細胞工程集體備課

1、細胞工程集體備課內(nèi)容,五蓮中學高三生物組馬啟明2018.1.19,一、考綱要求：,1.植物組織培養(yǎng)（Ⅱ）2.細胞融合與單克隆抗體（ Ⅱ ）3.動物細胞培養(yǎng)與體細胞克?。?Ⅱ ）,,,二、近三年高考題研究,6.（2015·江蘇卷.3）下列關于動物細胞工程和胚胎工程的敘述,正確的是（ ）A. 乳腺細胞比乳腺癌細胞更容易進行離體培養(yǎng)B. 細胞核移植主要在同種動物、同種組織的細胞之間進行C. 采用胚胎分割技術產(chǎn)生

2、同卵多胚的數(shù)量是有限的D. 培養(yǎng)早期胚胎的培養(yǎng)液中含維生素、激素等多種能源物質(zhì),【考點定位】動物細胞培養(yǎng)、核移植、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎分割本題綜合考查了動物細胞工程和胚胎工程的相關知識，意在檢測學生對相關知識的理解和記憶能力。由于現(xiàn)代生物科技專題的知識都是學生在中學期間無法直接觀察到和直接操作實驗的知識，所以學生學習只能依靠自己想象的理解和識記相關的考點知識才能完成相應試題。,c,9.（2015·天津卷.6）2015年2月

3、3日，英國議會下院通過一項歷史性法案，允許以醫(yī)學手段培育“三親嬰兒”。三親嬰兒的培育過程可選用如下技術路線。據(jù)圖分析，下列敘述錯誤的是（ ）A、該技術可避免母親的線粒體遺傳病基因傳遞給后代B、捐獻者攜帶的紅綠色盲基因不能遺傳給三親嬰兒C、三親嬰兒的染色體全部來自母親提供的細胞核D、三親嬰兒的培育還需要早期環(huán)胎培養(yǎng)和胚胎移植等技術,C,【考點定位】本題考查核移植技術、動物細胞培養(yǎng)、體外受精和早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植及

4、細胞質(zhì)遺傳和核基因遺傳等知識。,考生需要了解細胞質(zhì)基因的遺傳與細胞核基因的遺傳的不同點，然后再結合圖示做出具體判斷。圖示信息告訴同學們這三親分別是母親、捐獻者、父親，母親提供細胞核，捐獻者提供去核卵母細胞，父親提供精子?？忌€需要知道染色體存在于細胞核中，因此結合圖示即可做出正確的推斷：三親嬰兒的染色體來自于母親和父親。由此可知本題很好的考查了考生的識記能力、分析能力。,10.（2015·北京卷.5）在應用農(nóng)桿菌侵染植物葉片獲

5、得轉基因植株的常規(guī)實驗步驟中，不需要的是（ ）A.用攜帶目的基因的農(nóng)桿菌侵染植物細胞B.用選擇培養(yǎng)基篩法導入目的基因的細胞C.用聚乙二醇誘導轉基因細胞的原生物質(zhì)融合D.用適當比例的生長素和細胞分裂素誘導愈傷組織生芽,【考點定位】基因工程操作程序和植物細胞工程解決本題必須明確土壤農(nóng)桿菌轉化法培育轉基因植株的程序有：獲取目的基因 → 目的基因與Ti質(zhì)粒結合形成重組質(zhì)粒 → 將重組質(zhì)粒導入土壤農(nóng)桿菌 → 用土壤農(nóng)桿菌感染植物細胞

6、 → 檢測是否導入目的基因并鑒定是否成功表達 → 通過植物組織培養(yǎng)技術培養(yǎng) → 獲得轉基因植株。,C,4.（2016江蘇卷.9）下列有關細胞工程的敘述，正確的是A.PEG是促細胞融合劑，可直接誘導植物細胞融合B.用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細胞破裂C.骨髓瘤細胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體D.核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體,D,【考點定位】細胞融合，人工種子，單克隆抗體，核移植,此題是對細胞工程的考查，解答本

7、題的關鍵在于理解動植物細胞融合的區(qū)別，表現(xiàn)在誘導因素和融合過程的區(qū)別；同時理解制備人工種子的過程，理解原生質(zhì)體的應用范疇；對于單克隆抗體的制備過程要重視；弄清楚核移植的過程是正確D項的關鍵。,27.( 2015·四川卷.9)（11分）將蘇云金桿菌Bt蛋白的基因導入棉花細胞中，可獲得抗棉鈴蟲的轉基因棉，其過程如下圖所示（注：農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)拉上只有T－DNA片段能轉移到植物細胞中）。（1）過程①需用同種＿＿＿＿酶對含Bt基因的D

