干化學(xué)、尿流式儀及顯微鏡尿液沉渣檢查的關(guān)系

1、向兄弟單位學(xué)習(xí),干化學(xué)、尿流式儀及顯微鏡尿沉渣檢查的關(guān)系,三零一醫(yī)院,叢玉隆,,尿液沉查鏡檢歷史,Ismail（1000年前），宏觀在對(duì)尿液進(jìn)行分析Bright（1827年）首次發(fā)現(xiàn)管型Bird（1854年）Purdy（1900年）進(jìn)一步證明了尿沉渣檢查的臨床價(jià)值A(chǔ)ddis（1948年）建立了尿沉渣物定量檢查法美國(guó)NCCLS（1991年）提出了“尿常規(guī)分析”的推薦標(biāo)準(zhǔn)（GP16-P）；經(jīng)過四年實(shí)踐以提出了“尿液分析和尿液標(biāo)本采

2、集、轉(zhuǎn)運(yùn)和保存”（1995年）的標(biāo)準(zhǔn)文件（GP-16A）日本JCCLS（1995年）制定了“尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)）中華醫(yī)學(xué)會(huì)第一次全國(guó)臨床檢驗(yàn)學(xué)術(shù)會(huì)議（1983年會(huì)議）提出了尿常規(guī)檢查標(biāo)準(zhǔn)化問題中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)臨床血液學(xué)檢驗(yàn)與尿液分析專題研討會(huì)提出了我國(guó)尿沉渣的推薦標(biāo)準(zhǔn)（1995年武夷山會(huì)議）。,尿常規(guī)檢查的重要意義,泌尿系統(tǒng)疾病的診斷和療效觀察,其它系統(tǒng)疾病的診斷,職業(yè)病的輔助診斷,安全用藥的監(jiān)護(hù),尿液常規(guī)檢查項(xiàng)目,沉渣顯微鏡檢,化

3、學(xué)成份分析,外觀檢查,尿液沉渣顯微鏡檢查,尿沉渣顯微鏡檢的重要意義,尿沉渣檢查標(biāo)準(zhǔn)化,標(biāo)準(zhǔn)化尿沉渣檢查方法,,,標(biāo)準(zhǔn)化尿沉渣檢查方法,標(biāo)準(zhǔn)沉渣檢查系統(tǒng),自動(dòng)充液儀檢查,倒置顯微鏡檢查法,Censide 檢查系統(tǒng),,干化學(xué)紅、白細(xì)胞檢測(cè)與鏡檢的關(guān)系,,,干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系,尿沉渣顯微鏡檢查是診斷泌尿系統(tǒng)疾病的金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)診斷、鑒別、予后分析具有重要的意義，迄今為止，尚無一臺(tái)儀器能完全替代顯微鏡檢查。,,,,9,解放軍總醫(yī)院,,

4、,,10,解放軍總醫(yī)院,干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系,尿沉渣的標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化 操作規(guī)程為：尿液10ml，離心5分鐘，相對(duì)離心力（RCF）為400 g，剩余沉淀為0.2ml，混勻后吸沉淀物約20μl，滴入玻片上，用18mm×18mm蓋玻片覆蓋后鏡檢。先用低倍鏡（10×10）觀察全片，高倍鏡（10×40）仔細(xì)觀察，細(xì)胞檢查10個(gè)高倍視野（HP），管型檢查20個(gè)低倍視野（LP）。報(bào)告方式：個(gè)細(xì)胞

5、/HP，個(gè)管型/LP。 美國(guó)NCCLS文件，推薦使用一次性尿檢測(cè)板，并用XXul報(bào)告，國(guó)內(nèi)專家亦認(rèn)為應(yīng)逐步在我國(guó)施行個(gè)/ul的報(bào)告。,,干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系,規(guī)范的尿沉渣鏡檢在常規(guī)工作的可行性與篩選規(guī)范的尿沉渣鏡檢是保證尿液分析結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ)，原則上每個(gè)尿液標(biāo)本都采用這種方法檢查，但目前化驗(yàn)室人員少，工作量大，每天有幾十甚至于幾百個(gè)標(biāo)本需要及時(shí)報(bào)告，要使用規(guī)范的鏡檢及時(shí)地發(fā)出報(bào)告是困難的，最好尋找一個(gè)簡(jiǎn)單、

