江蘇省動物實驗上崗培訓

1、熱烈歡迎參加實驗動物從業(yè)人員上崗培訓的各位老師！,考試形式：上機考試,時間為60分鐘（到時間網(wǎng)絡自動關機），共100道題，分為是非(40×0.5)題、單選題(40×1)和多選題(20×2)，85分為合格。注意：請務必帶好個人身份證方可入場考試！模擬考試網(wǎng)址:www.sgks.org,一.基本概念,實驗動物：指經(jīng)人工飼養(yǎng)、繁育，對其攜帶的微生物及寄生蟲實行控制、遺傳背景明確或來源清楚，應用于科學研究

2、、教學、生產(chǎn)和鑒定以及其它科學實驗的動物。亦稱狹義的實驗動物實驗用動物：泛指所有應用于科學實驗的動物,包括實驗動物、野生動物、經(jīng)濟動物和觀賞動物。也稱廣義的實驗動物.,實驗動物科學誕生于20世紀50年代國際實驗動物科學協(xié)會的簡稱為ICLAS，其網(wǎng)址為www.iclas.com中國實驗動物信息網(wǎng)：www.lascn.net我國《實驗動物質量管理法》頒布于1997年，由科技部聯(lián)合技術監(jiān)督局等單位共同頒布?！秾嶒瀯游锕芾項l例》是19

3、88年經(jīng)國務院批準頒布的世界最大的實驗大、小鼠商品化生產(chǎn)、銷售公司：美國查士利華實驗室1961年，ICLA與WHO合作，于1979年改名為ICLAS20世紀40年代，美、日、法等過相繼成立了實驗動物學會或類似組織,我國已建立嚙齒類動物的種子中心（上海和北京）國家實驗動物質量檢測中心掛靠在中國醫(yī)科院實驗動物所GLP（良好實驗室操作規(guī)范）是用于新藥臨床前安全性評價的法規(guī)《實驗動物管理條例》規(guī)定，實驗動物繁育和動物實驗不能在同一區(qū)

4、域。,實驗動物許可證的有效期為5年，生產(chǎn)許可證的申請必須種子來源可靠，有健全的質量管理制度，環(huán)境符合國家標準。許可證的發(fā)放向科技部門申請，由科技部門組織專家評審，合格后發(fā)放許可證。包括生產(chǎn)和使用許可證兩種。國家種子中心、實驗動物質量檢測機構的主要任務（p82）近交系：連續(xù)20代或20代以上近親交配所培育而成的品系。如BALB/C,C57BL/6J,DBA,C3H,A/He等（常以F加數(shù)字表示近交代數(shù)）。封閉群：以非近親繁殖方式，不

5、從外部引入新個體的前提下至少連續(xù)繁殖4代以上。引種數(shù)目不少于25對。如KM，SD, Wistar等,雜交群：不同品系或種群間雜交產(chǎn)生的后代近交系小鼠常選用10個染色體上的13個生化位點作為純度檢測的方法，而大鼠一般選用9個位點；皮膚移植一般用同系異體移植同源突變系：兩近交系除指明位點外其他基因完全相同重組近交系：兩近交系雜交后再連續(xù)20代近交而成（以Χ表示）同源導入近交系：通過雜交-互交或回交等方式將一基因導入到近交系中,遺傳污

6、染：管理疏忽，本品系與其他品系動物交配遺傳漂變：飼養(yǎng)過程中可能發(fā)生的隨機改變，多由于殘留雜合基因的分離突變：基因組中某個核苷酸堿基的置換、缺失或插入引起等位基因的改變近交系數(shù)：表示近交程度普通動物：不攜帶規(guī)定的人畜共患病原和烈性傳染病病原清潔動物：除普通動物應排除的病原外，不攜帶對動物危害大和對科研干擾大的病原,無特定病原體動物：除清潔動物應排除的病原外，不攜帶潛在感染和條件致病、對科學實驗干擾大的病原無菌動物：不可檢出一切

