平注射液,藥典附錄變化提示

43、 －引濕性試驗(yàn)指導(dǎo)原則,重金屬檢查法：pH測定法：不溶性微粒檢查法：可見異物檢查法：滲透壓摩爾濃度：,,引濕性試驗(yàn)原始記錄 -容易出現(xiàn)的錯誤,實(shí)驗(yàn)日期（全檢合格之后） 實(shí)驗(yàn)時間（24小時） 實(shí)驗(yàn)溫度、濕度 稱量瓶提前放置記錄,藥典附錄變化提示 －鈉鹽的鑒別反應(yīng),重金屬檢查法：pH測定法：不溶性微粒檢查法：可見異物檢查法：

44、滲透壓摩爾濃度：,藥典附錄變化提示 －鋅鹽的鑒別反應(yīng),重金屬檢查法：pH測定法：不溶性微粒檢查法：可見異物檢查法：滲透壓摩爾濃度：,重新做考察:取樣量,輔料干擾,延伸-環(huán)境友好,Page ? 75,,,,碘值、皂化值、酸值,折光率,比旋度,熔點(diǎn),相對密度,餾程,吸收系數(shù),黏度,凝點(diǎn),物理常數(shù)研究,吸收系數(shù),物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時的吸光度數(shù)值。 研究意

45、義及應(yīng)用趨勢的改變 原始記錄問題,Page ? 77,,,,干燥失重,重金屬,溶液的澄清度,硫酸鹽,酸堿度,氯化物,水分,銨鹽,結(jié)晶性,一般檢查項(xiàng)研究,按照凡例要求，在標(biāo)準(zhǔn)中增訂【制法要求】,來源于人尿或動物組織，采用提取工藝制備的供注射用的原料藥或直接與傷口接觸的制劑應(yīng)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加【制法要求】，重申其生產(chǎn)過程的安全性要求。 供其他劑型用原料（如口服制劑）暫未在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中制訂【制法要求】，而由凡例作統(tǒng)一規(guī)范。,【制法要求】的

46、表述形式,例1：肝素鈉（動物組織提取） 本品應(yīng)從檢疫合格的豬或牛腸粘膜中提取，生產(chǎn)過程均應(yīng)符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求。生產(chǎn)工藝要經(jīng)病毒滅活驗(yàn)證，并能去除有害的污染物，生產(chǎn)過程中應(yīng)確保不被外來物質(zhì)污染。 例2：尿促性素（人尿提?。?本品應(yīng)從健康人群的尿中提取，生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求。本品在生產(chǎn)過程中需經(jīng)適宜的工藝方法處理，以使任何病毒如肝炎病毒和人免疫缺陷病毒等滅活。 例3：凝血酶凍干

47、粉（直接與傷口接觸的制劑） 本品應(yīng)從檢疫合格的?；蜇i血中提取，生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求。,《已有國家標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品研究技術(shù)指導(dǎo)原則 》在選擇參比對照時一般遵循以下原則：如原發(fā)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品已在我國上市，一般首選原發(fā)廠產(chǎn)品作為參比對照；如不能獲得原發(fā)廠產(chǎn)品，可以考慮選用研究基礎(chǔ)較好、臨床應(yīng)用較為廣泛的非原發(fā)廠產(chǎn)品作為參比對照；也可以對不同廠家生產(chǎn)的同品種進(jìn)行質(zhì)量對比，優(yōu)選質(zhì)量較好的產(chǎn)品作為參比對照。,,比較研究

48、的標(biāo)尺問題 -被仿制藥品的選擇原則,,,,,原研品,,認(rèn)可度高,,首仿品,,被仿品,注意 ：可比性 - 貯存時間大致相同！ 真實(shí)性 – 提供發(fā)票、標(biāo)簽、批號或照片,,比較研究的標(biāo)尺問題 -被仿制藥品的選擇原則,比較研究的標(biāo)尺問題 -購買的對照品/標(biāo)準(zhǔn)品,,,對照品/標(biāo)準(zhǔn)品,,權(quán)威性,,真實(shí)性,,準(zhǔn)確性,-發(fā)票、標(biāo)簽、批號、分析報告單、鹽基/堿基、水分,,

49、,,,詳細(xì)精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報告標(biāo)定方法與結(jié)果,詳細(xì)提取精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn) 報告、標(biāo)定方法與結(jié)果,詳細(xì)合成精制方法、質(zhì)量檢驗(yàn)報告、標(biāo)定方法與結(jié)果,,,,純化精制,提取精制,合成精制,比較研究的標(biāo)尺問題 -非購買的對照品/標(biāo)準(zhǔn)品,標(biāo)定者 測定結(jié)果（%） 　n 均值（%） RSD（%） 1. 98.