6、快速的方法進(jìn)行過篩，即將完全正常的標(biāo)本篩去后，對(duì)異常的標(biāo)本進(jìn)行規(guī)范性檢查。干化學(xué)尿液分析儀提供了過篩的手段。,,,,11,解放軍總醫(yī)院,干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系,干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞篩選的概念與原則 所謂過篩就是在儀器、試帶符合實(shí)驗(yàn)要求，檢驗(yàn)人員相對(duì)穩(wěn)定的條件下制定的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)可視為尿沉渣成份在正常范圍內(nèi)，可免去進(jìn)一步顯微鏡檢查。如果一個(gè)標(biāo)本經(jīng)過干化學(xué)、鏡檢兩種方法檢查，干化學(xué)結(jié)果符合過篩標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢結(jié)果在正

7、常范圍內(nèi)，說明過篩是正確的。干化學(xué)結(jié)果不符合過篩標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢結(jié)果也異常，也說明過篩標(biāo)準(zhǔn)是正確的。干化學(xué)結(jié)果異常，鏡檢結(jié)果正常視為假陽(yáng)性，反之干化學(xué)結(jié)果正常，鏡檢結(jié)果異常視為假陰性。,,,,12,解放軍總醫(yī)院,,鏡檢與試條同時(shí)檢測(cè)尿RBC對(duì)比,試條,鏡檢,0 0~3 3~5 6~10 11~20 21~40 ＞40,,(個(gè)/ul) (個(gè)/ul),Neg 140

8、9 81 10 1124 577 425 94 671 198 8850 73 163 273 263 35 1150 1 46 68

9、 173 282 59 17 250 1 20 33 67 139 223 256,,,,13,解放總醫(yī)院,,,,13,解放軍總醫(yī)院,,,不同正常篩選標(biāo)準(zhǔn)的RBC測(cè)定結(jié)果對(duì)比,,,分析儀,篩選標(biāo)準(zhǔn),鏡檢異常,鏡檢正常,RBC≥3~5/HP,RBC≤0~2/HP,敏感性(%) 特

10、異性(%) 假陽(yáng)性(%) 假陰性(%),正常(RBC陰性),0 1490 100 35.8 55.1 0,異常(RBC≥u/l),2183 2676,正常(RBC≤10u/l),4 3191 99.8 76.6 30.9 0.13,異常

11、(RBC≥25u/l,2179 975,正常(RBC≤25u/l),294 3862 86.5 92.7 13.8 7.1,異常(RBC≥50u/l),1889 304,,,,14,解放軍總醫(yī)院,鏡檢與試 條同時(shí)檢測(cè)尿 WBC對(duì)比,,鏡檢 0 0-3 0-5 3-5

12、 6-10 11-20 >20,Neg 2638 614 112 51,25 346 1070 244 249 132 43 15,100 5* 32 30 85 104

13、 129 49,500 0 8* 5* 7 42 82 234,,23(蛋白陽(yáng)性)9（RBC陽(yáng)性）7（Nit陽(yáng)性）3（單核,淋巴）,9(蛋白陽(yáng)性)3(Nit陽(yáng)性)5(RBC陽(yáng)性)2(淋巴),2(蛋白陽(yáng)性)1(Nit陽(yáng)性),20,3,,,,,(個(gè)/ul),(個(gè)/ul),,試