7、生命體普通級兔應排除兔出血癥病毒、普通豚鼠應排除淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒、普通猴應排除猴B病毒實驗動物按遺傳控制可分為：近交系、封閉群、雜交群和突變系實驗動物按微生物控制可分為：普通動物、清潔動物、無特定病原體（SPF）和無菌動物,3R指的是：減少（Reduction)、替代(Replacement)、優(yōu)化(Refinement).動物福利除了生理福利外，還包括心理福利、衛(wèi)生福利、行為福利、環(huán)境福利普通級、清潔級和SPF級動

8、物微生物和寄生蟲的檢測頻率均為每三個月檢測一次。無菌動物為每年至少檢測一次.取樣數(shù)量：群體〈100，取樣〉5只；群體大小為100-500,取樣〉10;群體〉500,取樣〉20只;無菌動物每個隔離器取樣2只2000年6月，人類基因組計劃完成。小鼠是繼人之后第二個完成基因測序的哺乳動物。小鼠與人類功能基因的同源性高達90%以上，是最為理想的模式動物，并作為基因改造的材料,實驗動物的環(huán)境與設施動物實驗可用R=(A+B+C)×D

9、+E公式表示，其中R表示動物實驗中實驗動物的總反應； A表示動物種間的共同反應； B表示動物的品種品系特有反應； C表示動物的個體反應； D表示環(huán)境因素； E表示實驗誤差。（1959年由Russell和Bruch提出動物的表現(xiàn)型受周圍環(huán)境的影響而出現(xiàn)不同的演出型）光照對動物的是個強烈的刺激因素，起定時器的作用屏障設施內,粗效空氣過濾器設置在取風口;中效過濾器設置在正壓處;高效過濾器設置在系統(tǒng)末端,生物安全柜為活病原微生物的動物實驗設

10、施;動\植物確實存在或潛在危害的,該實驗需在感染性動物實驗設施內進行普通環(huán)境飼養(yǎng)普通級動物;屏障環(huán)境飼養(yǎng)清潔級或SPF級動物;隔離環(huán)境飼養(yǎng)無菌動物實驗動物環(huán)境指標中,只有氨氣濃度是動態(tài)檢測指標;屏障環(huán)境的空氣潔凈度指標為10000級國標中，生產(chǎn)型和使用型屏障系統(tǒng)大小鼠溫度為20-26℃;相對濕度為40%-70%;換氣次數(shù)為10-20次/h;氣流速度為0.1-0.2m/s;壓強梯度為20-50Pa國標中，使用型屏障系統(tǒng)工作照度為1

11、50-300lx;動物照度為15-20lx,實驗動物環(huán)境檢測標準規(guī)定,普通犬\兔繁育生產(chǎn)設施內(生產(chǎn)型)溫度為16-28℃;濕度為40-70%;換氣次數(shù)為8-10次/h;氣流速度0.1-0.2m/s;工作照度為150-300lx;動物照度100-200lx; (使用型)溫度為16-26℃;濕度為40-70%;換氣次數(shù)為8-10次/h;氣流速度0.1-0.2m/s;工作照度為150-300lx;動物照度100-200lx籠器具產(chǎn)品抽檢數(shù)

12、量,籠箱及引水瓶為10-15只/次/批;網(wǎng)蓋和籠架為3-5只/次/批動物適宜的溫度為21-27 ℃，（相對）濕度為40-70%國標中規(guī)定，實驗動物室氨濃度應小于14mg/m3；噪音低于60db;,實驗動物設施的空調系統(tǒng)按空氣處理設備的設置不同一般分為集中式、局部式和半集中式。集中式即集中冷源，并將全部空氣處理設備集中在同一機房內，處理過空氣經(jīng)風道、風口送至屏障設施內?？諝鈦y流利用稀釋作用是室內產(chǎn)生的灰塵均勻擴散而被“沖淡”，一般采