50、82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17% 5 99.11% 　 0.17% 2. 98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98% 5 99.04% 　 0.12% 3. 99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18% 5 99.06% 　

51、 0.09%經(jīng)Corchan檢驗(yàn)，三位標(biāo)定者的方差沒有差異，均來自同一正態(tài)分布。用Dixon法檢驗(yàn)15組數(shù)據(jù)中的最大值99.25%，最小值98.82% 均非離群值。 T1-0.05×S置信區(qū)間 μ= X± = 99.08±0.068 n1/2標(biāo)定結(jié)果的置信區(qū)間為99

52、.15~99.01%，因此，本批對照品的色譜純度總均值為99.08%。,,對比研究≠對比檢驗(yàn)研究項(xiàng)目≠ 原執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)考察方法≠ 原法定標(biāo)準(zhǔn),,比較研究的范圍與方法 -考察項(xiàng)目與方法的選擇原則,物料不同－原料、輔料分析對象｛ 工藝不同－路線、中間體 設(shè)備不同－參數(shù) 不全面－沒的學(xué)已有標(biāo)準(zhǔn)｛不完善－不應(yīng)學(xué) 不適用－不能學(xué),,為什么呢？,,,,,

53、產(chǎn)品生產(chǎn)個性應(yīng)關(guān)注 標(biāo)準(zhǔn)隱性變化 同類最新動態(tài),,如何在已有標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上變化拓展,,,,,,如何借鑒進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn),,讀懂,取長補(bǔ)短,更上一層樓,學(xué)到位,,+,,先進(jìn)性,完成時應(yīng)該是當(dāng)時最為嚴(yán)格的同品種標(biāo)準(zhǔn),,,專屬性,僅屬于某個企業(yè)專有,,,個性化,某些項(xiàng)目的適用性及推廣性較差,,,保密性,非公開的，僅在CDE，中檢所和口岸所等部門存檔,進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn)的特點(diǎn),棄去5ml初濾液用xx膜過濾，柱溫25℃

54、加預(yù)柱用聚四氟酰胺小瓶機(jī)械振搖xx分鐘等等,借鑒進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn)－讀懂、學(xué)到位,對于不該學(xué)的、不方便學(xué)的、學(xué)不了的、需轉(zhuǎn)換的要盡量不降低質(zhì)控水平替換例如:某季銨鹽片可能具有食道刺激性，所以選用了在酸性條件下可溶、但在堿性條件下僅膨脹而不溶解的材料進(jìn)行包衣，以保證服用后在食道中不破裂但在胃液中仍可快速崩解 ，包衣的質(zhì)量與服用后的刺激性相關(guān),借鑒進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn) －取長補(bǔ)短、更上一層樓,耐水時間：取本品20片

55、，分別置2只裝有200ml水的燒杯中，每只燒杯中放置10片，在37±0.5℃水浴中保溫，觀察各片破裂，崩解時間，20片的耐水時間平均值應(yīng)超過45分鐘，小于20分鐘的不得多于2片，小于10分鐘的不得多于1片,借鑒進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn) －取長補(bǔ)短、更上一層樓,該檢查項(xiàng)立意雖好，但實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和限度制訂還不夠科學(xué)合理。比如，根據(jù)破裂還是完全崩解記錄時間標(biāo)準(zhǔn)中沒有明確，而通常從破裂到完全崩解是需要一段時間的，現(xiàn)在靜

56、態(tài)檢驗(yàn)間距就會更大；還有，如果耐水時間平均值規(guī)定應(yīng)超過45分鐘，還允許有小于10分鐘的樣品出現(xiàn)，那么樣品間存在的質(zhì)量差異就過大。,借鑒進(jìn)口藥注冊標(biāo)準(zhǔn) －取長補(bǔ)短、更上一層樓,耐水時間 取本品20片，分別置2個裝有200ml水的燒杯中，每個燒杯放入10片，在37℃±0.5℃水浴中保溫，觀察各片的破裂情況，45分鐘內(nèi)各片均應(yīng)完整不破裂，如有破裂，20片的耐水時間平均值應(yīng)不低于45分鐘，在20分鐘內(nèi)破