8、NA和Ti質(zhì)粒進行酶切。為將過程②獲得的含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌篩選出來，應使用＿＿＿＿培養(yǎng)基。（2）過程③中將棉花細胞與農(nóng)桿菌混合后共同培養(yǎng)，旨在讓＿＿進入棉花細胞；除盡農(nóng)桿菌后，還須轉接到含卡那霉素的培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，目的是＿＿＿＿＿＿＿＿。（3）若過程④僅獲得大量的根，則應在培養(yǎng)基中增加＿＿＿＿以獲得芽；部分接種在無激素培養(yǎng)基上的芽也能長根，原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（4）檢驗轉基因棉的抗蟲性狀，常用方法是＿＿＿＿。種植轉基因

9、抗蟲棉能減少＿＿＿的使用，以減輕環(huán)境污染。,【答案】（1）限制性核酸內(nèi)切　　選擇　?。?）T－DNA　　篩選獲得T－DNA片段的植物細胞（3）細胞分裂素濃度　　頂芽端合成的生長素向基部運輸，促進根的分化（4）投放棉鈴蟲　　農(nóng)藥,【考點定位】查基因工程與細胞工程的原理與相關操作，涉及培養(yǎng)基的功能及使用等知識點?；蚬こ滩僮饕c提示：（1）基因表達載體的構建是實施基因工程的第二步即，也是基因工程的核心。（2）對于植物來說，受體細胞可

10、以是受精卵或體細胞，但常用體細胞。（3）對于動物來說，受體細胞一般是受精卵。受精卵作為受體細胞具有體積大、易操作、經(jīng)培養(yǎng)可直接表達性狀的優(yōu)點。而動物體細胞的全能性受限。選擇培養(yǎng)基的運用主要依據(jù)的是質(zhì)粒上的標記基因。,20.（2016新課標2卷.40)[生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）下圖表示通過核移植等技術獲得某種克隆哺乳動物（二倍體）的流程,回答下列問題：（1）圖中A表示正常細胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可

11、為____________。過程①表示去除細胞核，該過程一般要在卵母細胞培養(yǎng)至適當時期再進行，去核時常采用_______的方法。②代表的過程是__________。（2）經(jīng)過多次傳代后，供體細胞中______的穩(wěn)定性會降低，因此，選材時必須關注傳代次數(shù)。（3）若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是______。（4）與克隆羊“多莉（利）”培養(yǎng)成功一樣，其他克隆動物的成功獲得也證明了_________

12、_。,【答案】（15分）（1）XX或XY 顯微操作（去核法） 胚胎移植（2）遺傳物質(zhì) （3）卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的形狀產(chǎn)生影響（4）已經(jīng)分化的動物體細胞核具有全能性,【考點定位】核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、胚胎移植本題以“獲得某種克隆哺乳動物（二倍體）的流程圖”為情境，綜合考查學生對核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、胚胎移植的熟記和理解能力。解決此類問題的關鍵是，熟記并理解相關的基礎知識、

13、形成知識網(wǎng)絡，“讀懂”流程圖中的每個箭頭的含義，據(jù)此結合每個問題情境進行圖文轉換、實現(xiàn)對知識的整合和遷移。,12．（2017?海南卷.31）[選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）甲、乙兩名同學分別以某種植物的綠色葉片和白色花瓣為材料，利用植物組織培養(yǎng)技術繁殖該植物?；卮鹣铝袉栴}：（1）以該植物的綠色葉片和白色花瓣作為外植體，在一定條件下進行組織培養(yǎng)，均能獲得試管苗，其原理是__________。（2）甲、乙同學在誘導愈傷組織所用的

14、培養(yǎng)基中，均加入一定量的蔗糖，蔗糖水解后可得到__________。若要用細胞作為材料進行培養(yǎng)獲得幼苗，該細胞應具備的條件是____________（填“具有完整的細胞核”“具有葉綠體”或“已轉入抗性基因”）。（3）圖中A、B、C所示的是不同的培養(yǎng)結果，該不同結果的出現(xiàn)主要是由于培養(yǎng)基中兩種激素用量的不同造成的，這兩種激素是________。A中的愈傷組織是葉肉細胞經(jīng)_______形成的。,（4）若該種植物是一種雜合體的名貴花卉，要快