13、用上送下回的形式，使氣流自上而下與塵埃重力沉降方向一致?？諝鈦y流是流向單一，并具有一定的、均勻的斷面速度的氣流組織形式。,實驗動物飼料與營養(yǎng),豚鼠和獼猴體內不能合成維生素C,須從飼料中獲得大小鼠、兔目前常用的是顆粒飼料；貯存的顆粒飼料的含水率應低于11%飼料滅菌的最佳方式是輻照必須氨基酸只能從飼料中提供，而非必須氨基酸體內能合成，無須從飼料中供給。碳水化合物是體內能量的主要來源，其中粗纖維可促進胃腸蠕動；無氮浸出物可提供熱能并可

14、轉化成脂肪,飼料中脂肪有真脂肪（由脂肪酸和甘油組成）和類脂肪（由脂肪酸和甘油及其他含氮物質組成）飼料抽樣數(shù)量為0.5Kg/次/批維生素A維持上皮的形態(tài)與功能；維生素D參與鈣磷調節(jié)；維生素E與生殖泌乳有關大小鼠飼料水分≤10%；豚鼠維持料蛋白≥17%，繁殖料蛋白≥20%；兔維持飼料粗蛋白≥ 14%，繁殖料粗蛋白≥ 17%；犬維持飼料粗蛋白 ≥ 20%，繁殖料粗蛋白≥ 24%,實驗動物的生物學特性一.小鼠屬于嚙齒目,初生為紅色,1

15、2-13天睜眼,妊娠期19-21天，哺乳期為20-22天,雌性有5對乳頭,成年體重為18-40克,一般生育期為1年，壽命為1-2年.體溫為36.5 ℃,KM鼠每胎產(chǎn)8-15只,維生素A過量可致繁殖紊亂二.大鼠嚙齒目,新生為紅色,約5-6克; 8-10天長牙;14-17天睜眼;妊娠期哺乳期均為21天; 為常年多發(fā)情動物;成年體重為250-450克;壽命為2-3年;封閉群平均產(chǎn)仔數(shù)為8只;尾是散熱器官;無膽囊;體溫37.5℃。近交系大

16、鼠：ACI,F344,SHR,BN,AGUS;封閉群：Long-Evans, Brown-Norway(飼養(yǎng)類），SD, Wistar,三.豚鼠:嚙齒目,草食動物,妊娠期為68天,哺乳期21天,剛出生就有視力,初生體重75-100克,有1對乳頭,每胎產(chǎn)3-4只,一般壽命為6年;體內缺少合成維生素C的酶(猴),免疫學研究首選動物,是最早獲得無菌動物的實驗動物。無尾巴四.地鼠嚙齒目, 有冬眠和假妊娠現(xiàn)象,妊娠期16天，是哺乳動物中妊

17、娠期最短的動物;哺乳期21天;有頰囊,可貯存食物;為全年多發(fā)情動物;壽命2-2.5年。中國地鼠無膽囊, 有5對乳腺;金黃地鼠有乳腺6-7對。,五.兔兔形目；有圓小囊；是眼科研究首選動物；妊娠期32天,哺乳期42天;為刺激性排卵動物(貓);有季節(jié)性換毛現(xiàn)象;有乳腺4對;其胸腔構造與其他動物不同;有食糞癖;也有假妊娠現(xiàn)象;對缺鈣耐受力強;壽命8年左右;體溫為39.2℃六.犬食肉目,紅綠色盲,幾乎沒汗腺,春秋季單發(fā)情動物,妊娠期60天

18、,哺乳期60天,性周期180天,對脂肪耐受強.對嘔吐敏感,成年正常體溫是38℃，易建立條件反射,七.貓除夏季外均可發(fā)情，屬季節(jié)性多發(fā)情動物;善攀登和跳躍;妊娠期63天，哺乳期60天;有4對乳頭;可根據(jù)光線的強弱靈敏的調節(jié)瞳孔;喜孤獨自由的生活;飼料中重點補充維生素.八.猴有頰囊；有月經(jīng)周期，與人的生殖生理非常接近；妊娠期165天左右，哺乳期6個月以上；對嘔吐反應靈敏；主要組織相容性抗原（RhLA)與人的HLA相似；能用手操縱工具

