第六章食品中藥物殘留的檢測分析

1、1,第六章 食品中藥物殘留的檢測,2,第一節(jié) 藥物殘留概述,一、藥物殘留的概念及分類 現(xiàn)代化的畜禽生產(chǎn)中，普遍使用抗生素類藥物。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，抗生素可以防治病蟲害，刺激植物生長，提高產(chǎn)量。造成了抗生素在食品中的殘留。,3,,為了達到投入少量的飼料而獲得更多畜產(chǎn)品的目的，往往使用激素來促進畜禽的生長發(fā)育。常用于食品動物的激素為性激素具有促進生長發(fā)育、增加體重和同步發(fā)情等作用，廣泛用于畜牧業(yè)生

2、產(chǎn)中，通過飼料添加劑或皮下置入等方法而攝入牲畜體內(nèi)，造成了肉食品中激素殘留而影響人體健康。 食用含有藥物殘留的食品，使人類的健康受到了極大的危害，引起了世界各國的關(guān)注。因此，對食品中藥物殘留情況，必須加以監(jiān)測，以保證食用安全。,4,藥物使用后，部分藥物被分解或直接排出體外，另一部分將殘留在畜禽體內(nèi)，這種殘留稱為藥物殘留(residue of drugs， residue of veterinary drugs)。,,5,主要殘留藥

3、物有以下幾類：,1．抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、四環(huán)素、泰樂菌素等。 2．呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。 3．磺胺藥類； 4. 抗球蟲藥； 5. 激素藥類； 6. 驅(qū)蟲藥類。,6,二、藥物對食品的污染及危害,(一)藥物對食品的污染 1．預(yù)防和治療畜禽疾病 2．作為飼料添加劑使用 3．保鮮：在食品的保鮮過程中，有時加

4、入某種抗生素以抑制微生物的生長、繁殖，使用后也會對食品造成污染。,7,（二）藥物的殘留對人體的危害,藥物雖然有預(yù)防和治療疾病的作用，但同時對機體也產(chǎn)生有害的作用。藥物與毒物之間并無明顯的界限，有些毒物在適當(dāng)?shù)膭┝繒r具有治療作用，而所有藥物過量或應(yīng)用時間過長，均有毒性。殘留的藥物對人體的不良影響主要有： 1．毒性作用 2．使某些細菌產(chǎn)生抗藥性 3．過敏反應(yīng) 4．造成菌群失調(diào) 5．

5、致癌作用：現(xiàn)已證明殘留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌作用。,8,三、各種藥物的使用原則,（一）合理配伍用藥 畜禽發(fā)生疾病以后要正確診斷，合理用藥，能用一種藥的情況下不用多種藥。（二）按國家規(guī)定的范圍、劑量使用藥物 各國政府都嚴格規(guī)定了各種藥物的使用條件。多數(shù)國家規(guī)定對生命期短的食用動物禁止應(yīng)用雌激素。,9,（三）使用獸用專用藥物 一些國家規(guī)定，凡是人類經(jīng)常使用的抗生素及其藥物不能作為畜禽飼料添加劑。世界衛(wèi)生

6、組織不主張用鏈霉素飼喂動物，以免產(chǎn)生耐藥性菌株。 （四）要有一定的休藥期 所謂的休藥期是指食品動物從停止給藥到許可屠宰或它們的產(chǎn)品許可上市的間隔時間。 此時間的規(guī)定是根據(jù)上述物質(zhì)在動物體內(nèi)代謝的消除率和殘留量不致影響人體健康為依據(jù)的。,10,第二節(jié) 食品中抗生素的測定,抗生素種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，測定方法各不相同。因而給檢測工作帶來了許多困難。抗生素的測定方法進展很快。主要可分為微生物測定法，化學(xué)測定法

7、和物理測定法三大類。,11,,其中以微生物測定法應(yīng)用較廣。因其測定原理基于抗生素對微生物的生理機能和代謝作用的抑制，所用試劑數(shù)量少，儀器簡單。如牛乳中TTC測定法，肉中四環(huán)素杯蝶測定法都屬于微生物分析法，但這類方法測定時間較長，且結(jié)果誤差較大。,12,化學(xué)測定法和物理測定法則利用抗生素中某些基團的特殊性質(zhì)或反應(yīng)來測定其含量的分析方法。包括比色法、熒光分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法。,13,一、高效液相色譜 HPLC,（一）高效

8、液相色譜法的特點 1．分離效能高 2．選擇性高 3．檢測靈敏度高 4．分析速度快 對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子質(zhì)量大的有機物原則上都可用HPLC進行分離、分析。目前已廣泛應(yīng)用于化工、食品、醫(yī)藥、生化、衛(wèi)生、環(huán)境保護和高能化合物等生產(chǎn)和科研工作中。,14,二、四環(huán)素類抗生素殘留量的測定,食品中四環(huán)素類抗生素的測定多采用微生物法。 （一）原理 樣品經(jīng)提取，用

9、離子交換樹脂分離，甲醇溶劑洗脫，經(jīng)濃縮，殘渣用Mcllvaine緩沖液溶解，經(jīng)熒光鑒定，然后用微生物法進行定量測定。本方法的最低檢出量為0.05mg/kg。,15,,（二）其它抗生素也可用此法進行測定，只是試驗的菌種不同或培養(yǎng)基不同。測定青霉素為金黃色葡萄球菌，鏈霉素或雙氫鏈霉素為枯草桿菌（6633），氯霉素為卵黃色八疊球菌（9341），新生霉素為白色葡萄球菌。,16,三、鏈霉素殘留量的測定（比色分析法）,（一）原理 在酸性條件下，鏈