15、速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的該種花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖，在培養(yǎng)時，___________（填“能”或“不能”）采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，原因是____________。,【學科網(wǎng)考點定位】植物組織培養(yǎng) 明確植物組織培養(yǎng)過程和原理是解題關鍵。,【答案】（1）綠色葉片和白色花瓣的細胞具有全能性，在一定條件下能發(fā)育成完整的植株。 （2）葡萄糖、果糖 具有完整的細胞核 （3）細胞分裂素、生長素 脫分

16、化 （4）不能 對雜合體的植株來說，其體細胞的基因型相同，而花粉粒的基因型與體細胞的基因型不同。用花粉粒進行組織培養(yǎng)得到花卉基因型不同于原植株。,15．（2017?新課標Ⅲ卷.38）[生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）編碼蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示。,回答下列問題：（1）現(xiàn)要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上

17、編碼蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCT……CAGGAAGGA），則所構建的表達載體轉入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是_____________________________________。（2）某同學在用PCR技術獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為______________，加入了___________作為合成DNA的原料。,（3）現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙

18、、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細胞增殖的作用，某同學做了如下實驗：將一定量的含T淋巴細胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細胞濃度，結果如圖2。①由圖2 可知，當細胞濃度達到a時，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細胞濃度不再增加，此時若要使T淋巴細胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是__________________。細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，

19、CO2的作用是__________________。②僅根據(jù)圖、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少______________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細胞增殖的效果。,【答案】（1）編碼乙的DNA序列起始端無ATG，轉錄出的mRNA無起始密碼子（2）模板 dNTP（3）①進行細胞傳代培養(yǎng) 維持培養(yǎng)液是的pH ② C,【考點定位】基因工程、細胞工程,,三

20、、課本內(nèi)容分析,專題二、細胞工程,1、概念:,植物細胞工程動物細胞工程,基因工程：操作水平分子水平 胚胎工程只是指對動物的早期胚胎或配子所進行的多種顯微操作和處理技術。,所采用技術的理論基礎,植物細胞工程,通常采用的技術手段,植物組織培養(yǎng),植物體細胞雜交,植物細胞的全能性,,,,,,一、植物細胞工程,(離體的植物器官、組織或細胞),脫分化避光,再分化光照,培養(yǎng)條件：,離體、含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基、激素、一定的溫度、空氣、無

21、菌環(huán)境、適合的PH、適合的光照等,外植體,舉例：,花藥離體培養(yǎng)；基因工程培育的抗棉鈴蟲的棉花植株；細胞工程中培育的“番茄-馬鈴薯”雜種植株等。,1、植物組織培養(yǎng),,,,,,,,去壁,去壁,纖維素酶果膠酶,原生質(zhì)體,植物細胞,融合的原生質(zhì)體,離心、振動、電刺激聚乙二醇,再生細胞壁,雜種細胞,脫分化,愈傷組織,雜種植株,激素,篩選,激素,再分化,2、植物體細胞雜交過程示意圖,,,,,,,,,,植物體細胞雜交原理： 細

22、胞膜流動性,植物組織培養(yǎng)原理： 植物細胞全能性,A,B,意義：克服遠緣雜交不親和的障礙、培育新品種,6.下圖為植物體細胞雜交過程示意圖，據(jù)圖回答：,⑴步驟①是去掉 ，最常用的方法是用 酶去除，使植物細胞成為 。⑵步驟②一般常用的化學試劑是 ，目的是 。⑶在利用雜種細胞培育成為雜種植株的過程中，運用的技術手段是

23、 　，其中步驟④相當于 ，步驟⑤相當于 。,細胞壁,纖維素酶和果膠酶,原生質(zhì)體,聚乙二醇,誘導原生質(zhì)體融合,植物組織培養(yǎng),脫分化,再分化,⑷植物體細胞雜交的目的是獲得新的雜種植株，使兩株植物的性狀能夠在新的植物體上有所表現(xiàn)，其根本原因是 　 。⑸從理論上講，雜種植株的育性為 。若運用傳

