現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)概況

1、現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)概況,主講人：周曉龍講課時間：2016年1月6號,病理學(xué)的定義,Pathology 是病痛（ pathos）的研究(logos) 聯(lián)系基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床醫(yī)學(xué)的橋梁 研究疾病狀態(tài)下細(xì)胞、組織和器官結(jié)構(gòu)和功能的改變通過各種手段解釋疾病，為臨床診斷，治療和疾病的預(yù)防提供依據(jù),病理學(xué)技術(shù),病理學(xué)包括病理學(xué)理論和病理學(xué)技術(shù)。病理學(xué)技術(shù)是“病理學(xué)之母”。病理學(xué)的理論和技術(shù)被視為一輛車的兩個輪子，缺一不可，互為依存，互相促進，兩者的

2、結(jié)合決定著病理學(xué)的發(fā)展。 病理學(xué)技術(shù)包括尸體解剖、大體標(biāo)本的制作、制片（石臘切片、冰凍切片、半薄切片、超薄切片等）、組織化學(xué)方法，免疫組化技術(shù)、原位雜交、分子病理技術(shù)、電鏡技術(shù)、圖像分析等。 病理技術(shù)的發(fā)展促進了病理學(xué)理論的進步。,病理學(xué)的發(fā)展,器官病理學(xué)時代：Giovanni Battista Morgagni （1682 ,1 –1771,11） 意大利解剖學(xué)家現(xiàn)代解剖病理學(xué)之父

3、編寫《疾病的位置與原因》，包含646例解剖記錄 奠定了病理學(xué)發(fā)展的基礎(chǔ)遺憾：沒有將病理與臨床聯(lián)系,病理學(xué)的發(fā)展,組織病理學(xué)時代Rudolf Virchow （1821,10-1902,12) 德國醫(yī)生現(xiàn)代病理學(xué)之父編著《細(xì)胞病理學(xué)》開創(chuàng)了細(xì)胞病理學(xué)時代,病理學(xué)的發(fā)展,現(xiàn)代病理學(xué)時代(近400年歷史）電子顯微鏡：細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀察免疫病理學(xué)：免疫組化技術(shù)的應(yīng)用分子病理學(xué)：疾病遺傳和基因的研究數(shù)字病理學(xué)：,病理學(xué)技術(shù),

4、傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù) HE染色技術(shù) 組織化學(xué)染色 細(xì)胞病理學(xué)技術(shù),現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù) 超微病理 免疫病理 分子病理 數(shù)字化病理,傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù),病理學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)和根本，是臨床和科研最常用的技術(shù)全手工操作發(fā)展為自動化的機器：脫水機，包埋機，封片機，染色機，包埋盒和切片打號機，液基細(xì)胞制片技術(shù)材料的優(yōu)化：塑料包埋盒，一次性切片刀試劑的該進：試劑的商業(yè)化，非污染環(huán)保試劑低溫恒

5、冷切片機替代二氧化碳制冷機等,現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù),免疫組織化學(xué)技術(shù)：發(fā)展快，應(yīng)用廣，已成為臨床診斷，靶向藥物的篩選以及科研的重要手段；盡管存在問題。電鏡技術(shù)：包括透射電鏡，掃描電鏡，免疫電鏡等，用于腫瘤的分型，腎臟病的診斷，肌肉疾病的診斷等；科研。分子病理技術(shù)：近20年來發(fā)展最快，分子生物學(xué)技術(shù)與病理形態(tài)結(jié)合，用于疾病診斷和分類，靶向藥物的篩選，病原體的檢測，遺傳學(xué)研究等。數(shù)字化病理：病理切片掃描技術(shù)，遠(yuǎn)程會診，圖像分析系統(tǒng)，檔案的數(shù)

6、字化管理。 病理技術(shù)的進步促使人類的認(rèn)識從大體、細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)、分子基因水平逐步深入。,免疫組化(pubmed檢索）,,應(yīng)用免疫學(xué)（抗原抗體反應(yīng)）和組織化學(xué)（化學(xué)反應(yīng)）的原理，對組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些成份進行原位定性、定位甚至定量研究的技術(shù)。,現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù),免疫組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用：臨床診斷和鑒別診斷腫瘤的分型腫瘤起源的判斷靶向藥物的篩選腫瘤生物學(xué)行為的判斷病原體的檢測……?,分子病理(pubme

