各類成分分析生物堿

1、生物堿*皂苷*黃酮*蒽醌揮發(fā)油,,,,,,,,,,,,,,,,,,第五章 各類成分分析,,,,,,,,,,,,,,,,,一、概述 二、理化性質*三、供試品溶液制備（提取、凈化）*四、鑒別：理化鑒別、TLC*五、含量測定：總成分、單體成分,第五章 各類成分分析,春花秋月何時了，往事知多少！小樓昨夜又東風， 故國不堪回首月明中。雕欄玉砌應猶在， 只是朱顏改。問君能有幾多愁？ 恰似一江春水向東流！,虞 美

2、 人 —— 李煜,馬錢子,腰直不起，頭足相就，狀如牽機而死——強直性驚厥,1988年奧運會 ，卡爾·劉易斯 ，麻黃堿 1992年奧運會，巫丹，士的寧1992年奧運會 ，瑪麗·喬·費爾南德斯 ，偽麻黃堿 1994年世界杯，馬拉多納，麻黃堿 2000年奧運會 ，拉杜坎，麻黃堿,生物堿與興奮劑,生物堿與毒品,偽麻黃堿,麻黃堿,冰毒,一、概 述,黃連：小檗堿、巴馬汀、藥根堿、表小檗堿,苦參：苦參堿、

3、氧化苦化堿,益母草、延胡索、黃柏、貝母,麻黃：麻黃堿、偽麻黃堿,馬錢子：馬錢子堿、士的寧,第一節(jié) 生物堿,麻黃堿,小檗堿,1、結構：C、H、O、N，堿性,二、理化性質,2、溶解性親脂性：大多數(shù)，氯仿中溶解度最大親水性：少，季銨型,二、理化性質,一般都易溶于酸水,3、沉淀反應： 1）碘化鉍鉀（BiI3·KI） 2）雷氏鹽 NH4[Cr(NH3)2(SCN)4] 3）苦味酸,干擾：蛋白質、多肽、鞣質,沉淀特點：酸

4、性水溶液（苦味酸在中性）中 沉淀常易溶于有機溶劑 沉淀有顏色,二、理化性質,4、光譜特征,小檗堿：225 、 270 、 331nm 366nm下 有熒光,麻黃堿：210nm,二、理化性質,1、有機溶劑提取法： 堿化+ CHCl3,士的寧的含量測定： P127 堿化+ CHCl3提取→酸水提→堿化→CHC

5、l3萃取,三、供試品溶液的制備,2、氧化鋁柱色譜法： 益母草（藥典P203）,水蘇堿的薄層鑒別： 取本品3g → 乙醇回流提取 → 上活性炭-氧化鋁柱 → 乙醇洗脫→收集,三、供試品溶液的制備,3、離子交換樹脂法： 益母草流浸膏（藥典P280）,水蘇堿的含量測定： 取本品5g → 鹽酸調pH1~2 → 加置強酸型陽離子樹脂柱 → 水洗脫（棄去） → 氨水洗脫 → 收集,三、供試品溶液的制備,

6、（一）理化鑒別 馬錢子散：馬錢子、地龍,取馬錢子散→加濃氨試液→三氯甲烷浸泡→濾過→濾液蒸干→加稀鹽酸→加碘化鉍鉀試液→黃棕色沉淀,四、定性鑒別,（二）薄層鑒別1、展開系統(tǒng)：乙二胺、氨水 P122,正丁醇-鹽酸-水（4:1:0.5）生物堿鹽,四、定性鑒別,2、對薄層板改性：1~2%NaOH溶液,例：黃連中生物堿 苯-EtOAc-MeOH-異丙醇-水 （6:3:1.5:1.5:0.3） 置氨水飽和的

7、展開槽,2）顯色劑：,例：苦參：氧化苦參堿（藥典P141）,3、檢視： 1）365nm下看熒光 例：黃連：小檗堿,①改良碘化鉍鉀②稀碘化鉍鉀+亞硝酸鈉乙醇液,四、定性鑒別,（一）總生物堿,1、酸堿滴定法：返滴法,2、分光光度法,直接測定法：小檗堿比色法：苦味酸、雷氏鹽 P125,排除干擾：化學分離、柱色譜,五、含量測定,例：雷氏鹽比色法,B + NH4[Cr(NH3)2(SCN)4] = BH[Cr(NH3

8、)2(SCN)4] ↓,1、在酸性介質中定量反應2、反應物有顏色，其吸光度取決于硫氰酸鉻銨部分3、反應物不溶于水，易溶于丙酮,例：雷氏鹽比色法 P71,益母草口服液中生物堿的含量測定,測定方法：1、沉淀過濾，溶于丙酮，直接測定A2、濾除沉淀后，測定殘存的過量雷氏鹽，間接計算,又如：產(chǎn)婦康顆粒,1、HPLC：,①離子抑制色譜：二乙胺、三乙胺 例：浙貝母 藥典P205,②離子對色譜：SDS、辛烷基磺

9、酸鈉 常加入緩沖鹽 例： HPLC測小檗堿,（二）單體成分,五、含量測定,乙腈-水（50：50） 每100ml含0.34g KH2PO4和0.17g SDS,牛黃千金散中鹽酸小檗堿,乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）,浙貝母中貝母甲素和貝母乙素,小兒清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿,乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（3:97）,流動相緩沖鹽的pH值對藥

10、物的保留行為有影響，甚至會顯著改變某些堿性藥物的保留行為如圖所示。,流動相pH值對保留時間的影響色譜柱：Nucleodur?C18 15cm?4mm流動相：乙腈-10mM 碳酸氫銨＝50：50, A：pH=3.0 B：pH=10.0檢測波長：240nm,pH=3.0,pH=10.0,流動相pH值對保留時間的影響色譜柱：Nucleodur?C18 15cm?4mm流動相：梯度洗脫程序 A 乙腈-20mM 磷酸氫二銨,

11、 pH=2.5 B 乙腈-20mM磷酸氫二銨, pH=10.0檢測波長：254nm,pH=2.5,pH=10.0,流動相組成對藥物保留行為的影響組成：生物堿1、2、3、4 檢測波長：280nm色譜柱：Kromasil 15cm?4.6mm流動相：A PiCB6流動相-PICB7流動相＝1：1 B

12、 PiCB6流動相-PICB7流動相＝4：6PICB6流動相：己烷磺酸鈉1.88g＋甲醇260ml?置1000ml量瓶中，用水稀釋至刻度PICB7流動相：庚烷磺酸鈉0.28g ＋甲醇260ml?置1000ml量瓶中，用水稀釋至刻度,流動相組成對藥物保留行為的影響色譜柱：Kromasil 15cm?4.6mm檢測波長：280nmPICB6：己烷磺酸鈉1.88g ＋甲醇260ml?置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀釋至刻度。

13、PICB7：庚烷磺酸鈉0.28g ＋甲醇260ml?置1000ml量瓶中，用1%的醋酸稀釋至刻度。,C PiCB6流動相-PICB7流動相＝1：1,D PiCB6流動相-PICB7流動相＝9：1,,③封尾技術：消除或屏蔽殘留—Si-OH,技術1：小分子鍵合,技術2：較大空間位阻的異丙基或異丁基（R基團）,,,2、TLCS：,五、含量測定,益母草：藥典P204,黃連：藥典P213 熒光掃描, 激發(fā)波長=366n