14、 條,,以試條WBC neg為篩選標(biāo)準(zhǔn),鏡 檢,,,異常(WBC≥5~10/HP) 正常(WBC為0~5/HP),,,試條,正常(WBC為陰性),74(10) 3364,異常(WBC≥25/ul）,1171 1740,,,,16,解放軍總醫(yī)院,,以WBC≥25/ul為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型,WBC陰性

15、,WBC＞25/ul,,,0~1 2~5 6~10 ＞10 0~1 2~5 6~10 ＞10（個(gè)/LP）,,透明管型,108 40 8 11 53 15 5 8,顆粒管型 15 21 3 6 14 11 2 1,細(xì)胞管型 11 5

16、 12 4,臘樣管型 6 1,,,,,17,解放軍總醫(yī)院,,以RBC≥25/ul為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型,RBC≤10/ul,RBC0≥25/ul,,,0~1 2~5 6~10 ＞10 0~1 2~5 6~10 ＞10（個(gè)/LP）,,透明管型,83 28 3 2 78 27 10 1

17、7,顆粒管型 9 7 2 20 25 5 5,細(xì)胞管型 5 2 18 7,臘樣管型 2 4 1,,,,,18,解放軍總醫(yī)院,,以蛋白≥75mg/dl為標(biāo)準(zhǔn)

18、篩選鏡下管型,蛋白≤25mg/dl,蛋白≥75mg/dl,,,0~1 2~5 6~10 ＞10 0~1 2~5 6~10 ＞10（個(gè)/LP）,,透明管型,106 13 4 55 42 9 19,顆粒管型 9 6 2 20 26 3 7,細(xì)胞管型 7 5

19、 16 4,臘樣管型,,,,,19,解放軍總醫(yī)院,,以WBC≥25/ul RBC≥25/ul 蛋白≥75mg/dl為標(biāo)準(zhǔn)篩選鏡下管型,WBC陰性,蛋白25≤mg/dl,,,0~1 2~5 6~10 ＞10（個(gè)/LP）,,透明管型,29 0 0

20、 0,顆粒管型 0 0 0 0,細(xì)胞管型 0 0 0 0,臘樣管型 0 0 0

21、 0,,RBC≤10/ul,,,,20,解放軍總醫(yī)院,干化學(xué)法檢測(cè)白細(xì)胞紅細(xì)胞存在的問題,干化學(xué)法檢查尿內(nèi)白細(xì)胞的原理是基于粒細(xì)胞漿內(nèi)有酯酶可作用于試帶中的吲哚酚酯，釋放吲哚酚與重氮鹽反應(yīng)形成縮合物，其顏色與細(xì)胞的多少成比例。此法只能測(cè)定粒細(xì)胞，不與淋巴細(xì)胞反應(yīng)。尿液中污染甲醛或高濃度膽紅質(zhì)或使用某些藥物（如呋喃咀啶），可產(chǎn)生假陽(yáng)性；尿蛋白>5g/L或尿液中含有大劑量先鋒Ⅳ或慶大霉素等藥物時(shí)，可使結(jié)果出現(xiàn)假陰性。

22、 引起紅細(xì)胞試驗(yàn)假陽(yáng)性：肌紅蛋白，易熱酶 引起紅細(xì)胞試驗(yàn)假陰性：維生素C,,,,21,解放軍總醫(yī)院,干化學(xué)尿紅、白細(xì)胞檢查與鏡檢關(guān)系,細(xì)胞破壞造成的“假陽(yáng)性”現(xiàn)象：所謂“假陽(yáng)性”、“假陰性”是以顯微鏡檢查為基礎(chǔ)的。由于干化學(xué)是檢測(cè)細(xì)胞胞漿內(nèi)涵物來確定細(xì)胞的有無.在實(shí)際工作中可能存在下列問題：⑴由于尿液在膀胱貯存時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致白細(xì)胞破壞，酯酶釋放到尿液中，造成干化學(xué)陽(yáng)性，鏡檢陰性的所謂“假陽(yáng)性”現(xiàn)象。⑵腎病患者，紅細(xì)胞在腎臟或