24、統(tǒng)有性雜交方法能否實現(xiàn)？ 　　　　 因此，這項研究對于培養(yǎng)作物新品種方面的重大意義在于 　　　　。⑹利用植物體細胞雜交的方法培育作物新品種的過程中，遺傳物質(zhì)的傳遞是否遵循孟德爾的遺傳規(guī)律？為什么？,雜種細胞具有兩個親本的遺傳物質(zhì),可育,不能,克服遠緣雜交不親和的障礙,不遵循，植物體細胞雜交屬于無性生殖。,(1)③過程是 ，實際融合的過程中原生質(zhì)體可能會形成 種細胞團(只考慮兩個細胞

25、融合的情況)。與④過程密切相關的細胞器是 。,3,高爾基體和線粒體,課堂練習,原生質(zhì)體融合,(2)若番茄細胞內(nèi)含A條染色體，馬鈴薯細胞內(nèi)含B條染色體，若將番茄和馬鈴薯采用有性雜交的育種方法培育(假設能成功)，得到的后代應含 條染色體，若采用體細胞雜交技術所得植株含 條染色體，(3)若番茄是二倍體，馬鈴薯是四倍體，則雜種植株為 倍體。,習題,(A+B)/2,A+B,六,(4) 在培養(yǎng)雜種苗

26、的過程中，一般在24~28小時后，大部分原生質(zhì)體已經(jīng)再生出細胞壁。怎樣鑒別細胞壁是否再生？,植物細胞質(zhì)壁分離和復原實驗,植物組織培養(yǎng)技術有哪些應用？,⑴.植物繁殖的新途徑①微型繁殖： 不僅可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性,還可以高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖。②作物脫毒：利用植物分生組織(如莖尖、根尖)進行培養(yǎng),可以使新長成的植株脫除病毒。,③人工種子： 植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽或腋芽,包上人工種皮就可以形

27、成人工種子。右圖是人工種子的結構示意圖。,,人工種子,自然種子,,胚狀體包埋在膠囊內(nèi)形成球狀結構：膠質(zhì)化合物薄膜——種皮營養(yǎng)成分和植物激素 ——人工胚乳胚狀體——新植物的幼體,優(yōu)點： 快速繁殖，解決作物繁殖能力差、結子困難或發(fā)芽率低等問題。保持雜種優(yōu)勢。,(2)作物新品種的培育 ①單倍體育種： 花藥離體培養(yǎng)過程就是植物組織培養(yǎng)過程。,單倍體育種的優(yōu)點是后代不發(fā)生性

28、狀分離,都是純合子，能夠穩(wěn)定遺傳,明顯縮短了育種年限。,②突變體的利用： 在植物組織培養(yǎng)過程中,由于培養(yǎng)細胞一直處于不斷的分生狀態(tài),因此容易受到培養(yǎng)條件和外界壓力(如射線、化學物質(zhì)等)的影響而發(fā)生突變。 從這些產(chǎn)生突變的個體中可以篩選出對人們有用的突變體,進而培育成新品種。(3)細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)： 可以利用植物組織培養(yǎng)技術大量生產(chǎn)某些細胞產(chǎn)物,如蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、藥物、香料、生物堿等。,1.對細胞全能性的

29、表述正確的是A.非離體植物細胞能夠表現(xiàn)出全能性B.動物細胞融合標志著動物細胞全能性的實現(xiàn)C.單克隆抗體的制備原理依據(jù)是細胞的全能性D.花粉培育成單倍體是細胞全能性的體現(xiàn)2.植物細胞表現(xiàn)出全能性的必要條件是A.給予適宜的營養(yǎng)和外界條件B.脫離母體后，給予適宜的營養(yǎng)和外界條件C.導入其他植物細胞的基因D.將成熟篩管的細胞核移植到去核的卵細胞內(nèi),,,3.在生物體的所有細胞中，全能性最高的是A．卵細胞 B 植物花粉 C

30、．體細胞 D.受精卵4.在生物體內(nèi)，細胞沒有表現(xiàn)出全能性，而是分化為不同的組織、器官，是因為： A.細胞喪失了全能性 B.基因的表達有選擇性 C.不同的細胞內(nèi)基因不完全相同 D.在個體發(fā)育的不同時期，細胞內(nèi)的基因發(fā)生了變化,,,5.植物組織培養(yǎng)可以形成愈傷組織，下列有關愈傷組織的敘述錯誤的是A.愈傷組織是離體細胞經(jīng)過脫分化形成的B.形成愈傷組織的培養(yǎng)基不需含有機分子C.愈傷組織可以形成具有生根