7、d檢索）,現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù),分子病理學(xué)技術(shù)：FISHPCR原位雜交基因測序分子病理學(xué)技術(shù)的應(yīng)用診斷與鑒別診斷腫瘤預(yù)后判斷藥物的篩選…….,分子病理在臨床中的應(yīng)用,肺非小細(xì)胞癌EGFR突變的檢測：EGFR突變陽性者應(yīng)用絡(luò)氨酸激酶藥物（易瑞沙）有效，否則效果不佳血尿的診斷：檢測9號，3號，17號，7號染色體可以輔助膀胱癌的診斷和預(yù)測術(shù)后復(fù)發(fā)的可能C-kit突變的檢測：C-kit突變可用于選擇是否使用藥物”格列衛(wèi)“大腸癌

8、k-ras基因檢測：ras基因突變對西妥昔單抗治療無效，患者預(yù)后差。淋巴瘤的分型：應(yīng)用FISH檢測可輔助淋巴瘤的分型，為臨床治療提供依據(jù)?！?.,電子顯微鏡技術(shù),電子顯微鏡，包括透射電鏡和掃描電鏡電鏡技術(shù)包括負(fù)染色技術(shù)、冷凍蝕刻技術(shù)、電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、電鏡X射線顯微分析技術(shù)、電鏡放射自顯影技術(shù)等主要用于腎小球腎炎的分型確定腫瘤細(xì)胞的組織發(fā)生、類型和分化程度掃描電鏡能夠直接觀察樣品的表面的結(jié)構(gòu)，血管腔面改變,共聚焦激光掃描顯微

9、鏡 （confocal laser scanning microscopy）,利用計算機及圖像處理系統(tǒng)對組織，細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進行斷層掃描，再現(xiàn)三維立體空間結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)研究從平面圖像水平提高到三維立體水平；在觀察培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的同時，直接顯示培養(yǎng)活體細(xì)胞內(nèi)的代謝變化。,共聚焦激光掃描顯微鏡,觀察活細(xì)胞、活組織：ＬＳＣＭ在不損傷細(xì)胞的前提下,對活組織、活細(xì)胞進行觀察和測量，省去了繁瑣的樣品前期處理過程，而且觀察過的樣品還可以繼續(xù)用于

10、其他的研究。這種功能對于細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因研究尤為重要。這可以說是ＬＳＣＭ最大的優(yōu)勢。生化成分精確定位觀察：配合專用的分子探針,對于要檢測的成分不僅可以定位到細(xì)胞水平,還可以定位到亞細(xì)胞水平和分子水平,共聚焦激光掃描顯微鏡,動態(tài)觀察：在同一樣品平面上隨時間進行連續(xù)掃描,就可分析細(xì)胞結(jié)構(gòu)、內(nèi)含、和標(biāo)記等動力學(xué)變化。如觀察心肌或平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣、鈉、鉀離子濃度或ｐＨ的動態(tài)變化。數(shù)據(jù)、圖像的數(shù)字化：計算機代替了普通的照相機,得到的圖像是數(shù)

11、字化的,可及時輸出或長期儲存,而且還可進一步加工處理。定量測量：應(yīng)用專一的熒光探針對樣品進行染色,樣品的熒光強度和所測成分的含量呈正比, 通過對比各組樣品之間的熒光強度值,可得出特定成分的含量比。,生物芯片技術(shù),基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片、以及元件型微陣列芯片、通道型微陣列芯片、生物傳感芯片等新型生物芯片。可對DNA、RNA、多肽、蛋白質(zhì)、細(xì)胞、組織以及其它生物成分進行高效快捷的測試和分析。,組織芯片,組織芯片又稱組織微

12、列陣（tissue microarray） 是將數(shù)十個 數(shù)百個乃至上千個小的組織片整齊的排列在一起到載玻片,形成微縮的組織切片。,激光顯微切割術(shù) （Laser micro-desection）,在顯微鏡下用手工或儀器采樣的方法從組織切片或細(xì)胞涂片上將所要研究的形態(tài)或表型相同的細(xì)胞從組織三維構(gòu)造中分離出來，獲得純的細(xì)胞群（pure cell population），以備進一步作分子水平的研究。微切割技術(shù)的貢獻就是克服了組織的細(xì)胞成分非常