19、;是脊髓灰質炎疫苗研究鑒定的動物,八.小型豬偶蹄目;常年多發(fā)情;妊娠期114,哺乳期1個月;是皮膚燒傷實驗研究的首選動物;平均體溫為38℃九.沙鼠 嚙齒目,大小介于大、小鼠之間，成年重78克；常年多發(fā)情；性成熟10-12月；平均壽命2-4年;有自發(fā)性癲癇??；可建立腦缺血模型;應激時腎上腺釋放糖皮質激素和黃體酮,牛羊屬于偶蹄目，草食性多胃動物馬屬于奇蹄目.鼠兔與家兔體形相似,是草食動物;有換毛現(xiàn)象;,實驗方法,動物標記中染色

20、法最簡單、適用于小動物短期實驗；常用染色液：苦味酸、硝酸銀、品紅；染色編號方法：先左后右，先上后下，單一顏色可標記1-10號；烙印常用溶于酒精的黑墨染色；還有耳緣剪孔法局部麻醉常用浸潤麻醉大小鼠豚鼠肌肉注射部位：大腿外側面腹腔注射常選擇在腹白線兩側大小鼠尿液采集適宜用代謝籠，采集未污染尿液則應采用導尿法；大小鼠大量采血常采用股動脈采血,犬、貓的皮下注射一般在大腿外側，靜脈注射不超過10ml小鼠（20g）一般灌胃不超過0.8ml

21、、腹腔注射不超過1.0ml、靜脈注射不超過0.8ml大鼠一般灌胃不超過5ml、腹腔注射不超過4ml、靜脈注射不超過4ml靜脈注射 兔:耳緣靜脈，最大容量10ml;猴:皮下淺層靜脈(小隱、股、頭靜脈），最大容量20ml；犬最大容量100ml。肌肉注射最大給藥量 猴：3ml；犬：4ml。兔少量多次采血一般為耳緣靜脈采血,動物實驗中，去除被毛的方法有拔毛法、剪毛法、剃毛法和脫毛法；小動物一般采用剪毛法、大動物采用剃毛法吸入

22、麻醉常用乙醚、氯仿；腹腔和靜脈麻醉一般持續(xù)時間長，過程平穩(wěn)，常用巴比妥類、氯氨酮、水合氯醛、氨基甲酸等；全身麻醉時一般禁食不少于8小時化學藥物致死最好采用CO2、KCl；家兔處死常用空氣栓塞法,動物模型按產(chǎn)生原因分為：自發(fā)性模型：應用價值高，與人類相應疾病相似程度高，但來源困難，種類有限誘發(fā)性模型：來源多，條件易控制、但相似程度稍差；誘發(fā)性腫瘤模型分為原位和異位誘發(fā)抗疾病模型：特定疾病不在某動物身上發(fā)生生物醫(yī)學模型：某些動物

23、特殊的生理結構如兔的胸腔結構按中醫(yī)分類：陰虛、陽虛、氣虛、血虛、腎虛、厥脫癥,裸鼠為先天性無胸腺，常用于人體腫瘤移植研究CBA/CIH為先天性B淋巴細胞功能缺陷Beige小鼠為先天性NK細胞功能缺陷SHR為自發(fā)性高血壓大鼠，適合篩選抗高血壓藥物,實驗動物選擇與應用一般幼齡動物對實驗因素較為敏感，慢性實驗因周期長而通常選用幼齡動物。一般實驗都選用成年動物清潔動物是國內科研標準動物，而SPF動物是國際公認的標準動物一般來說，