31、能力的胚狀結構D.愈傷組織細胞的線粒體和核糖體可能發(fā)生堿基互補配對6.能刺激愈傷組織形成的誘導劑是A.細胞分裂素和生長素 B.赤霉素 C.生長素和赤霉素　　 D.細胞分裂素和乙烯,,,7.將胡蘿卜韌皮部細胞培養(yǎng)成幼苗時，下列條件中不需要的是A、具有完整細胞核的細胞 B、一定的營養(yǎng)物質(zhì)和植物激素C、離體狀態(tài) D、導入指定基因 8.（多選）植物體細胞的組織培養(yǎng)常被用于保留雜種優(yōu)勢。

32、因為植物組織培養(yǎng)的過程 A.不可能發(fā)生基因突變 B.生殖方式屬于無性生殖C.子代不發(fā)生性狀分離 D.體細胞內(nèi)不存在等位基因,,,,10.植物體細胞雜交的目的是A.用酶解法去掉細胞壁分離出有活力的原生質(zhì)體B.以人工誘導法使兩個不同植物的原生質(zhì)體融合C.用植物組織培養(yǎng)法培養(yǎng)融合的原生質(zhì)體得到雜種植株D.通過以上三者來完成 11.在細胞工程 ― 原生質(zhì)體融合育種技術中，、其技術的重要一環(huán)是將營養(yǎng)細胞的細胞

33、壁除心去，通常是采用纖維素酶的酶解破壁法處理。如將去掉了細胞壁的成熟植物細胞置于清水中，細胞最終將 A.皺縮 B.脹破 C.呈球形 D.保持原狀,,,二、動物細胞工程,植物細胞工程常用的技術手段：,植物組織培養(yǎng)、 植物體細胞雜交等,,動物細胞培養(yǎng),動物細胞核移植,動物細胞融合,單克隆抗體制備等,回顧：,常用的技術手段：,動物組織,單個細胞,細胞懸液,貼壁生長,分瓶培養(yǎng),,,,,,,10代細胞,50代細胞,不死細胞,,

34、,原代培養(yǎng),,傳代培養(yǎng),胰蛋白酶,剪碎,加培養(yǎng)液,接觸抑制,少數(shù)癌變,動物細胞培養(yǎng)技術流程,畸形分化,？？？傳代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代后就不易傳下去了。目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常為10代以內(nèi)，以保持細胞正常的二倍體核型,1.動物細胞培養(yǎng)的基本原理是什么？2.動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？3.進行動物細胞培養(yǎng)的材料一般有何特點？,離體的細胞在適宜的條件下可以增殖（ 細胞增殖）,通常含有葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機

35、鹽、微量元素、動物血清等。,一般取胚胎組織或幼齡動物的組織做動物細胞培養(yǎng)。因為胚胎組織或幼齡動物的組織的細胞生命力旺盛，分裂能力強。,4.哪些細胞會失去接觸抑制？5.在體外培養(yǎng)動物細胞需要什么物質(zhì)和環(huán)境條件？6.動物細胞培養(yǎng)有何應用價值？,腫瘤細胞,無菌無毒環(huán)境、充足營養(yǎng)（血清或血漿）、適宜溫度、PH、氣體環(huán)境（O2和CO2，C02的主要作用是維持培養(yǎng)液的PH）。,①.大規(guī)模生產(chǎn)生物制品，如病毒疫苗、干擾素、 單克

36、隆抗體等；②.藥性、毒性檢測；③.培養(yǎng)基因工程中的受體細胞,動物細胞核移植技術和克隆動物,動物細胞核移植：,是將動物的一個細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體（克隆動物）,分類：,細胞分化程度低，恢復全能性容易,,細胞分化程度高，恢復全能性困難,原理：動物細胞核的全能性,細胞質(zhì),細胞核,細胞核移植,,多莉羊的培育過程,體細胞核移植的過程,卵母細胞去核,體細胞取

37、核,重組細胞,體細胞核移植技術的應用前景,1、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進程,2、保護瀕危物種,3、醫(yī)藥衛(wèi)生領域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植,細胞膜的流動性,,滅活病毒、PEG、電激等,,融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞,誘導的手段？,,融合后細胞的類型？,AB雜種細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？,三種AA、AB、BB,含兩種生物的遺傳物質(zhì),1.2動物細胞融合過程,原理？,1.2動物細胞融合過程,為什么滅活的病毒能作誘