10、霉素可與二硝基苯肼反應(yīng)生成黃色的鏈霉素二硝基苯腙；多余的試劑經(jīng)乙酸丁酯提取除去后，于430nm波長處測吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中鏈霉素的含量。,17,四、鮮乳中抗生素殘留量的測定（TTC試驗）,（一）原理 當(dāng)乳中含有抗生素時，標(biāo)準(zhǔn)菌株嗜熱鏈球菌的生長受到抑制，不能將指示劑2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）還原為無色。反之，當(dāng)乳中抗生素不存在時，加入的標(biāo)準(zhǔn)菌株，就會大量生長繁殖，而且將TTC還原為紅色化合物。其紅色強度與細菌數(shù)

11、量成正比。 本法對各種抗生素的最低檢出量：青霉素為0.004IU/mL，鏈霉素為0.5IU/mL，慶大霉素為0.4IU/mL,18,（二）注意事項 1.本法的正確性與菌種的活力有密切關(guān)系。如菌種活力減弱時，應(yīng)多次反復(fù)傳代加強活力。 2.每次檢驗每個樣品應(yīng)一式二份，另外要作陰性、陽性對照各2管，陰性對照管作無抗生素乳9mL，陽性對照管用無抗生素乳9mL加抗生素。

12、 3.水浴培養(yǎng)要避光，保持37℃，水面高于被檢樣品，判斷要迅速；檢樣經(jīng)80℃水浴加熱5min，要嚴格掌握。 4.制備培養(yǎng)基的乳要絕對無抗生素存在；操作所用試管、吸管均須經(jīng)滅菌。,,19,第三節(jié) 食品中激素的測定,由于動物性食品中性激素的含量極微，所以一般的測定方法受到了限制，較常用的方法有薄層色譜法、熒光分析法、氣相色譜法和高效液相色譜法等。其中高效液相色譜法具有更大的優(yōu)越性，并有取代其它方法之勢。

13、 一、性激素總量的測定（薄層色譜法） （一）原理 樣品中的性激素經(jīng)有機溶劑提取、濃縮，在硅膠G薄層板上點樣、展開后，以硫酸顯色，與標(biāo)準(zhǔn)斑點進行比較，從而達到定性和半定量的目的。,20,硅膠H 硅膠中未加入粘合劑硅膠G 硅膠中加入粘合劑石膏硅膠S 硅膠中加入粘合劑淀粉硅膠HF254 硅膠H中加入波長254nm熒光物質(zhì)硅膠GF254 硅膠G中加入波長254nm熒

14、光物質(zhì),常見的幾種硅膠吸附劑,21,（二）注意事項 1.薄層色譜法可用于性激素的鑒別、半定量測定以及含量測定前的分離。 2.由于性激素的種類多，故所用的溶劑系統(tǒng)、吸附劑、展開劑和顯色劑不能一概而論?？筛鶕?jù)具體情況，挑選效果最佳者使用。,22,二、雌激素殘留量的測定（包括己烯雌酚的測定）（熒光分光光度法),（一）熒光分光光度法 1. 原理 樣品中雌激素經(jīng)鹽酸水解為甾體綴合物，用有機溶劑提取后，再經(jīng)硫酸

15、處理，在紫外光照射下，產(chǎn)生藍色熒光；其激發(fā)波長542nm，發(fā)射波長560nm，根據(jù)熒光強度，可測定雌激素的含量。,23,2. 注意事項 (1)本法測定的是雌激素的總量，包括雌酮、雌二醇和雌三醇。 (2)操作過程中加入氫醌，可防止熒光產(chǎn)物氧化，增進熒光的穩(wěn)定性；二氯甲烷溶劑中加入對—硝基苯酚也起增進熒光穩(wěn)定性的作用。 (3)因為雌激素有酚羥基存在而呈弱酸性，用碳酸氫鈉緩沖液（pH 10.5）洗滌，可將那

16、些強酸性物質(zhì)洗掉。,24,(4)測定中用NaOH振搖，可使雌激素轉(zhuǎn)入NaOH 液層，而中性甾體仍留在有機相中，起到清除雜質(zhì)的作用。 (5)在作乙醚提取之前，加入固體碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至10，是乙醚定量提出雌激素的關(guān)鍵。,25,(二）液相色譜法,1.原理 試樣勻漿后，以甲醇提取過濾，注入HPLC柱中，以紫外檢測器鑒定。于波長230nm處測定吸光度，同條件下繪制工作曲線，己烯雌酚含量與吸光度值在一定濃度范圍內(nèi)成正比，試樣與工

17、作曲線比較定量。本法適用于新鮮雞肉、牛肉、豬肉、羊肉中己烯雌酚殘留量的測定。,26,,2.分析步驟 （1）提取及凈化：甲醇 （2）色譜條件 （3）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 （4）測定,27,3. 注意事項 （1）對主要影響因素甲醇、磷酸二氫鈉、pH采用正交試驗選擇最佳實驗條件。 （2）本法采用兩次提?。状迹?，離心、過濾，回收率高，但靈敏度不太高。 （3）使用流動相時，預(yù)先進行超聲波脫氣，以防氣泡堵塞色譜柱。,