23、泌尿道破壞，或尿比重過低、尿PH偏高均易造成經(jīng)細(xì)胞破壞血紅蛋白釋放尿中，造成所謂紅細(xì)胞干化學(xué)檢查的“假陽(yáng)性”現(xiàn)象。,690例標(biāo)本尿干化學(xué)紅細(xì)胞檢查與統(tǒng)檢結(jié)果分析,,,,,23,解放軍總醫(yī)院,鏡檢,鏡檢,干化學(xué)檢查,單克隆潛血板,陽(yáng)性105例(細(xì)胞破壞引起“假陽(yáng)性”),加熱煮沸后干化學(xué)檢查,全部為陰性(易熱酶引起假陽(yáng)性),,,,,,,,690例,陽(yáng)性360例,陰性330例,陰性330例(符合),陽(yáng)性0例,陽(yáng)性142例(符合),陰

24、性218例,,,,,,,,陰性113例,干化學(xué)過篩應(yīng)用范圍的局限性(1),腎科及泌尿科病人尿液不適合于干化學(xué)過篩顯微鏡檢查。即無論干化學(xué)結(jié)果如何，均應(yīng)做顯微鏡檢查。鏡檢結(jié)石、結(jié)晶、腫瘤細(xì)胞作為診斷依據(jù)或觀察療效時(shí)，不宜用干化學(xué)方法過篩。由于干化學(xué)分析干擾因素較多，且不可避免的有一定的假陰性率，因此要結(jié)合臨床表現(xiàn)判斷結(jié)果，決不可只看干化學(xué)分析，忽視鏡檢。尿液的外觀（特別是顏色、濁度）與尿沉渣有一定相關(guān)關(guān)系，當(dāng)尿液外觀異常時(shí)，應(yīng)注意顯

25、微鏡檢查。,,,,24,解放軍總醫(yī)院,干化學(xué)過篩應(yīng)用范圍的局限性(2),干化學(xué)試帶的質(zhì)量、穩(wěn)定性及質(zhì)量控制與過篩的準(zhǔn)確性密切相關(guān)。儀器及干化學(xué)試帶一定要符合要求：儀器的正常運(yùn)轉(zhuǎn)和試帶質(zhì)量合格取得是實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基本保證。筆者制定上述標(biāo)準(zhǔn)使用的是BM公司的Midiitron尿液分析儀及Combur10TestM配套試帶.每個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用過篩標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，首先必須做對(duì)照觀察（所用干化學(xué)試帶與顯微鏡對(duì)比），確認(rèn)儀器試帶的敏感性與特異性是否符合過篩標(biāo)準(zhǔn)的

26、要求。,,,,25,解放軍總醫(yī)院,尿流式細(xì)胞儀 與鏡檢關(guān)系,流式細(xì)胞儀的原理與分類,流式細(xì)胞儀,,通用型,專用型,,科研型,臨床型,,網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀,血細(xì)胞分析儀,尿沉渣分析儀,,導(dǎo)電率,尿?qū)щ娐?前向散射光,流式細(xì)胞測(cè)定法,熒光,電阻抗測(cè)定,電阻抗信號(hào),前向散射光強(qiáng)度,熒光脈沖寬度,熒光強(qiáng)度,前向散射光脈沖寬度,細(xì)胞體積,細(xì)胞長(zhǎng)度,染色部分長(zhǎng)度,染色強(qiáng)度,細(xì)胞大小,電阻抗,紅細(xì)胞,散射圖,酵母細(xì)胞結(jié)晶小圓上皮