38、導劑？,滅活喪失感染性,保留融合活性,,,,,,,,,,,,,,,,,,1.4 比較動、植物細胞雜交技術,抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法,抗原,反復注射動物,從動物的血清中分離抗體,,,該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。,,,如何解決這個問題呢？,單克隆抗體！,讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念,人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內(nèi)的B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質(zhì)單

39、一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。,2.1單克隆抗體的概念,,,,單克隆抗體：單個B細胞克隆產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體,一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細胞能無限增殖,,雜交瘤細胞,,動物細胞培養(yǎng)技術,設計方案：,動物細胞融合技術,單克隆抗體,既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量增殖的細胞,1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗,①為什么給小鼠注射特定的

40、抗原蛋白？② 會有幾種融合方式？ ③ 雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？ ④ 是否所有的雜交瘤細胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤ 如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？,,BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤）,（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活,獲得產(chǎn)生相應抗體的B細胞,（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞,,√,體外培養(yǎng),小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng),,,雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。,單克隆抗體,雜交細胞,雜

41、交瘤細胞,骨髓瘤細胞,特異性雜交瘤細胞,雜交瘤細胞系,提取,,經(jīng)過免疫的B淋巴細胞,,動物細胞融合技術,動物細胞培養(yǎng)技術,單克隆抗體的制備過程：,特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖,特點：特異性強靈敏度高可大量制備,,強調(diào)：,是其他動物細胞工程技術的基礎。,,,,,動物細胞培養(yǎng)技術,單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？,你學會了嗎？,2.3單克隆抗體的應用,1、診斷試

42、劑——最廣泛應用準確、高效、簡易、快速,單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。,“生物導彈” ＝單克隆抗體＋藥物 單抗導向，藥物為彈頭,2、治療疾病和運載藥物,主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。,例．下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。,（1）_______________技術是單

43、克隆抗體技術的基礎。（2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HAT培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。（3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是________________。（4）動物細胞融合除了采用植物細胞原生質(zhì)體融合常用的誘導劑外，還可以采用________________。（5）選出的雜交瘤細胞既具備骨髓瘤細胞的_______________特點，又具備淋巴細胞的_______________特點。（6）淋巴細胞是由

44、動物體_________中的______________細胞分化、發(fā)育而來。（7）雜交瘤細胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是____________。,動物細胞培養(yǎng),選擇,特異性強,靈敏度高,滅活的病毒,在體外大量增殖,分泌特異性抗體,骨髓,造血干細胞,主動運輸,1975年Kohler和Milstein的單克隆抗體技術在生產(chǎn)和使用抗體方面開創(chuàng)了新紀元，圖10示單克隆抗體制備流程階段示意圖。請據(jù)圖回答下列問題：（1）該技術是在

45、動物細胞培養(yǎng)技術和 技術的基礎上發(fā)展起來的。（2）圖10中細胞A體外培養(yǎng)不具有分裂能力，但能分泌 ，細胞B體外培養(yǎng)能夠 。（3）動物細胞融合常用的方法是 。,圖10,動物細胞融合,分泌特異性抗體,無限增殖,PEG（滅活的病毒、電激）,圖10,（4）細胞融合是隨機的過程，在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)，要篩選出

46、細胞。在細胞培養(yǎng)過程中，為了促進細胞攝取葡萄糖，常向培養(yǎng)液中加入 (激素) （5）要獲得大量的單克隆抗體，可對獲得的雜交瘤細胞進行 培養(yǎng)。,體外或體內(nèi),雜交瘤,胰島素,,例人類在預防與診療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，且疾苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：,提取,請回答：（1）過程①代表的是

47、 。（2）過程②構建A基因表達載體時，必須使用 和 兩種工具酶。,DNA連接酶,逆轉錄,限制性核酸內(nèi)切酶,（3）過程③采用的實驗技術是 ，獲得的X是 。（4）對健康人進行該傳染病免疫預防時，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的 所制備的疫苗。 對該傳染病疑似患者確診時，可以疑似患者體內(nèi)分離病毒，與已知病毒進行 ___

48、______ 比較；或用圖中的 ___ ____ 進行特異性結合檢測。,抗A蛋白的單克隆抗體,細胞融合 雜交瘤細胞,A蛋白,核酸（基因）序列,,(4)在培養(yǎng)時通過________分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規(guī)抗