樂果對(duì)土壤微生物菌群結(jié)構(gòu)的影響及降解特性的研究.pdf

1、農(nóng)藥是一類能夠抑制、消除農(nóng)作物病蟲害、或是防止雜草繁衍的生物外源性物質(zhì)。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，農(nóng)藥，尤其是化學(xué)農(nóng)藥的施用，是保障糧食作物產(chǎn)量穩(wěn)定甚至幫助增產(chǎn)的一個(gè)重要手段。而如今，因?yàn)檗r(nóng)藥的過量使用以及過多殘留而引起的土壤污染日益嚴(yán)重，因其而造成的環(huán)境問題也早已不容忽視，使得降解農(nóng)藥殘留的技術(shù)方法成為了一個(gè)研究的熱點(diǎn)問題。通常，農(nóng)藥污染土壤的修復(fù)方法包括有生物修復(fù)、化學(xué)修復(fù)和物理修復(fù)幾種。三者之中，生物修復(fù)法被公認(rèn)為是一種高效、安全、廉價(jià)和

2、無二次污染的方法。在有機(jī)磷農(nóng)藥的降解中，微生物修復(fù)法發(fā)揮著重要的作用。作為有機(jī)磷農(nóng)藥的重要一種，樂果的大量使用直接威脅到了人類健康。
　　本文采用從土壤中直接抽提微生物的總DNA的方法，考察了土壤中微生物種群多樣性的變化，完善了樂果污染土壤的微生物修復(fù)技術(shù)的研究。利用DGGE技術(shù)對(duì)樂果污染土壤的種群多樣性的研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度樂果處理樣品中, DGGE圖譜有一定的差異性。由于樂果對(duì)微生物的多樣性與生長(zhǎng)具有一定的抑制作用，樂果的加入改

3、變了環(huán)境中微生物原來的群落結(jié)構(gòu)，從而使其種群多樣性在DGGE膠上表現(xiàn)為條帶數(shù)目及亮度的變化。隨著土壤有效樂果濃度的變化，同一時(shí)期不同樂果濃度處理下，微生物種群多樣性隨著樂果的濃度增加而呈現(xiàn)變少的趨勢(shì)，但仍有部分菌群呈現(xiàn)出一定的耐受性。
　　本文采用人工馴化的方式，通過在自制的馴化裝置中添加樂果作為生長(zhǎng)限制底物，從土壤中分離出一株對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥具有一定降解效果的菌株。
　　本文首先考察了該菌株的對(duì)樂果的降解能力，結(jié)果表明該菌株能在

4、以樂果為唯一碳源的環(huán)境中生長(zhǎng)，并對(duì)樂果有一定的降解效果。本文隨即探討了菌株的生理生化特征及其形態(tài)特征，并提取了菌株的基因組 DNA作為模板，進(jìn)行16S rRNA的PCR擴(kuò)增并測(cè)序。測(cè)序后登錄GenBank，序列號(hào)為 HM488993，命名為L(zhǎng)Px。采用blast程序與其他菌株16S rRNA基因的同源性比較的結(jié)果顯示，與菌株 LPx16S rRNA基因同源性最高的是假單胞菌屬。菌株 LPx與Pseudomonas sp. KA-08（G

5、enBank Accession No.：FN421340）、Pseudomonas sp. ONBA17（GenBank Accession No.：DQ079062）的16S rRNA序列的同源性均為100％，結(jié)合該菌株的生理生化特性與形態(tài)特征，初步鑒定菌株LPx為假單胞菌屬。
　　本文對(duì)考察了菌株LPx降解樂果的特性。結(jié)果表明菌株LPx降解樂果的最適pH為7.5、最佳溫度為30℃、最適接種量為10%。
　　本文探討了菌