27、病理管型,細(xì)菌,白細(xì)胞,上皮細(xì)胞,管型,前向散射光直方圖,前向散射光直方圖,紅細(xì)胞參數(shù),白細(xì)胞參數(shù),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,氬激光,尿樣品,,,,,,,,,,,,,,,,,,電極,電阻信號(hào)放大器,稀釋,導(dǎo)電率感應(yīng)器,熒光信號(hào)放大器,染色,鞘液,前向散射光信號(hào)放大器,,,,,,,,,流式細(xì)胞儀測(cè)定原理簡(jiǎn)圖,,流式細(xì)胞儀原理,尿流式細(xì)胞儀與鏡檢的關(guān)系,UF可提供客觀的形態(tài)學(xué)指標(biāo)，尤其對(duì)球性血尿和非球性血尿的鑒別,UF

28、可直接進(jìn)行定量檢測(cè)，簡(jiǎn)單、快速,尿流式細(xì)胞儀紅、白細(xì)胞檢查仍是鏡檢篩選,干化學(xué)尿與流式“篩選”之比較,尿流式較鏡檢的優(yōu)勢(shì)與局限性,再 見,尿沉渣檢查的重要意義,檢查內(nèi)容：上皮細(xì)胞、血細(xì)胞、管型及結(jié)晶臨床意義：,上皮細(xì)胞,,扁平上皮,大圓上皮,尾型上皮,小圓上皮,血細(xì)胞,,白細(xì)胞及膿細(xì)胞,紅細(xì)胞,尿沉渣檢查的重要意義,臨床意義：,管型,,透明管型,細(xì)胞管型,顆粒管型,蠟樣管型,,白細(xì)胞管型,紅細(xì)胞管型,上皮細(xì)胞管型,,細(xì)粒管型,粗粒管

29、型,脂肪管型,腎衰竭管型,尿沉渣檢查的重要意義,臨床意義：,結(jié)晶,,磺胺結(jié)晶,堿性結(jié)晶,酸性結(jié)晶,亮氨酸及絡(luò)氨酸結(jié)晶,,三價(jià)磷酸鹽,尿酸銨結(jié)晶,非晶型磷酸鹽,,尿酸結(jié)晶,草酸鈣結(jié)晶,非晶型磷酸鹽,尿沉渣鏡檢進(jìn)展,1.采用干涉、相差、偏振光、掃描及透射電鏡鑒別管型,2.有用活體染色及細(xì)胞化學(xué)染色識(shí)別各種管型,3.應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)識(shí)別各種細(xì)胞,尿沉渣鏡檢進(jìn)展,尿中紅細(xì)胞形態(tài),尿中白細(xì)胞形態(tài),尿沉渣鏡檢進(jìn)展,S 染色各種上皮細(xì)胞形態(tài),

30、尿沉渣鏡檢進(jìn)展,S 染色各種管型形態(tài),尿沉渣鏡檢進(jìn)展,S 染色各種管型形態(tài),復(fù)檢條件,一 REVIEW 標(biāo)記,計(jì)數(shù)錯(cuò)誤總數(shù) ? 40,000電導(dǎo)率錯(cuò)誤電導(dǎo)率 ? 5ms/cm或 ? 38ms/cm界標(biāo)錯(cuò)誤RBC-Fl-DWSD ? 40 ch 或紅細(xì)胞數(shù) ? 2.5/?l且其 Fsc > 200ch 或紅細(xì)胞數(shù) ? 15 /?l時(shí)未溶解的RBC% ? 20%,二 菌尿,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,301

31、醫(yī)院用此儀器對(duì)隨機(jī)95例腎小球性和非腎小球性出血病人的尿紅細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行了觀察，以臨床診斷腎小球病變（腎活檢）為標(biāo)準(zhǔn)，以此儀器檢測(cè)尿非均一性紅細(xì)胞為腎小球病變?cè)\斷依據(jù)，結(jié)果：,敏感性：100％，特異性：78.2％,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,急性腎小球性腎炎病人尿液測(cè)定結(jié)果,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,慢性腎小球性腎炎病人尿液測(cè)定結(jié)果,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,前列腺癌病人尿液測(cè)定結(jié)果,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,腎結(jié)石病人尿液測(cè)定結(jié)果