24、淡水中生活的動物尿液是低滲的，海水中生活的動物尿液是等滲的，陸地上生活的動物尿液是高滲的，特別是沙漠中生活的動物，這種傾向性更明顯,豬：皮膚結構與人相似、適合做燒傷實驗、人燒傷后的敷蓋物以及皮膚病的研究；冠狀動脈循環(huán)與人類似，食用高膽固醇食物易出現(xiàn)動脈粥樣硬化典型病灶貓：刺激性排卵；適合做神經(jīng)節(jié)傳導阻滯影響的藥物實驗及觀察藥物對循環(huán)系統(tǒng)的作用等實驗,犬 ：是紅綠色盲，不能以紅綠作為條件刺激物來進行條件反射實驗；有嘔吐反射；長期毒性實

25、驗中大動物實驗常選；易于調教，短期訓練即可較好配合實驗，適合慢性實驗；適宜實驗外科學研究；可用壓迫膀胱法集尿豚鼠：不能合成維生素C；對人型結核桿菌高度易感，是結核病研究首選動物；也是鎮(zhèn)咳藥篩選試驗的首選動物；氣管平滑肌對致痙劑和藥物最敏感，常作為支氣管擴張藥物研究選用動物；,家兔：減壓神經(jīng)獨立分支，適合觀察減壓神經(jīng)對心臟影響試驗；適宜做發(fā)熱和檢查致熱源研究；刺激性排卵；常用于制備抗血清；家兔的胸腔中央有一層很薄的縱膈膜將胸腔分為左右

26、兩部，互不相通，兩肺被肋胸膜隔開，心臟又有心包胸膜隔開；也是心血管疾病研究的較好模型；不宜做利尿或抗利尿藥物研究；沒嘔吐反射；食用高膽固醇高脂肪飼料后易形成動脈粥樣硬化及高脂血癥模型,大鼠：無膽囊，適合做膽管插管收集膽汁，進行消化功能的研究；常選做長期毒性實驗地鼠：中國地鼠易產(chǎn)生真性糖尿?。恍∈螅哼m合于各類唇裂、腭裂研究青蛙和蟾蜍：反射弧實驗,遺傳工程動物模型,獲得遺傳工程的基本技術手段:顯微注射轉基因、基因定位突變技術、基因化學

27、誘變技術。其中顯微注射法是將外源目的基因注射到受精卵雄原核內模式生物：果蠅、線蟲、小鼠、斑馬魚、酵母，其中小鼠是研究人類基因功能的理想動物基因敲除動物中研究最多最深入的是基因敲除小鼠,小鼠是繼人之后第二個完成基因組測序的動物,實驗動物疾病,病毒：自然界最小微生物；在PH為7時較穩(wěn)定；對干燥的抵抗力與病毒的種類及干燥的方法有關；多數(shù)能保存于50%的甘油中,確診病毒可通過檢查包涵體等方法來確定。細菌：有球狀、桿狀和螺旋狀；有細胞壁；

28、水是主要成分，固形物主要由C、H、O、N組成，占總重量的75-80%；比重一般大于1；PH值可影響其代謝活動；高溫是有效的滅菌方法,實驗動物的傳染病發(fā)展過程分為：潛伏期、前驅期、明顯期（發(fā)病期）和轉歸期傳染源、傳播途徑和易感動物，稱為傳染鎖鏈各類動物應分室飼養(yǎng)，以防交叉感染飼養(yǎng)和獸醫(yī)人員應每年進行健康檢查實驗動物的隔離措施主要用于新引入的動物隔離是為了控制傳染源，隔離場所應離開動物繁殖區(qū)檢疫的目的是檢查有無潛在性疾病的存在,

29、新引進的動物應有供應商的的實驗動物質量合格證書新引進的靈長類動物要特別防止B型皰疹病毒新引進的犬必須有犬瘟熱、傳染性肝炎、犬細小病毒等免疫證明滅菌方法有熱滅菌法、冷滅菌法和Co60輻照滅菌法消毒不能殺死細菌的芽孢，比滅菌的范圍窄濕熱高壓滅菌：121℃，15min干熱高壓滅菌：160 ℃ ，45min預真空高壓滅菌： 121℃，3min,低壓蒸汽加甲醛滅菌法：70-80℃，2h 熏蒸消毒法一般為：15ml/m3福爾馬林加7

30、.5克高錳酸鉀,熏蒸時室溫應保持25 ℃,熏蒸后須靜置24-48h,后在通風2-3天80℃熱消毒藥水清洗是良好的消毒方法實驗動物飼養(yǎng)或實驗室進行噴霧消毒后關閉門窗,保持2-3h;門窗、墻壁等用中性洗滌液洗刷，必要時可用2%的熱燒堿水洗滌，在高壓水沖洗,鼠痘：又稱脫腳病，可經(jīng)皮膚傷口浸入機體，小鼠感染后肝、脾明顯腫大，康復后也會通過糞便長期排毒，從而污染環(huán)境能夠使病毒廣泛傳播。淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎：只有持續(xù)感染 的小鼠和急性感染的

31、金黃地鼠才會傳播病毒；感染該病毒的小鼠，大腦型最為表現(xiàn)為后肢強直性伸展；小鼠感染并康復后終生含高滴度的病毒，可經(jīng)唾液、鼻分泌物及尿液向外排毒，同時該小鼠可成為無癥狀的帶毒者，并通過子宮和乳汁傳給后代，其后代可成為終生帶毒者；人感染主要表現(xiàn)為流感癥狀和腦膜炎,仙臺病毒：動物感染后肺部病變明顯，鼠肺呈楊梅色，易與浸潤性肺癌相混淆；動物體液免疫和細胞免疫功能普遍下降，妊娠大鼠會出現(xiàn)胚胎死亡；診斷主要通過免疫學方法，可采用過濾帽籠盒及剖宮產(chǎn)方法

32、使動物免受感染流行性出血熱：自然宿主為小型嚙齒類動物，污染塵埃飛沫形成氣溶膠吸入感染是其最主要傳播途徑；兔病毒性出血熱在自然條件下空氣傳播是主要傳播方式，其主要預防方式為定期注射組織滅活疫苗,肝炎病毒：鼠肝炎多數(shù)呈亞臨床或隱形感染，可改變各種免疫參數(shù)，ELISA及免疫熒光法可作為特異性診斷；癥狀可見尿色變深等；嗜神經(jīng)型常引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)壞死；犬病毒性肝炎傳染方式很多，但不能通過呼吸道傳播犬瘟熱：可通過 消化道、呼吸道傳播；主要表現(xiàn)雙

33、相熱型，即先升高，持續(xù)兩天后降至正常維持2-3天后再升高；我國廣泛使用的疫苗是雞胚細胞培養(yǎng)弱毒疫苗,犬細小病毒：表現(xiàn)為急性出血性腸炎和非化膿性心肌炎，3-4周齡仔犬多呈急性心肌炎癥狀，病死率高達80-100%；主要通過直接接觸或污染飼料由消化道傳播；腸炎型感染后出現(xiàn)腹瀉，糞便呈灰黃色液體，最后因心衰和酸中毒而死狂犬?。毫餍谐蔬B鎖性特征，病犬終因局部或全身麻痹而死；犬一旦發(fā)病即撲殺，并對周圍環(huán)境徹底消毒B病毒：恒河猴是自然宿主，幼猴感

34、染后可能由于母源抗體免疫而呈現(xiàn)亞臨床癥狀；可引起人致死性腦感染,沙門氏菌：人畜共患病，實驗動物中常見感染為鼠傷寒和腸炎沙門氏菌病；患病動物和帶菌者是主要傳染源布氏桿菌：可致動物流產(chǎn)多殺性巴氏桿菌：可使動物發(fā)生出血性敗血癥支原體:幼齡動物易感，常定居于動物呼吸道和生殖道；環(huán)境中氨濃度過高可促進其生長，繼而促進肺炎和中耳炎的發(fā)生志賀氏菌：實驗動物中主要危害獼猴，對人可引起細菌性痢疾,真菌生長最適溫度為37℃，實驗動物皮膚真菌感染的傳