32、,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,慢性膀胱炎病人尿液測(cè)定結(jié)果,尿沉渣成分 主要臨床意義 紅細(xì)胞 月經(jīng)、過度運(yùn)動(dòng)、各種腎，泌尿系統(tǒng)如外傷 、 腎 小管炎癥、結(jié)石、結(jié)核、腫瘤、急性腎小球腎炎 白細(xì)胞

33、 各種腎損害、泌尿道感染、腎盂腎炎 上皮細(xì)胞 腎小管上皮細(xì)胞 腎實(shí)質(zhì)腎小管受損 鱗狀上皮細(xì)胞 正常人或污染 管型 寬型 嚴(yán)重腎疾病 腎上皮細(xì)胞 腎小管退化、變性 脂肪 腎

34、病綜合征 顆?；蛳灅?腎實(shí)質(zhì)損害 透明 酸性尿-含高鹽，多為病理性 細(xì)菌 泌尿道感染 脂肪體(卵圓小體) 腎病綜合征,各種尿沉渣成分主要臨床意義,,,,,尿沉渣染色的臨床意義,SM染色： 管型的鑒別巴氏染色： 識(shí)別細(xì)胞甲苯胺蘭： 觀察管型與核結(jié)構(gòu)過氧

35、化酶： 鑒別粒細(xì)胞與上皮細(xì)胞管型非特異酯酶：識(shí)別單核細(xì)胞油紅O、蘇丹Ⅲ：脂肪變性細(xì)胞酸性磷酸酶：區(qū)分腎上皮細(xì)胞與前列腺細(xì)胞,,方法 白細(xì)胞 紅細(xì)胞普通載玻片不加蓋玻片法15.0 17.0載玻片加蓋玻片法 12.0 15.0改良Neubauer 10.2

36、 9.9Fast-Read-10R定量板法 9.3 7.0,四種常見尿沉渣檢查法CV%值比較,,,,,單克隆抗體免疫過氧化物酶染色檢查特異細(xì)胞,抗體名稱 對(duì)應(yīng)的特異細(xì)胞FMC 10 粒細(xì)胞FMC 32 單核細(xì)胞A

37、MDT 4 輔助/支持T淋巴細(xì)胞Huly-m8 細(xì)胞毒/抑制T淋巴細(xì)胞URO 1 腎小球/輸尿管上皮細(xì)胞URO 3 近曲小管上皮細(xì)胞URO 5 亨利襻/遠(yuǎn)曲小管/集合管/輸尿管URO 7

38、 亨利襻URO 9 輸尿管,,,,,急性腎小管壞死、急性間質(zhì)性腎炎、新月形腎炎尿中各種細(xì)胞數(shù)量及鑒別,細(xì)胞數(shù)/ml 急性腎小管壞死 急性間質(zhì)性腎炎 新月形腎炎總細(xì)胞數(shù) 42500±6000 633300±28800 138400±61600粒細(xì)胞數(shù) 6600

39、7;1100 596700±2870046500±25000單核細(xì)胞 1500±800 6800±60016300±8400CD4淋巴細(xì)胞 40±30 2300±12007300±4700CD8淋巴細(xì)胞 100±100 2000±

40、11004100±1800腎小球上皮細(xì)胞 500±400 1500±90011800±3800近曲小管上皮細(xì)胞 17700±4200 12200±620029800±14000遠(yuǎn)曲小管/集合管上皮細(xì)胞 7400±1700 15200±85008400±4200亨利襻

41、 4500±2300 1800±9004600±3200輸尿管上皮 3400±700 3600±16004100±1500,,,,操作規(guī)程為：尿液10ml，離心5分鐘，相對(duì)離心力（RCF）為400 g，剩余沉淀為0.2ml，混勻后吸沉淀物約20μl，滴入玻片上，用18mm×18mm蓋玻片覆蓋后鏡檢。先用低